Принцип и методика постановки vi гемагглютинации. Реакция непрямой гемагглютинации
реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
В основе РГА лежит способность эритроцитов склеиваться при адсорбции на них определенных антигенов. В качестве исследуемого материала при гемагглютинации используют аллантоисную, амниотическую жидкость, суспензию хорионаллантоисных оболочек куринных эмбрионов, взвеси и экстракты из культур или органов животных, зараженных вирусами, нативный инфекционный материал. РГА не является серологической, поскольку происходит без участия иммунной сыворотки и используется для выбора рабочего разведения антигена для постановки РТГА или наличия антигена (вируса) в исследуемом материале (например, при гриппе). В реакции используются эритроциты животных, птиц, человека I (0) группы крови.
Для постановки ориентировочной РГА на предметное стекло наносят каплю 5% взвеси эритроцитов и каплю испытуемого материала, тщательно смешивают. При положительном результате через 1-2 минуты макроскопически наблюдают появление хлопьевидной агглютинации эритроцитов.
Для постановки РГА в развернутом ряду в лунках полистероловых планшетов готовят двукратно возрастающие разведения исследуемого материала на физиологическом растворе в объёме 0,5 мл. Во все пробирки вносят по 0,5 мл 0,25 - 1% взвеси эритроцитов. Результаты учитывают после полного оседания эритроцитов в контроле (эритроциты + физиологический раствор). Реакцию учитывают по характеру осадка эритроцитов. В положительных случаях степень агглютинации отмечают плюсами. Четырьмя плюсами оценивают реакцию, имеющую вид тонкой пленки из склеившихся эритроцитов, покрывающей дно пробирки (зонтик), реакцию с просветами в пленке отмечают тремя плюсами, наличие пленки с фестончатыми кружевными краями из склеившихся эритроцитов обозначают двумя плюсами, хлопьевидный осадок эритроцитов, окруженный зоной комочков агглютинированных эритроцитов соответствует одному плюсу. Резко очерченный осадок эритроцитов, неотличимый от контроля показывает отсутствие агглютинации. За титр принимают предельное разведение исследуемого материала, вызвавшее агглютинацию эритроцитов на два плюса.
При положительном результате РГА исследование продолжают, определяя тип выделенного вируса с помощью реакции торможения гемагглютинации типоспецифическими сыворотками.
РТГА основана на свойстве антисыворотки подавлять вирусную гемагглютинацию, так как нейтрализованный специфичными антителами вирус утрачивает способность агглютинировать эритроциты. При ориентировочном типировании вирусов используют капельный метод на стекле. Для окончательного установления типовой принадлежности выделенного вируса и титрования антител в сыворотках ставят развернутую РТГА в пробирках или в лунках. С этой целью готовят двухкратные разведения сывороток на физиологическом растворе и разливают по 0,25 мл. К разведениям сыворотки прибавляют по одной капле материала, содержащего вирус и по одной капле 1% взвеси эритроцитов.
При использовании РТГА для определения типа вируса, используют типоспецифические сыворотки, которые добавляют к равному объему рабочего разведения антигена. Типовую принадлежность выделенного вируса устанавливают по специфической иммунной сыворотке, показавшей наивысший титр антител к этому вирусу.
РГА и РТГА широко применяется для диагностики вирусных инфекций (клещевой энцефалит, грипп и др.) с целью обнаружения специфических антител и для идентификации многих вирусов по их антигенам.
Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)
РИФ основана на соединении антигенов бактерий, риккетсий и вирусов со специфическими антителами, меченными флюоресцирующими красителями (флуоресцеинизотиоцианат, родамин, В-изотицианит, лиссатинродамин В-200, сульфохлорид и др.), имеющими реакционно-способные группы (сульфохлорид, изотиоцианит и др.). Эти группы соединяются со свободными аминогруппами молекул антител, которые не теряют при обработке флуорохромом специфического сродства к соответствующему антигену. Образовавшиеся комплексы АГ–АТ становятся хорошо видимыми, ярко светящимися структурами под люминесцентным микроскопом (рис. 48). С помощью РИФ можно обнаруживать небольшие количества бактериальных и вирусных антигенов. Метод РИФ используют в двух вариантах: прямой и непрямой метод.
