Рск анализ. Серологические методы лабораторной диагностики сифилиса

Непрямые методы диагностики сифилиса.

Для диагностики сифилиса применяется множество методов исследования, различающихся по технике проведения и предназначению. Прямые методы направлены на обнаружение возбудителя в исследуемом материале с помощью микроскопии (микроскопия в темном поле и др.) или ПЦР.

Помимо методов прямой детекции бледной трепонемы (T. pallidum), при обследовании на сифилис широкое применение получили непрямые (серологические ) методы исследования, выявляющие антитела к возбудителю сифилиса в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости. К непрямым методам диагностики сифилиса относятся серологические реакции ИФА, РПГА, КСР, РИФ и РИФ-абс, РИБТ, ПЦР, экспресс-метод, иммуноблот и другие.

Серологические методы диагностики инфекционных заболеваний.

Серологические критерии диагностики основаны на специфических реакциях "антиген-антитело". Реагируют антигены (компоненты клеточных стенок, жгутиков, капсул, ДНК и токсинов) тех микроорганизмов, которые необходимо определить, с антителами , содержащимися в сыворотках. Между антигенами и соответствующими им антителами происходит связывание, что и положено в основу методов серологической диагностики. Серологические реакции применяются для определения неизвестного антигена (источником которого является бактерия, вирус, токсин и др.) с помощью известного антитела или для определения антитела в сыворотке с помощью известного антигена.

Серологические реакции классифицируют в зависимости от состояния антигена и особенностей среды, в которой взаимодействуют антиген и антитело, а также по способу проведения.

Для проведения серологических реакций испольуют множество лабораторных методов, таких, как агглютинация, преципитация, связывание комплемента, иммунофлуоресценция, иммуноферментный и радиоиммунный анализ и другие. Эти реакции позволяют эффективно проводить предварительную идентификацию микроорганизмов.

Сыворотки, которые необходимы для постановки серологических реакций, получают экспериментальным путем, в частности, их производят институты вакцин и сывороток, и предлагают в составе коммерческих диагностических наборов.

Серологические методы являются важным инструментом в диагностике и лечении инфекционных заболеваний человека и животных, поскольку с их помощью можно не только идентифицировать возбудителя заболевания, но и обнаружить в крови больных и переболевших специфические антитела к соответствующим возбудителям. Серологические методы в настоящее время являются самыми эффективными методами диагностики при невозможности или трудностях выделения возбудителя, и сравнительно редко дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Использование серологических методов для диагностики сифилиса

В основе серологических лабораторных методов диагностики сифилиса лежит способность организма давать иммунный ответ на появление возбудителя. С помощью серологических реакций в сыворотке (плазме) крови (или цереброспинальной жидкости) выявляют следы иммунного ответа на заражение, а именно антитела к антигенам бледной трепонемы, или же сами антигены.

Для того, чтобы установить специфический характер имеющихся клинических проявлений (т.е. что они являются следствием именно сифилиса) и, в дальнейшем, контролировать динамику патологического процесса, предложено большое количество серологических методов исследований. Эти же методы также широко применяют для скрининга населения.

В соответствии с действующими национальными руководствами и клиническими методическими рекомендациями, во многих странах мира при обследованиях населения с целью выявления больных сифилисом и при установлении клинического диагноза используются передовые серологические методы. Их применяют как при наличии клинических признаков болезни у пациентов, так и в латентные периоды.

Постановка серологических реакций - один из наиболее надежных методов диагностики сифилиса. Стандартизованные серологические реакции с регламентированной методикой постановки называются серологическими тестами на сифилис. Учитывая то, что почти все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными или ложноотрицательными , их следует ставить в комплексе и, при необходимости, в динамике.

Серологические реакции, которые используются для определения антител в сыворотке крови больного, отличаются друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Помимо классических методов, для эффективной серодиагностики сифилиса используются иммунологические тесты и технологии, получившие в 21 веке новый импульс к развитию.

Антитела выявляются различными иммунохимическими (серологическими) методами, среди которых осадочные реакции, иммуноферментный, иммунохемилюминесцентный, иммунохроматографический анализы, линейный иммуноблоттинг, исследование с применением проточной флюорометрии, технология иммуночипов и другие.