Прямой метод основан на непосредственном соединении антигена с меченым антителом. Непрямой метод – на поэтапном выявлении комплекса АГ–АТ с помощью флуоресцентных красителей. Первый этап заключается в образовании иммунных комплексов определенного антигена со специфическими антителами. Второй этап – в выявлении этого комплекса путем обработки его меченым антигаммаглобулином.
Преимущество РИФ – простота, высокая чувствительность, скорость получения результата. РИФ применяется как метод ранней экспресс-диагностики гриппа, дизентерии, малярии, чумы, туляремии, сифилиса и др. Для проведения такого исследования используется люминесцентный микроскоп.
Радиоиммунологический анализ (РИА)
РИА – один из самых чувствительных методов иммунодиагностики. Его применяют для выявления антигена вируса гепатита В, у больных вирусным гепатитом. Для этого к исследуемой сыворотке добавляют референс-сыворотку (сыворотку, содержащую антитела к вирусу гепатита В). Смесь инкубируют 1-2 сут при температуре 40 0 С, затем добавляют референс-антиген (антиген, меченный изотопом 125 J) и продолжают инкубацию еще 24 часа. К образовавшемуся комплексу антиген-антитело добавляют преципитирующие антииммуноглобулины против белков референс-сыворотки, что приводит к образованию преципитата (рис. 49). Результат учитывают по наличию и числу импульсов в преципитате, зарегистрированных счетчиком. При наличии в исследуемой сыворотке антигена, связавшегося со специфическими антителами, последние не вступают в связь с меченным антигеном и, поэтому, он не обнаруживается в преципитате. Таким образом, в основу РИА положен принцип конкурентного взаимодействия определяемого антигена и известного количества меченного антигена с активными центрами антител.
Иммуноферментный метод (ИФА)
Метод используется для выявления антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, b-галактозой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат и хромоген. Субстрат расщепляется ферментом, а его продукты деградации вызывают химическую модификацию хромогена. При этом хромоген меняет свой цвет – интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител (рис. 50).
Наиболее распространен твердофазный ИФА, при котором один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе. В качестве твердого носителя используются микропанели из полистирола. При определении антител в лунки с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови больных, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом и смесь растворов субстрата для фермента и хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют не связавшиеся реагенты путем тщательного промывания. При положительном результате изменяется цвет раствора хромогена.
Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителом. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, а за тем – смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.
ИФА применяют для диагностики заболеваний, вызванных вирусными и бактериальными возбудителями.
РАЗДЕЛ VII. ОСНОВЫ ВИРУСОЛОГИИ
Грамотно проведенный анализ крови помогает обнаружить возбудителей различных сложных заболеваний в организме на ранних стадиях их развития, а порой даже до проявления клинических симптомов болезни. Очень часто врачи назначают пациентам проведение анализа на реакцию агглютинации. Дальше мы разберемся с тем, что это — РПГА анализ крови, когда он применяется и о чем может поведать?
Принцип действия
Реакция непрямой гемагглютинации (называемая также реакцией пассивной гемагглютинации он же РПГА, РНГА) происходит в случае, когда на адсорбировавшие антиген эритроциты воздействуют иммунной сывороткой, которая соответствует данному антигену.
Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности данный метод значительно превосходит остальные серологические анализы. Поэтому ее часто используют для выявления заболеваний, вызванных бактериями или риккетсиями. В качестве антигенов для такого анализа могут выступать бактериальные экстракты, очищенные антигены различных микробов, компоненты бактериальных вакцин.
После попадания болезнетворной бактерии в организм человека, в нем начинают продуцироваться специфические и неспецифические антитела, формируя определенный иммунный ответ. В случае с сифилисом, возбудителем которого считается бледная трепонема, принадлежащая к грамотрицательным спирохетам, в крови человека вырабатываются нетрепонемные или трепонемные антитела. На их выявлении основаны лабораторные диагностические исследования, которые должны подтвердить или опровергнуть наличие возбудителя вируса в организме.
При РПГА эритроциты, поверхность которых адсорбировала антигены бледной трепонемы, в случае добавления сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, зараженного сифилисом, склеиваются друг с другом, то есть происходит их агглютинация.
Достоверность исследования
Важно помнить, что антитела к бледной спирохете начинают появляться в организме инфицированных людей через 2-4 недели после заражения, а в некоторых случаях этот срок может растягиваться и до 6 недель.
По этой причине чувствительность анализа на РПГА на первичной стадии развития болезни составляет около 86%, что значительно уступает точности диагностики больных на двух следующих стадиях. Чувствительность анализа для таких пациентов, как и для носителей скрытого сифилиса, достигает 99-100%.
Однако реакция пассивной гемагглютинации имеет очень высокую специфичность, которая достигает уровня 96-100%.
Это дает возможность применять данное обследование для подтверждения диагноза в случае получения положительной реакции предварительного нетрепонемного исследования, например реакции микропреципитации РМП.
Учитывая, что чувствительность трепонемных анализов, включая РПГА, существенно превышает чувствительность нетрепонемных методов, такие обследования стали все чаще назначать при проведении скрининговых анализов на сифилис. Однако при получении положительной реакции скринингового исследования для уточнения диагноза птребуется провести еще один специфический (трепонемный) анализ, но не РПГА.
Расшифровка анализа
При добавлении сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, инфицированного сифилисом, к реагенту, с которым проводится исследование, происходит агглютинация эритроцитов, вследствие чего они выпадают в осадок.
На количество склеенных эритроцитов влияет уровень содержания антител в сыворотке. Поэтому пассивная гемагглютинация не только показывает присутствие антител, но и позволяет установить их количество. Результат исследования представлен уровнем титра антител.
Положительная реакция говорит о наличии возбудителя болезни в организме пациента. Однако в процессе проведения диагностики возможно появление ложноположительных реакций, количество которых статистически не превышает уровня 0,05-2,5% от общего числа исследований.
Положительная реакция РПГА у людей, не инфицированных сифилисом, может проявляться в случае наличия:
- системных заболеваний соединительной ткани,
- в крови пациента антител к возбудителям, похожим на бледную трепонему,
- физиологических патологий, например инфаркта миокарда,
- гепатита В или С,
- онкологических заболеваний,
- тифа, лептоспироза, туберкулеза,
- ВИЧ-инфекции,
- боррелиоза клещевой этиологии,
- обширных травм или переломов,
- беременности,
- в случае проведения инъекций наркотических препаратов.
В большинстве случаев ложноположительные реакции сопровождаются низким титром. Высокие показатели титра типичны для вторичной стадии болезни и ранее скрытого сифилиса. Однако они могут появиться и при ложноположительной реакции у пациентов со злокачественными новообразованиями.
У людей, хотя бы однажды переболевших сифилисом, реакция РПГА до конца жизни остается положительной.
Редкими исключениями могут служить те ситуации, когда болезнь была выявлена на ранней стадии развития, после чего была проведена интенсивная и эффективная терапия. Поэтому анализ РПГА не может использоваться для оценки динамики выздоровления или сравнительной диагностики ранней или поздней стадий болезни.
При получении положительной реакции необходимо обследовать членов семьи заболевшего человека и людей, вступавших с ним в половой контакт.
Отрицательная реакция может быть получена в следующих случаях:
- человек не болен сифилисом,
- неправильно взята кровь для исследования,
- после заражения прошло 2-4 недели, и выработка антител еще не началась.
В любом случае результат исследования необходимо оценивать в сочетании с дополнительными лабораторными и анамнестическими показателями.
Кому показан анализ?
Врач может направить сдавать кровь на РПГА пациентов в следующих случаях:
- при наличии клинических проявлений сифилиса: язвенных высыпаний, увеличенных лимфоузлов, диффузной алопеции и других,
- при подозрении на возможное инфицирование в случае контакта с уже заболевшими людьми,
- доноров, желающих сдать кровь,
- людей, проходящих ежегодные профилактические осмотры или оформляющих санитарные книжки,
- пациентов с положительной реакцией скринингового теста,
- перед госпитализацией в стационарное лечебное учреждение,
- при предоперационном обследовании,
- для выявления возбудителей сальмонеллеза, дифтерии, дизентерии методом проведения РПГА с соответствующим диагностикумом.