Серодиагностика (исследование с помощью серологических методов) применяется для:

• подтверждения клинического диагноза сифилиса,
• постановки диагноза скрытого сифилиса,
• контроля за эффективностью лечения, как один из критериев излеченности больных сифилисом,
• профилактики сифилиса (скрининговое обследование определенных групп населения с целью выявления патологии).

Важнейшие свойства, необходимые серологическим тестам - чувствительность, специфичность, воспроизводимость

Решающим критерием при выборе метода лабораторной диагностики является его эффективность - чувствительность, специфичность и воспроизводимость.

Чувствительность - это доля положительных результатов у больных. Чувствительность метода определяется процентом положительных результатов исследования проб, заведомо содержащих специфические маркеры возбудителя (нпр., антигены возбудителя или антитела к ним).

Специфичность - доля отрицательных результатов теста у здоровых пациентов. Специфичность метода определяется процентом отрицательных результатов исследования проб, заведомо не содержащих специфические маркеры возбудителя. Таким образом, чем выше чувствительность и специфичность, тем надежнее и достовернее метод исследования.

К важным диагностическим критериям также относится воспроизводимость результатов при повторных исследованиях одних и тех же проб. Следует отметить, что, несмотря на значительные достижения в области высоких технологий, не существует методов, обеспечивающих 100% (абсолютную) чувствительность и специфичность во всех исследуемых биопробах.

В настоящее время в России официально регистрируются тест-системы, наборы, ингредиенты, обладающие при постановке реакции менее 95% чувствительностью и специфичностью. Таким образом, всегда существует возможность получения неадекватного результата.

Классификация тестов по типу применяемого антигена. Трепонемные и нетрепонемные тесты на сифилис

В современной венерологии для диагностических целей используется более десятка вариантов серологических реакций на сифилис, которые можно подразделить по разным критериям на различные категории. Классификацию проводят по методологии проведения исследований, области применения, скорости, дешевизне, требованиям к лабораторной оснащенности и т.д.

Трепонемные реакции теоретически более специфичны, однако они также дают ложноположительные результаты. Более того, они не позволяют дифференцировать нелеченный и излеченный сифилис. Результаты трепонемных реакций будут положительными в обоих случаях. Нетрепонемные реакции позволяют различать нелеченную или недавно перенесенную и излеченную инфекцию.

При обследовании рекомендуется проводить и трепонемную, и нетрепонемную реакции. Для установки и подтверждения диагноза "сифилис" требуются положительные результаты при проведении тестов обоих типов - трепонемных и нетрепонемных. Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами, и проводятся до начала, в процессе и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

1. Нетрепонемные тесты

Наиболее известные из нетрепонемных тестов с визуальной расшифровкой результатов - это

• RW - реакция Вассермана с липидными антигенами (реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном, РСКк)
• реакция Канна (не используется в настоящее время),
• цитохолевая реакция Закс-Витебского (не используется в настоящее время),
• микрореакция преципитации с плазмой или инактивированной сывороткой (МРП или РМП),
• RPR (тест быстрых плазменных реагинов, Rapid Plasma reagin),
• TRUST (тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой, Toluidin Red Unheated Serum Test).

Среди нетрепонемных тестов имеются 2 теста с микроскопическим считыванием результатов реакции:

1. VDRL - (Venereal Disease Research Laboratory);

2. USR - тест определения активных реагинов плазмы (Unheated Serum Reagins).

Реактивность в нетрепонемных тестах обычно указывает на повреждение тканей и не всегда специфична в отношении сифилиса. Простота выполнения и низкая стоимость позволяет использовать их как отборочные реакции при установлении предварительного диагноза сифилиса.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются специфические антигены трепонем. Эти тесты обязательны для подтверждения диагноза (РПГА, РИТ, РИФ и ИФА). Они являются более сложными и дорогостоящими, чем тесты 1-й группы, но и более специфичными и чувствительными. Выявление антител в спинно-мозговой жидкости также производится с помощью трепонемных тестов.

Традиционные трепонемные реакции, подтверждающие диагноз сифилиса, требуют дорогого лабораторного оборудования и опытного персонала, поэтому они редко проводятся вне специализированных лабораторий. Однако сейчас их можно заменить простыми и быстрыми трепонемными реакциями, которые возможно проводить на местах и в которых используется цельная кровь. Проведение этих реакций не требует длительного обучения, специальных условий для хранения реактивов и оборудования.

Сравнительная дешевизна, удобство и практичность трепонемных экспресс- реакций привлекают к ним внимание не только как к методам подтверждения диагноза. Эти реакции могут применяться для скрининга сифилиса в рамках оказания первичной медицинской помощи (их можно проводить на местах, в том же лечебно-профилактическом учреждении) или в районах, где лаборатории не доступны. Однако поскольку антитела к T. pallidum определяются на протяжении ряда лет независимо от того, лечился больной или нет, трепонемные экспресс-реакции нельзя использовать для оценки эффективности лечения и дифференциальной диагностики нелеченного и излеченного сифилиса.

Классификация серологических методов диагностики сифилиса по типу определяемых антител

В современной дерматовенерологии для диагностики используются различные серологические реакции на сифилис. Часть методов, которые были актуальны ещё десять лет назад, перестают применяться из-за сложности или недостаточной специфичности. В зависимости от выявляемых антител, методы серологической диагностики сифилиса подразделяются на три группы:

I. Липидные (реагиновые) реакции - определяются антитела к липидным антигенам (реагинам):

1) флокуляционные: микрореакция на стекле с липидными антигенами -экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации - МРП), VDRL, CMF (cardiolipin microflocculation test), RPR и др.;

2) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами: реакция Вассермана (РВ), качественная и количественная методика постановки, термостатная и на холоде (реакция Колмера);

3) осадочные реакции, которые в настоящее время не используются: реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса - Витебского и др.;

II. Групповые трепонемные реакции - определяются антитела к групповым трепонемным антигенам (входящим в состав микробной клетки как патогенных, так и сапрофитных трепонем):

1) РСК с протеиновым антигеном Рейтера;

2) реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

3) реакция иммунного прилипания (РИП).

III. Видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции - определяются антитела к специфическим видовым антигенам Treponema pallidum:

1) реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ);

2) реакция иммунофлюоресценции РИФ-абс и ее варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS, и др.);

3) реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА) и её модификация TPPA.

4) иммуноферментный анализ (ИФА);

5) иммуноблотинг.

Практическое использование серологических реакций на сифилис

Различные серологические реакции используются для разных практических целей.

За рубежом при массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются нетрепонемные отборочные реакции (VDRL, RPR и др.). Для постановки диагноза требуется подтверждение в трепонемных тестах РИФ-Абс (FTA-ABS), РПГА или TPPA. В настоящее время, рекомендуется использовать ИФА, как замену VDRL в скрининговых тестах. Это связано с тем, что тест ИФА отличается чувствительностью, специфичностью, возможностью автоматизировать исследования, а также с разработкой диагностических тест-наборов. Кроме того, обосновывается реверсивная схема порядка исследования на сифилис, когда первыми используются трепонемные тесты.

С целью контроля за эффективностью терапии и для оценки активности инфекции рекомендуют VDRL в количественном исполнении. В качестве подтвердающего/дополнительного теста используется тест ИФА на противотрепонемные антитела IgM.

В отечественной практике используют комплекс серологических реакций (КСР), включающий реакцию микропреципитации (РМП) с кардиолипиновым антигеном и РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигенами. В последнее время рекомендуется в КСР заменять РСК на ИФА или РПГА. Также используются РИФ (и ее модификации - РИФ-Абс и остальные), РИБТ.

РИБТ применяют в качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонемных реакций.

Подходы к лабораторной серологической диагностике сифилиса в Российской Федерации

Внедрение в практику унифицированных методов клинических лабораторных исследований в СССР и Российской Федерации позволило ввести более прогрессивные диагностические методы, упорядочить работу клинико-диагностических лабораторий, повысить производительность труда, сократить дублирование лабораторных исследований и стало основой для разработки рациональных форм готовых наборов реактивов.

В 1985 году в СССР, в целях совершенствования диагностики сифилиса, нетрепонемная реакция РСК с неспецифическим (вассермановским) антигеном и осадочные реакции (цитохолевая и Кана) были исключены из диагностического комплекса, как менее чувствительные и не дающие дополнительной информации.