Порядок проведения исследования
На исследование отправляют сданный пациентом образец венозной крови. Для того, чтобы не получить ошибочное заключение, пациенту следует ответственно отнестись к подготовке к анализу. Чтобы результаты теста были достоверными, следует придерживаться таких рекомендаций:
- Сдавать анализ следует только натощак.
- В день проведения анализа можно пить минеральную воду без газа в минимальных количествах.
- Как минимум 30 минут до проведения анализа нельзя курить, а лучше увеличить это время до нескольких часов.
- Прямой запрет налагается на употребление алкогольных напитков.
- Пациенты, которым необходимо регулярно применять какие-либо лекарственные препараты, обязательно должны проинформировать об этом врача, направляющего на обследование.
- В случае недомогания или плохого самочувствия нужно поставить в известность медсестру, выполняющую забор крови, или врачу амбулатории, где нужно сдать анализ.
Отнеситесь ответственно не только к вопросу, где сдать анализ, но и к подготовке к обследованию.
Диагностика других инфекционных заболеваний
Не следует думать, что такое исследование, как РПГА может проводиться только для выявления в организме возбудителя сифилиса.
Анализ с сальмонеллезным диагностикумом позволяет выявить наличие инфекции в пищеварительной системе – сальмонеллы. Начиная с четвертого дня после заражения, организм продуцирует антитела к антигенам сальмонеллы, выявить которые помогает метод РПГА. Отрицательный результат говорит об отсутствии инфекции, а про ее наличие скажет положительный титр, нарастающий от 1:200 до 1:800 в острой фазе.
Метод проведения РПГА с дифтерийным маркером позволяет диагностировать дифтерию и оценить иммунитет после проведения вакцинации. Антитела начинают вырабатываться иммунной системой уже на следующий после заражения день, и остаются в организме на протяжении нескольких недель. Чувствительность данного анализа превосходит бактериологический метод исследования. Титр 1:80 подтверждает наличие дифтерии в организме.
Дизентерийный маркер при РПГА наиболее точно выявляет шигеллез (бактериальную дизентерию), даже по сравнению методом лабораторной диагностики посредством бактериального посева. Если больной не получает качественного лечения, то болезнь перетекает в хронический процесс, при котором часто случаются рецидивы. Анализ позволяет диагностировать острую и хроническую фазу диареи, выявить возбудителя дизентерии, отличить бактериальный шигеллез от колоректального рака, эндокринных нарушений или воспаления толстой кишки. Негативная реакция говорит об отсутствии бациллы, а подтверждает ее наличие титр 1:80 для малышей или 1:320 для взрослых.
Проведение исследование с коревым маркером позволяет определить заболевание корью. Такое обследование может стать альтернативой часто проводимому для диагностики кори анализу РТГА.
Итак, РПГА анализ крови – что же это? Подводя итоги, можно смело утверждать, что это современный, высокочувствительный и достоверный метод диагностики различных заболеваний бактериологической этиологии.
Вконтакте
В лаборатории пользуются двумя различными по механизму действия реакциями гемагглютинации.
Первая РГА относится к серологическим. В этой реакции эритроциты агглютинируются при взаимодействии с соответствующими антителами (гемагглютининами). Реакцию широко используют для определения групп крови.
Вторая РГА не является серологической. В ней склеивание эритроцитов вызывают не
антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита - эритроциты барана. Эта реакция позволяет судить о наличии того или иного вируса в исследуемом материале.
Реакцию проводят в пробирках или на специальных пластинках с лунками. Исследуемый на наличие вируса материал разводят изотоническим раствором от 1:10 до 1:1280; 0,5 мл каждого разведения смешивают с равным объёмом 1-2% взвеси эритроцитов. В контроле 0,5 мл эритроцитов смешивают с 0,5 мл изотонического раствора. Пробирки ставят на 30 минут в термостат, а пластины оставляют при комнатной температуре на 45 минут.
Учёт результатов. При положительном результате реакции на дне пробирки или лунки выпадает осадок эритроцитов с фестончатыми краями («зонтик»), покрывающий всё дно лунки. При отрицательном результате эритроциты образуют плотный осадок с ровными краями («пуговку»). Такой же осадок должен быть в контроле. Интенсивность реакции выражают знаками «+». Титром вируса является максимальное разведение материала, в котором происходит агглютинация.