Вместо них, в составе комплекса серологических реакций на сифилис (КСР), было предусмотрено применение реакции связывания комплемента с трепонемным и кардиолипиновым антигенами (РСКт) и микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном (РМП). Более высокая чувствительность и информативность этого комплекса реакций обеспечивала выявление не только реагинов, но и противотрепонемных антител.

1985 год

1. РМП с кардиолипиновым антигеном с плазмой крови и инактивированной сывороткой крови. Отборочный тест в случае изолированного применения.

2. РСК с трепонемным и кардиолипидовым антигенами; качественная и количественная методики постановки, термостатная и на холоде;

3. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ); пробирочная и меланжерная методики постановки;

4. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в следующих модификациях: РИФ с абсорбцией (РИФ-абс) с сывороткой крови и капиллярной кровью, РИФ-200, РИФ с цельной спинномозговой жидкостью (РИФ-ц); качественные и количественные методики постановки. Диагностика скрытых и поздних форм сифилиса, распознавание ЛПР (ложно-положительных результатов)

5. Комплекс классических серологических реакций (КСР): РСК (реакции Вассермана) с кардиолипиновым и трепонемным антигенами + РМП. Профилактическое обследование населения на сифилис, диагностика всех форм сифилиса, контроль эффективности лечения, обследование лиц, контактных по сифилису.

В 2001 году Минздравом РФ был утвержден новый нормативный документ, регламентирующий порядок проведения диагностических тестов - приказ Министерства Здравоохранения РФ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» .

С целью совершенствования лабораторной диагностики сифилиса, повышения качества работы и предупреждения дальнейшего распространения заболеваемости сифилисом рекомендовано заменить РСК в комплексе серореакций (КСР) при диагностике сифилиса на ИФА и РПГА в качестве отборочных и подтверждающих тестов, т.к. эти тест-системы являются высокочувствительными, специфическими и воспроизводимыми.

Приказ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» предусматривает применение для серо- и ликвородиагностики сифилиса в России следующих методов:

1. РМП и зарубежные аналоги (VDRL, RPR и аналогичные микрореакции) в качестве отборочных тестов при обследовании населения на сифилис. Постановка РМП осуществляется с плазмой или инактивированной сывороткой крови.
2. Иммуноферментный анализ (ИФА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Диагностические реакции, в том числе для ликвородиагностики. В связи с простотой постановки и наличием коммерческих тест-систем могут использоваться как отборочные тесты.
3. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Отборочные и диагностические реакции.
4. Качественный и количественный варианты РИФ (РИФ-абс, РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца). Антиген - патогенная бледная трепонема штамма Никольса.
5. Комплекс серологических реакций (КСР) на сифилис, состоящий из реакции связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами, и РМП. Возможно заменить реакцию связывания комплемента на ИФА или РПГА также в сочетании с РМП. КСР относится к диагностическим тестам.
6. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), в которой в качестве антигена используют патогенные бледные трепонемы штамма Никольса. РИБТ относятся к диагностическим подтверждающим тестам.

Таким образом, последовательность обследования пациентов на сифилис в учреждениях здравоохранения рекомендуется планировать следующим образом:

1. При первичном обследовании производится постановка отборочной (скрининговой) реакции микропреципитации (РМП) или ее модификации (RPR, TRUST, VDRL) в количественном и качественном вариантах и в случае положительного результата - любого специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА, КСР, РИФ, РИТ);

2. После окончания терапии ставится РМП или ее модификация и по снижению титра судят о динамике инфекционного процесса и эффективности терапии. Подтверждением эффективности проведенной терапии считается снижение титра в 4 и более раз в течение 1 года.

Прием по предварительной записи! Суббота, воскресенье.

Серологический метод представляет собой совокупность реакций, основанных на взаимодействии антиген-антитело (Аг-Ат) и направленных на выявление в сыворотке крови и других жидкостях организма антител к антигенам возбудителей инфекционных болезней, либо собственно микробных антигенов. Серологический метод характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью. Большинство реакций этого метода просты в проведении и учете, доступны широкому кругу лабораторий, как правило, безопасны, экономичны, поддаются стандартизации. К недостаткам серологического метода можно отнести: 1) косвенный характер результата, когда об этиологии болезни судят не по выделению возбудителя, а по ответу (иммунному) организма на возбудитель; 2) необходимость парентерального вмешательства в организм больного; 3) в большинстве случаев позднюю постановку диагноза, что объясняется природной динамикой гуморального иммунного ответа; 4) возможность принять анамнестические Ат (как результат ранее перенесенного заболевания или вакцинации) за Ат к текущей инфекции. При определении микробных антигенов 3-й и 4-й недостатки отсутствуют, но необходимо учитывать особенности циркуляции антигенов разных микробов и соотносить эти особенности с возможностью взятия материала для исследования.

Этапы серологического метода:

1) взятие материалов для исследования . В большинстве случаев материалом является сыворотка крови . Ее получают после образования сгустка крови, кровь следует забирать в строго асептических условиях по стандартной методике,

2) выбор серологической реакции для данного случая зависит от цели исследования, предполагаемого заболевания, фазы болезни, материала для исследования, чувствительности реакции, возможностей конкретной лаборатории. Для выявления Ат, а также Аг используют реакции агглютинации (РА) , пассивной гемагглютинации (РПГА) ), иммунофлюоресценции (РИФ) , торможения гемагглютинации (РТГА) , преципитации , флоккуляции , реакцию связывания комплемента (РСК) и др.

3) постановка серологической реакции,

4) регистрация серологической реакции с целью определения присутствия серологических маркеров инфекции.

Разнообразным серологическим реакциям свойственно несколько общих характеристик:

1) так как любые серологические реакции являются реакциями взаимодействия Ат и Аг, то во всех случаях для установления присутствия Ат в исследуемом субстрате необходим набор известных стандартных корпускулярных или растворимых Аг, называемых диагностикумами . В свою очередь, для установления присутствия Аг нужен набор иммунных диагностических сывороток,

2) взаимодействие Аг и Ат осуществляется только в присутствии электролита, в качестве которого обычно используют изотонический раствор хлорида натрия или буферные смеси, рН системы должен быть около 7,

3) для образования комплекса Аг-Ат требуется период инкубации при особых температурных условиях (от +4 °С до 37 °С). Образование специфического иммунного комплекса происходит быстро; видимого простым глазом феномена (агглютинации, лизиса и др.) - медленно, через несколько часов или даже суток,

4) оба компонента серологической реакции (антиген и антитела) должны присутствовать в эквивалентном соотношении. Избыток какого-либо из компонентов блокирует образование комплекса Аг-Ат и способствует ложно отрицательным результатам.

Учет серологических реакций осуществляют визуально, иногда с помощью лупы. Суть учета серологической реакции сводится к определению феномена связывания Аг и Ат по образованию комплекса Аг-Ат. Визуально образование комплекса Аг-Ат сопровождается двумя основным феноменами - агглютинацией и преципитацией. Различия между ними определяются особенностями антигенов и антител, специфичных к ним. В то же время, среди микробных антигенов присутствуют и такие, которые индуцируют синтез непреципитирующих, образование комплекса Аг-Ат в данном случае не сопровождается ни феноменом агглютинации, ни феноменом преципитации, а выявление факта образования комплекса Аг-Ат требует маркирования диагностического компонента реакции специальными метками, либо перевода диагностического антигена в другое агрегатное состояние.

При оценке реакции применяют 3 главных критерия: 1) наличие и интенсивность реакции (в плюсах и др.); 2) диагностический титр, 3) нарастание титра Ат в течение болезни в 4 раза и более. Наличие реакции устанавливают по визуальным феноменам или по связыванию иммунохимического маркера. Для оценки интенсивности серологической реакции используют принцип 4 "+" (табл.7).

Таблица 7.