Реакция торможения гемагглютинации
Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и лишают способности агглютинировать эритроциты, т. е. тормозят реакцию гемагглютинации. Эта реакция позволяет определить вид и тип вирусов.
Постановка реакции. 0,25 мл противовирусной сыворотки смешивают с равным объёмом материала, содержащего вирус. Смесь встряхивают и помещают в термостат на 30 минут, после чего добавляют по 0,5 мл"1-2% взвеси эритроцитов.
Учёт результатов. При правильной постановке опыта в контроле сыворотки и эритроцитов должна образоваться «пуговка» - нет агглютинирующего эритроциты фактора; в контроле антигена образуется «зонтик» - вирус вызвал агглютинацию эритроцитов. Если сыворотка гомологична изучаемому вирусу, образуется «пуговка» - сыворотка нейтрализовала вирус.
Реакция непрямой гемагглютинации
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РИГА) основана на том, что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приобретают способность агглютинироваться при взаимодействии с антителами к адсорбированному антигену.
Постановка реакции. Сыворотку прогревают 30 минут при 56 °С, разводят последовательно в соотношении 1:10 - 1:1280 и разливают по 0,25 мл в пробирки или лунки, куда затем добавляют по 2 капли эритроцитов с адсорбированными на них антигенами.
Контроли: взвесь эритроцитов с адсорбированными на них антигенами с заведомо иммунной сывороткой, взвесь эритроцитов с адсорбированными на них антигенами с нормальной сывороткой; взвесь нормальных эритроцитов с испытуемой сывороткой. В первом контроле должна произойти агглютинация, во втором и третьем её не должно быть.
Контрольные вопросы.
1. О чем свидетельствует положительный результат РГА между эритроцитами и исследуемым на наличие вируса материалом?
2. Произойдет ли реакция агглютинации эритроцитов, если к ним добавить вирус и соответствующую ему сыворотку? Как называется реакция, выявляющая этот феномен?
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №12.
Реакция связывания комплемента.
Реакция связывания комплимента (РСК) основана на том, что" специфический комплекс антиген - антитело всегда адсорбирует на себе (связывает) комплемент.
Эту реакцию широко применяют при идентификации антигенов ив серодиагностике инфекций, особенно заболеваний, вызванных спирохетами (реакция Вассермана), риккетсиями и вирусами.
РКС-сложная серологическая реакция. В ней участвуют комплемент и две системы антиген-антитело. По существу, это две серологические реакции.
Правая система-основная состоит из антигена и антитела (один известный, др. нет). К ней добавляют определенное количество комплемента. При соответствии антигена и антитела этой системы они соединятся и свяжут комплимент. Образовавшийся комплекс мелкодисперсный и не виден.
Об образовании этого комплекса узнают с помощью второй системы гемолитической или индикаторной. В нее входят эритроциты барана (антиген) и соответствующая им гемолитическая сыворотка (антитело), т.е. готовый имунный комплекс. В этой системе лизис эритроцитов может произойти только в присутствии комплемента. Если комплемент связан первой системой, то во второй системе гемолиза не будет- т.к. нет свободного комплемента. Отсутствие гемолиза (содержимое пробирки мутное или на дне ее осадок эритроцитов) регистрируют как положительный результат РСК.
Если в первой системе антиген не соответствует антителу, то имунный комплекс не образуется и комплимент останется свободным. Оставшийся свободным, комплимент участвует во второй системе, вызывая гемолиз, результат РСК отрицательный(содержимое пробирок прозрачно-"лаковая кровь").
Компоненты, реакции связывания комплемента:
1. Антиген - обычно лизат, экстракт, гаптен,
реже взвесь микроорганизмов.
2. Антитело - сыворотка больного.
3. Комплемент - сыворотка морских свинок.
4. Антиген - эритроциты барана.
5. Антитело - гемолизин к эритроцитам барана.
6. Изотонический раствор.