Система оценки серологических реакций по 4 "+" для реакций агглютинации и преципитации

Для количественного представления результатов серологической реакции применяют понятие титра антител или антигенов. Для определения тира Ат (или титра Аг) необходимо поставить серологическую реакцию, приготовив ряд разведений сыворотки крови или иного материала (раститровать). При приготовлении разведений сыворотки крови используют раствор электролита (чаще всего изотонической раствор хлорида натрия). Шаг разведения (титрования) задается соотношением объема раствора электролита и объема сыворотки крови. Например, при последовательных разведениях с шагом в 2 раза в 1-й пробирке смешиваются равные объемы раствора электролита и сыворотки крови, при шаге в 5 раз к 4-м объемным частям раствора электролита добавляют 1 объем сыворотки, при шаге в 10 раз - к 9 объемам раствора электролита добавляют 1 объем сыворотки крови (табл.8).

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Исследуемый материал

• сыворотка крови
• слюна
• фекальные массы

• почва

Методика проведения анализа или забора крови

Особенности транспортировки крови и хранения сыворотки

Для чего используют серологические исследования?

Основные методы серологической диагностики

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Иммунофлюоресцентная реакция – очень трудоёмкий процесс, требующий от специалиста немало времени и ответственности. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента ). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.

Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:
+ очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии
++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком
+++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки
Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++ . Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок:
– отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»
+ слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки
++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов
+++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами
++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок.
Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++ , то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

Достоверность и качество методов серологической диагностики зависят от организации проведённого внутреннего и внешнего лабораторного контроля, состоящих из нескольких независимых процедур, предназначенных для оценки качества результатов проведённого анализа.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Обязательным условием является исключение перед обследованием приема больным антибиотиков, которые оказывают токсическое действие на бледные трепонемы, вызывая их неспецифическое обездвижение.

Положительные результаты РИБТ обнаруживаются примерно с середины вторичного свежего периода сифилиса, и могут длительно сохраняться после проведенного лечения. При необходимости метод используют для выявления АТ в СМЖ, это исследование отличает высокая специфичность, но низкая чувствительность (около 40 %).

РИБТ мало пригодна для диагностики ранних форм сифилиса ввиду позднего (не ранее 8–9 недель от момента заражения) появления АТ-иммобилизинов; метод может давать ложноположительные результаты, в особенности у больных с аутоиммунной патологией, злокачественными заболеваниями, диабетом. Кроме того, РИБТ – достаточно сложный, трудоемкий и дорогостоящий анализ, требующий высокой квалификации персонала и наличия вивария, в связи с чем в последние годы он используется лишь в отдельных лабораториях. В диагностике РИБТ применяется как реакция-арбитр при расхождении результатов других серологических исследований, для дифференцирования ложноположительных результатов и при установлении диагноза поздних форм сифилиса.

Реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (РСК с ТА) .Чувствительность метода – около 80 %, специфичность – 98 %. Метод входил в состав комплекса стандартных серологических реакций на сифилис, регламентированного приказом Минздрава СССР № 1161 от 02.09.1985 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса». В настоящее время использование этой реакции, как и РСК с кардиолипиновым антигеном, ограничено отдельными лабораториями.

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) . Для диагностики сифилиса используют несколько модификаций РИФ: РИФ-ц – для выявления АТ в СМЖ, РИФ-200 (тестируемую сыворотку перед реакцией разводят в 200 раз); РИФ-абс (РИФ с абсорбцией), IgM-РИФ-абс (для определения АТ IgM). По чувствительности и специфичности РИФ-абс не уступает РИБТ, но выполнение этого метода намного проще. Результаты РИФ-абс становятся положительными с 3–й недели после заражения (до появления твердого шанкра или одновременно с ним), это метод ранней диагностики сифилиса. Нередки положительные результаты исследования спустя много лет после полноценного лечения раннего сифилиса, а у больных с поздним сифилисом – на протяжении десятилетий.

Показания для выполнения РИФ-абс:

• положительные результаты НТТ у беременных при отсутствии клинических и анамнестических данных, свидетельствующих о сифилисе;
• обследование лиц с различными соматическими и инфекционными заболеваниями, при которых отмечают положительные результаты НТТ;
• обследование лиц с клиническими проявлениями, характерными для сифилиса, но с отрицательными результатами НТТ;
• ранняя диагностика сифилиса;
• в части случаев – как критерий успешности противосифилитического лечения: переход положительной РИФ-абс в отрицательную после лечения является 100% критерием излеченности сифилиса.

IgM–РИФ–абс применяют для раздельного выявления АТ классов Ig, что представляет особый интерес при диагностике врожденного сифилиса, когда АТ к трепонеме, синтезированные в организме ребенка, представлены IgM, а АТ IgG имеют материнское происхождение. Показаниями к проведению этого исследования являются: диагностика врожденного сифилиса; оценка результатов лечения раннего сифилиса.

РИФ обладает высокой чувствительностью (98,5%) и специфичностью (99,6%) практически при всех формах сифилиса. Недостатками РИФ являются: невозможность автоматизации исследования и учета результатов; трудности приготовления качественного антигена из взвеси бледных трепонем, полученных из яичка зараженного кролика; субъективизм в оценке результатов.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) . Сопоставление результатов, полученных при использовании РПГА и РИБТ, РИФ–абс, КСР, МРП показало высокую чувствительность и специфичность РПГА при диагностике сифилиса, совпадающую с результатами РИФ–абс.

РПГА может быть выполнена в качественном и количественном вариантах, существуют их макро- и микромодификации. Количественный метод РПГА позволяет оценить концентрацию специфических трепонемных АТ в крови. Титры от 1: 640 и ниже характерны для пациентов, леченных по поводу сифилиса в прошлом. Более высокие титры – обычно для активной нелеченной инфекции.

Положительные результаты РПГА, как правило, отмечают спустя 3 недели после появления твердого шанкра и далее у пациентов, перенесших сифилис, в течение многих лет, нередко пожизненно.

Чувствительность РПГА составляет 76% при первичном сифилисе; 100% при вторичном сифилисе; 97% при скрытом сифилисе; 94% при позднем сифилисе. Специфичность РПГА выше, чем специфичность РИФ–абс, составляет 99%.

Благодаря соотношению высокой специфичности, чувствительности, простоты выполнения, стандартизации реагентов среди трепонемных тестов для серодиагностики сифилиса РПГА стабильно занимает лидирующее место в клинической практике в мире.

Особые преимущества ИФА заключаются: в высокой чувствительности и специфичности метода; автоматизации постановки реакции; высокой степени стандартизации; возможности исследования большого количества образцов сывороток; в количественном учете и объективной документации полученных результатов; возможности одновременного определения титра противотрепонемных АТ разных классов (IgG и IgM) в одном образце; пригодности для ранней диагностики сифилиса и диагностики врожденного сифилиса; в удобстве применения для тестирования крови в службе переливания крови; применимости в качестве подтверждающего специфического трепонемного теста. Чувствительность ИФА 98–100%, специфичность 96–100%.

К недостаткам ИФА можно отнести: непригодность для исследования единичных образцов; более длительный срок до получения результата, и меньший срок годности ИФА-наборов, например, по сравнению с РПГА.

Иммунный блот (ИБ). Одним из современных методов диагностики сифилиса является ИБ для определения АТ IgG либо IgM к определенным АГ бледной трепонемы.

Метод обладает высокой чувствительностью (до 100%,), специфичностью (98%) и воспроизводимостью (100%). Исследование дает возможность изучения спектра АТ сразу к нескольким АГ T.pallidum, применения высокоочищенных рекомбинантных и пептидных АГ, снижающих до минимума неспецифическую реактивность сывороток.

Все это определяет возможность предпочтения применения метода ИБ перед другими трепонемными тестами для верификации диагноза сифилиса в сложных случаях, в частности, для диагностики сифилиса во второй половине инкубационного периода, скрытого врожденного сифилиса в первые дни жизни ребенка, для выявления скрытого сифилиса у лиц со слабым гуморальным ответом, а также для дифференцирования ложноположительных результатов других тестов.

Инфекционные болезни инициируют выработку в крови болеющего человека соответствующих антител. Так работает иммунная защита организма.

Определение наличия антител к конкретному вирусу или бактерии дает возможность узнать о наступлении заболевания до появления его основных симптомов. Сегодня серологическое и дают наиболее полную картину. Поэтому мы и поговорим в данной статье об анализе на серологическое исследование.

Что такое серологические исследования

Методы изучения биологических материалов людей и животных, способные выявлять в них антитела или антигены, которые вырабатывает организм в виде защитной реакции в борьбе с инфекциями, называют серологические исследования. Такие методы применяют для определения возбудителя инфекции, а также с целью:

• определения группы крови,
• изучения иммунитета через определение уровня его гуморального звена,
• определения тканевых антигенов.