Ввиду того, что в РСК участвует большое количество сложных компонентов,
они должны быть предварительно оттитрованы и взяты в реакцию в точных количествах и в равных объемах: по 0,5 или 0,25 , реже по 0,2,1,25 или 1,0 мл (большие объемы дают более точный результат). Титрование компонентов реакции проводят в том же объеме, в каком ставят опыт, заменяя недостающие ингредиенты изотоническим раствором.
Оглавление темы "Иммуномодуляторы. Иммунодиагностика инфекционных заболеваний.":Развернутая реакция агглютинации (РА ). Для определения AT в сыворотке крови больного ставят развёрнутую реакцию агглютинации (РА) . Для этого к серии разведений сыворотки крови добавляют диагностикум - взвесь убитых микроорганизмов или частицы с сорбированными Аг. Максимальное разведение, дающее агглютинацию Аг, называют титром сыворотки крови.
Разновидности реакции агглютинации (РА ) для выявления AT - кровяно-капельная проба на туляремию (с нанесением диагностикума на каплю крови и появлением видимых белёсых агглютинатов) и реакция Хаддльсона на бруцеллёз (с нанесением на каплю сыворотки крови диагностикума, окрашенного генциановым фиолетовым).
Ориентировочная реакция агглютинации (РА)
Для идентификации выделенных микроорганизмов ставят ориентировочную РА на предметных стёклах. Для этого к капле стандартной диагностической антисыворотки (в разведении 1:10, 1:20) добавляют культуру возбудителя. При положительном результате ставят развёрнутую реакцию с увеличивающимися разведениями антисыворотки.
Реакцию считают положительной, если агглютинацию наблюдают в разведениях, близких к титру диагностической сыворотки.
О-Аг . Соматические О-Аг термостабильны и выдерживают кипячение в течение 2 ч. При взаимодействии с AT образуют мелкозернистые агрегаты.
Н-Аг . Н-Аг (жгутиковые) термолабильны и быстро разрушаются при 100 °С, а также под действием этанола. В реакциях с Н-антисывороткой через 2 ч инкубации образуют рыхлые крупные хлопья (образованы бактериями, склеившимися жгутиками).
Vi-Ar брюшнотифозных бактерий относительно термостабилен (выдерживает температуру 60-62 °С в течение 2 ч); при инкубации с Vi-антисывороткой образуется мелкозернистый агглютинат.
Реакции прямой гемагглютинации
Простейшая из подобных реакций - агглютинация эритроцитов, или гемагглютинация, применяемая для определения групп крови в системе AB0. Для определения агглютинации (или её отсутствия) используют стандартные антисыворотки с анти-А и анти-В-агглютининами. Реакция называется прямой, так как исследуемые Аг - естественные компоненты эритроцитов.
Общие с прямой гемагглютинацией механизмы имеет вирусная гемагглютинация. Многие вирусы способны спонтанно агглютинировать эритроциты птиц и млекопитающих, их добавление к суспензии эритроцитов вызывает образование агрегатов из них.
К факторам вирулентности сальмонеллы брюшного тифа относят Vi-антиген, представляющий собой капсульныи полисахарид, защищающий их от фагоцитоза и комплемента. Vi-антиген отсутствует у подавляющего большинства других сальмонелл. За счет микрокапсулы S. typhi и S. paratyphi прилипают к энтероцитам тонкой кишки. После адгезии имеет место частичная колонизация слизистой. При этом большая часть сальмонелл попадает в пейеровы бляшки и фагоцитируется макрофагами, в которых активно размножаются. Из лимфоузлов сальмонеллы попадают в общий ток лимфы, а затем в кровь, вызывая бактериемию. С кровью они проникают в костный мозг и селезенку, колонизируя отдельные участки этих органов и заносятся в желчный пузырь. Там они интенсивно размножаются, поскольку желчь является для них элективной питательной средой. С желчью сальмонеллы проникают в двенадцатиперстную, а затем вторично в тонкую кишку и пейеровы бляшки, где присутствуют Т-эффекторы ГЗТ, выделяющие цитокины. Это приводит, в конечном итоге, к иммунному воспалению, в результате которого может произойти разрыв стенки кишки и возникновение перитонита. При разрушении сальмонелл освобождается эндотоксин, после чего начинается интоксикация организма.