Кому его назначают

Зачем его делать

Метод ценится специалистами как способ сделать качественную диагностику заболевания.

• Если больной находится в стадии заболевания, то повторные исследования рекомендуется проводить с интервалом примерно – неделя, чтобы наблюдать за эффективностью применяемого лечения.
• Часто серологические исследования используют, чтобы определить, какой возбудитель вызвал болезнь уже после того, как пациент ее перенес.

Виды процедуры

Методы серологических исследований используют в своей основе различные реакции:

• Реакция нейтрализации полагается на свойстве антител иммунной сыворотки действовать как нейтрализующее средство на токсины или сами микроорганизмы, предупреждая их повреждающее действие.
• Реакция агглютинации , которая, в свою очередь, подразделяется на такие подвиды:
  • прямые реакции – их применяют при исследовании сыворотки крови на присутствие антител. В изучаемый состав вбрасывают убитые микробы и, если выпадает осадок в виде хлопьев, то значит, что на этот вид микробов реакция положительная;
  • реакция непрямой гемагглютинации производится введением в сыворотку крови эритроцитов, на которых адсорбированы антигены; эти агенты входят во взаимодействие с такого же рода антигенами, присутствующими в сыворотке крови, в результате этого выпадает фестончатый осадок.
• Реакция с участием комплемента применяют для выявления инфекционных болезней. Метод реализуется через активацию комплемента и наблюдением за происходящими реакциями в исследуемой среде.
• Реакция преципитации осуществляется наслоением раствора антигена на жидкую среду – иммунную сыворотку. Антиген для этого метода применяют растворимый. Реакция заключается в том, что комплекс антиген-антитело претерпевает осаждение; полученный осадок называют преципитатом.
• Реакция с использованием меченых антигенов и антител основана на том, что микробы или антигены тканей, обработанные определенным образом, получают способность под действием ультрафиолетовых лучей излучать свет. Метод используют не только при диагностировании антигенов, но и для определения лекарственных веществ, ферментов, гормонов.

Противопоказания для проведения

В связи с тем, что метод заключается в изучении биологического материала пациента, он не может воздействовать негативно на человека. Поэтому противопоказаний к применению не имеется.

Исследование полностью безопасно.

Как проводится серологическое исследование, расскажем ниже.

Показания для проведения

Метод применяют для определения возбудителя инфекции, в том числе при таких заболеваниях:

• ВИЧ-инфекция,
• токсоплазмоз,
• инфекционные болезни, полученные половым путем;
• дифтерия,
• наличие ;
• бруцеллез,
• стафилококковые инфекции,
• гепатит.

Также метод используют для выявления таких заболеваний:

• описторхоз,
• амебиаз,
• цистицеркоз,
• лямблиоз,
• пневмония.

Подготовка к процедуре

Особых приготовлений к процедуре не требуется. Следует соблюдать одно условие: забор крови делается натощак.

Алгоритм забора (взятия) крови (материала) на серологическое исследование описан ниже.

Проведение анализа

Забор крови делают из локтевой вены. Для того чтобы исследование получилось, кровь набирают не шприцом, а самотеком. В вену вводят иглу без шприца и собирают в пробирку до 5 мл крови.

Во время процедуры пациент испытывает небольшой дискомфорт во время введения иглы в вену. Последующие действия совсем не вызывают беспокойства.

Расшифровка результатов серологического исследования крови описана ниже.

Расшифровка результатов

Полученные результаты следует рассматривать совместно с клинической картиной болезни, проверкой предполагаемого диагноза с использованием нескольких тестов. Это связано с тем, что исследования имеют специфичный характер и иногда не обладают абсолютной чувствительностью к инфекционным заболеваниям.

Цена на комплексное серологическое исследование крови описана ниже.

Средняя стоимость процедуры

Какая цена процедуры будет зависеть от вида исследования. Она состоит из стоимости произведения анализа и стоимости антител к определенному возбудителю болезни. Средняя стоимость процедуры в пределах 700 руб.

Серологические реакции описаны в видео ниже: