RSK 분석. 매독의 실험실 진단을 위한 혈청학적 방법

매독 진단을 위한 간접적인 방법.

매독을 진단하기 위해 기술과 목적이 다른 다양한 연구 방법이 사용됩니다. 직접법은 현미경(암시야현미경 등)이나 PCR을 이용해 연구 대상 물질 내 병원체를 검출하는 것을 목표로 한다.

매독(T. pallidum)을 직접 검출하는 방법 외에도 매독을 검사할 때 간접적인 방법이 널리 사용됩니다( 혈청학적) 혈청 및 뇌척수액에서 매독의 원인 물질에 대한 항체를 검출하는 연구 방법. 매독을 진단하는 간접적 방법에는 ELISA, RPHA, DAC, RIF 및 RIF-abs, RIBT, PCR, 표현 방법, 면역 블롯 등의 혈청 반응이 포함됩니다.

전염병 진단을 위한 혈청학적 방법.

혈청학적 진단 기준특정 항원-항체 반응을 기반으로 합니다. 확인이 필요한 미생물의 항원(세포벽, 편모, 캡슐, DNA 및 독소의 구성 요소)은 혈청에 포함된 항체와 반응합니다. 항원과 그에 상응하는 항체 사이에 결합이 일어나며, 이는 혈청학적 진단 방법의 기초가 됩니다. 혈청학적 검사는 알려진 항체를 사용하여 알려지지 않은 항원(세균, 바이러스, 독소 등의 출처)을 확인하거나, 알려진 항원을 사용하여 혈청 내 항체를 확인하는 데 사용됩니다.

혈청학적 반응은 항원의 상태, 항원과 항체가 상호작용하는 환경의 특성, 실시방법에 따라 분류된다.

혈청학적 반응을 수행하기 위해 응집, 침전, 보체 고정, 면역형광, 효소 면역분석 및 방사성 면역분석 등과 같은 많은 실험실 방법이 사용됩니다. 이러한 반응을 통해 미생물을 효과적으로 예비 식별할 수 있습니다.

혈청학적 반응을 수행하는 데 필요한 혈청은 실험적으로 얻어지며, 특히 백신 및 혈청 연구소에서 생산되어 상용 진단 키트의 일부로 제공됩니다.

혈청학적 방법은 인간과 동물의 전염병을 진단하고 치료하는 데 중요한 도구입니다. 이를 통해 질병의 원인을 식별할 수 있을 뿐만 아니라 혈액 내 해당 병원체에 대한 특정 항체를 검출할 수 있기 때문입니다. 환자와 생존자. 현재 병원체 분리가 불가능하거나 어려울 때, 위양성 및 위음성 결과가 상대적으로 드물게 나타나는 경우, 혈청학적 방법이 가장 효과적인 진단 방법이다.

매독 진단을 위한 혈청학적 방법의 사용

매독 진단을 위한 혈청학적 실험실 방법은 병원체의 출현에 대한 면역 반응을 제공하는 신체의 능력에 기초합니다. 혈청(혈장)(또는 뇌척수액)의 혈청학적 반응을 사용하여 감염에 대한 면역 반응의 흔적, 즉 트레포네마 팔리듐 항원에 대한 항체 또는 항원 자체를 검출합니다.

기존 임상 증상의 특정 특성(즉, 매독의 결과임)을 확립하고 향후 병리학적 과정의 역학을 제어하기 위해 수많은 혈청학적 연구 방법이 제안되었습니다. 이와 동일한 방법은 인구 선별에도 널리 사용됩니다.

현재의 국가 지침 및 임상 지침에 따라 전 세계 많은 국가에서 매독 환자를 확인하고 임상 진단을 확립하기 위한 인구 조사에 고급 혈청학적 방법이 사용됩니다. 이는 환자의 질병의 임상 징후가 있을 때와 잠복기 동안 모두 사용됩니다.

혈청학적 검사는 매독을 진단하는 가장 신뢰할 수 있는 방법 중 하나입니다. 규정된 절차를 갖춘 표준화된 혈청학적 검사를 매독에 대한 혈청학적 검사라고 합니다. 특정 조건 하에서 매독에 대한 거의 모든 혈청학적 반응이 위양성 또는 위음성일 수 있다는 점을 고려하면, 이들을 조합하여, 필요한 경우 역학적으로 받아들여야 합니다.

환자의 혈청에서 항체를 결정하는 데 사용되는 혈청학적 반응은 민감도, 특이성, 복잡성 및 비용이 서로 다릅니다. 매독의 효과적인 혈청진단을 위해서는 전통적인 방법 외에도 면역학적 검사와 기술이 활용되어 21세기 새로운 발전의 동력을 얻고 있습니다.

항체는 퇴적 반응, 효소 면역분석, 화학발광 면역분석, 면역크로마토그래피 분석, 선형 면역블로팅, 유동 형광측정법, 면역칩 기술 등을 사용한 연구를 포함한 다양한 면역화학적(혈청학적) 방법으로 검출됩니다.

혈청진단(혈청학적 방법을 사용한 연구)은 다음 용도로 사용됩니다.

매독의 임상 진단 확인,
잠복 매독을 진단하고,
매독 환자의 치료 기준 중 하나로서 치료 효과를 모니터링하고,
매독 예방(병리를 확인하기 위해 특정 인구 집단에 대한 선별 검사)

혈청학적 검사에 요구되는 가장 중요한 특성은 민감도, 특이도, 재현성입니다.

실험실 진단 방법을 선택할 때 결정적인 기준은 효율성, 즉 민감도, 특이성 및 재현성입니다.

감광도환자의 긍정적인 결과 비율입니다. 이 방법의 민감도는 특정 병원체 마커(예: 병원체 항원 또는 이에 대한 항체)를 포함하는 것으로 알려진 샘플에 대한 양성 테스트 결과의 비율에 따라 결정됩니다.

특성- 건강한 환자의 음성 검사 결과 비율. 이 방법의 특이성은 병원체의 특정 지표를 포함하지 않는 것으로 알려진 샘플에 대한 음성 테스트 결과의 비율에 따라 결정됩니다. 따라서 민감도와 특이도가 높을수록 연구 방법의 신뢰성과 신뢰도가 높아집니다.

중요한 진단 기준에는 다음이 포함됩니다. 재현성동일한 샘플을 반복적으로 연구한 결과입니다. 첨단 기술 분야의 상당한 발전에도 불구하고 테스트된 모든 생물검정에서 100%(절대) 민감도와 특이성을 제공하는 방법은 없다는 점에 유의해야 합니다.

현재 반응 설정 시 민감도와 특이도가 95% 미만인 테스트 시스템, 키트, 성분이 러시아에 공식 등록되어 있습니다. 따라서 항상 부적절한 결과를 얻을 가능성이 있습니다.

사용된 항원의 유형에 따른 검사 분류. 매독에 대한 트레포네말 및 비트레포네말 검사

현대 성병학에서는 매독에 대한 12가지 이상의 혈청학적 반응이 진단 목적으로 사용되며, 이는 다양한 기준에 따라 다양한 범주로 나눌 수 있습니다. 분류는 연구 방법론, 범위, 속도, 저렴한 비용, 실험실 장비 요구 사항 등에 따라 수행됩니다.

트레포네마 검사는 이론적으로 더 구체적이지만 위양성 결과도 나타냅니다. 게다가 치료되지 않은 매독과 완치된 매독을 구별할 수 없습니다. 트레포네마 반응의 결과는 두 경우 모두 긍정적일 것입니다. 비트레포네마성 반응은 치료되지 않은 감염이나 최근 감염과 치료된 감염을 구별합니다.

검사 중에는 트레포네마 반응과 비트레포네마 반응을 모두 수행하는 것이 좋습니다. 매독 진단을 확립하고 확인하려면 트레포네마성 검사와 비트레포네멀성 검사 두 가지 모두에서 긍정적인 결과가 필요합니다. 따라서 비트레포네마 검사는 트레포네마 검사와 병행하여 사용되며 치료 종료 전, 도중, 후에 특정 시간 간격으로 실시됩니다.

1. 비트레포네마성 테스트

결과를 시각적으로 해석하는 비트레포네마 테스트 중 가장 유명한 것은 다음과 같습니다.

RW - 지질 항원과 Wasserman 반응(카디오리핀 항원, PCK와의 보체 고정 반응)
칸나반응(현재는 사용되지 않음),
세포질 Sachs-Vitebsky 반응(현재 사용되지 않음),
혈장 또는 불활성화 혈청(MPR 또는 RMP)과의 미세침전 반응,
RPR(Rapid Plasma reagin 테스트),
TRUST(톨루이딘 레드 및 비가열 혈청으로 테스트, 톨루이딘 레드 비가열 혈청 테스트).

비트레포네마성 테스트 중에는 반응 결과를 현미경으로 판독하는 2가지 테스트가 있습니다.

1. VDRL - (성병 연구소);

2. USR - 활성 혈장 레긴(Unheated Serum Reagins)을 측정하기 위한 테스트입니다.

비트레포네마성 검사의 반응성은 일반적으로 조직 손상을 나타내며 항상 매독에 특이적이지는 않습니다. 구현이 쉽고 비용이 저렴하므로 매독의 예비 진단을 확립할 때 선별 반응으로 사용할 수 있습니다.

2. 트레포네마 검사

트레포네마 검사는 특정 트레포네말 항원을 사용합니다. 이러한 검사는 진단을 확인하는 데 필요합니다(RPGA, RIT, RIF 및 ELISA). 그룹 1 테스트보다 더 복잡하고 비용이 많이 들지만 더 구체적이고 민감합니다. 뇌척수액의 항체도 트레포네마 검사를 통해 검출됩니다.

매독 진단을 확인하는 전통적인 트레포네마 검사에는 고가의 실험실 장비와 숙련된 인력이 필요하므로 전문 실험실 밖에서는 거의 수행되지 않습니다. 그러나 이제는 국소적으로 수행할 수 있고 전혈을 사용할 수 있는 간단하고 빠른 트레포네마 반응으로 대체될 수 있습니다. 이러한 반응을 수행하는 데에는 시약과 장비를 보관하기 위한 오랜 교육이나 특별한 조건이 필요하지 않습니다.

트레포네마 발현 반응의 비교적 저렴함, 편리함 및 실용성은 진단을 확인하는 방법뿐만 아니라 관심을 끌고 있습니다. 이러한 검사는 일차 진료(동일한 의료 시설에서 지역적으로 실시할 수 있음) 또는 실험실을 이용할 수 없는 지역에서 매독을 선별하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나 T. pallidum에 대한 항체는 환자의 치료 여부에 관계없이 수년에 걸쳐 검출되므로 트레포네마 신속 반응을 사용하여 치료 효과를 평가하고 치료되지 않은 매독과 완치된 매독의 감별 진단을 수행할 수 없습니다.

검출된 항체의 종류에 따른 매독 진단을 위한 혈청학적 방법의 분류

현대 피부병학에서는 매독에 대한 다양한 혈청학적 반응을 진단에 사용합니다. 10년 전에 관련성이 있었던 일부 방법은 복잡성이나 특이성 부족으로 인해 더 이상 사용되지 않습니다. 검출된 항체에 따라 매독의 혈청학적 진단 방법은 세 그룹으로 나뉩니다.

I. 지질(레긴) 반응 - 지질 항원(레긴)에 대한 항체가 결정됩니다.

1) 응집: 지질 항원을 이용한 유리에서의 미세 반응 - 표현 진단 방법(침전 미세 반응 - MRP), VDRL, CMF(카디오리핀 미세 응집 시험), RPR 등;

2) 지질 항원을 이용한 보체 고정 반응(CRF): Wasserman 반응(WR), 정성적 및 정량적 방법, 자동 온도 조절 및 저온(Kolmer 반응);

3) 현재 사용되지 않는 퇴적반응: Cahn 침전반응, 세포질 Sachs-Vitebsky 반응 등;

II. 그룹 트레포네마 반응 - 그룹 트레포네마 항원(병원성 및 부생성 트레포네메의 미생물 세포의 일부)에 대한 항체가 결정됩니다.

1) 라이터(Reiter) 단백질 항원을 갖는 RSC;

2) 면역형광반응(RIF);

3) 면역접착반응(IAR).

III. 종별 단백질 트레포네마 반응 - 특정 Treponema pallidum 종 항원에 대한 항체가 결정됩니다.

1) 트레포네마 팔리듐 고정화 반응(TRE);

2) 면역형광 반응 RIF-abs 및 이의 변이체(IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS 등);

3) Treponema pallidum(IPHA) 및 이의 변형 TPPA의 간접 적혈구응집 반응.

4) 효소면역분석(ELISA);

5) 면역블로팅.

매독에 대한 혈청학적 검사의 실제적 활용

다양한 혈청학적 반응이 다양한 실제 목적으로 사용됩니다.

해외에서는 인구 집단 조사 및 매독의 긴급 발견이 필요한 경우 비트레포네마 선택 반응(VDRL, RPR 등)이 사용됩니다. 진단을 위해서는 FTA-ABS, FTA-ABS 또는 TPPA 트레포네마 검사를 통한 확인이 필요합니다. 현재 선별검사에서는 VDRL 대신 ELISA를 사용하는 것이 권장됩니다. 이는 ELISA 테스트가 민감도, 특이성, 연구 자동화 능력 및 진단 테스트 키트 개발로 구별된다는 사실 때문입니다. 또한 트레포네마 검사를 먼저 사용하는 경우 매독 검사 순서의 역순이 입증됩니다.

치료 효과를 모니터링하고 감염 활동을 평가하기 위해 정량적 VDRL이 권장됩니다. 항트레포네마성 IgM 항체에 대한 ELISA 검사는 확인/추가 검사로 사용됩니다.

국내에서는 카디오리핀 항원을 사용한 미세침전 반응(MPR)과 카디오리핀 및 트레포네말 항원을 사용한 RSC를 포함하여 일련의 혈청학적 반응(CSR)이 사용됩니다. 최근에는 DAC에서 RSK를 ELISA 또는 RPGA로 대체하는 것이 권장되었습니다. RIF(및 그 수정 - RIF-Abs 및 기타), RIBT도 사용됩니다.

RIBT는 트레포네마 반응에 불일치가 있는 경우 검사 반응으로 사용됩니다.

러시아 연방의 매독에 대한 실험실 혈청학적 진단에 대한 접근법

소련과 러시아 연방에서 임상 실험실 연구의 통일된 방법을 도입함으로써 보다 진보적인 진단 방법을 도입하고, 임상 진단 실험실의 작업을 간소화하고, 노동 생산성을 높이고, 실험실 테스트의 중복을 줄이고, 기반이 되었습니다. 합리적인 형태의 기성 시약 키트 개발을 위해.

1985년 소련에서는 매독 진단을 개선하기 위해 비특이적(Wassermann) 항원과 RSC의 비트레포네마 반응 및 침전물 반응(세포콜레 및 Cana)이 진단 복합체에서 제외되었습니다. 추가 정보를 제공합니다.

대신, 매독에 대한 혈청학적 반응 복합체(CSR)의 일부로 트레포네말 및 카디오리핀 항원(RSKt)을 사용한 보체 고정 반응과 카디오리핀 항원(RMA)을 사용한 미세침전 반응의 사용이 제공되었습니다. 이 반응 세트의 더 높은 민감도와 정보 내용은 reagins뿐만 아니라 항트레포네마 항체의 검출을 보장했습니다.

1985년

1. 혈장 및 비활성화된 혈청과 함께 카디오리핀 항원이 포함된 RMP. 격리 사용을 위한 선별 테스트.

2. 트레포네마 및 심장지질 항원을 갖는 RSC; 준비, 온도 조절 및 냉기의 정성적 및 정량적 방법;

3. 트레포네마 팔리듐 고정화 반응(TRE); 시험관 및 멜란지 생산 방법;

4. 다음 변형의 면역형광 반응(RIF): 혈청 및 모세혈관을 이용한 흡수 RIF(RIF-abs), RIF-200, 전체 뇌척수액(RIF-c)을 이용한 RIF; 정성적 및 정량적 제제화 방법. 잠복 및 후기 매독 진단, DM 인식(위양성 결과)

5. 고전적 혈청학적 반응(CSR)의 복합체: 카디오리핀 및 트레포네말 항원을 사용한 CSR(Wassermann 반응) + RMP. 매독에 대한 인구 예방 검사, 모든 형태의 매독 진단, 치료 효과 모니터링, 매독 접촉자 검사.

2001년에 러시아 연방 보건부는 진단 테스트 수행 절차를 규제하는 새로운 규제 문서를 승인했습니다. - 2001년 3월 26일 러시아 연방 보건부 명령 제87호 "매독의 혈청학적 진단 개선에 관하여" .”

매독의 실험실 진단을 개선하고 업무의 질을 향상시키며 매독의 추가 확산을 방지하기 위해 선별검사 및 확증 검사로서 매독 진단 시 ELISA 및 RPGA를 사용하여 혈청반응 복합체(SSR)에서 RSC를 대체하는 것이 좋습니다. 왜냐하면 이러한 테스트 시스템은 매우 민감하고 구체적이며 재현 가능합니다.

2001년 3월 26일자 명령 번호 87 "매독의 혈청학적 진단 개선"은 러시아에서 매독의 혈청 및 주류 진단을 위해 다음 방법의 사용을 규정합니다.

1. 매독 인구를 선별하기 위한 선별 검사로서 RMP 및 외국 유사체(VDRL, RPR 및 유사한 미세 반응). RMP는 혈장 또는 비활성화된 혈청을 사용하여 수행됩니다.
2. 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA). 배양되거나 병원성인 Treponema pallidum의 항원. 주류 진단을 포함한 진단 반응. 생산 용이성과 상용 테스트 시스템의 가용성으로 인해 스크리닝 테스트로 사용할 수 있습니다.
3. 수동 적혈구응집 반응(RPHA). 배양되거나 병원성인 Treponema pallidum의 항원. 선별 및 진단 반응.
4. RIF의 정성적 및 정량적 변형(RIF-abs, RIF-ts, 손가락의 모세혈관이 있는 RIF). 항원 - 병원성 Treponema pallidum 균주 Nichols.
5. 트레포네마 및 카디오리핀 항원과 방광암에 대한 보체 고정 반응(CFR)으로 구성된 매독에 대한 혈청학적 반응(CSR)의 복합체입니다. 방광암과 함께 보체 고정 반응을 ELISA 또는 RPHA로 대체하는 것도 가능합니다. DAC는 진단 테스트를 의미합니다.
6. 니콜스(Nichols) 계통의 병원성 Treponema pallidum을 항원으로 사용하는 Treponema pallidum 고정화 반응(TRI). RIBT는 진단 확인 테스트입니다.

따라서 의료기관에서는 매독 환자의 검사 순서를 다음과 같이 계획하는 것이 좋습니다.

1. 초기 검사 중에 미세 침전 반응(RMP) 또는 변형(RPR, TRUST, VDRL)을 선택(스크리닝)하여 정량적 및 정성적 버전으로 수행하며, 양성 결과의 경우 특정 확증 트레포네마 테스트( RPGA, ELISA, DAC, RIF), RIT);

2. 치료 종료 후 RMP 또는 그 변형이 진단되고 감염 과정의 역학 및 치료 효과는 역가 감소로 판단됩니다. 치료 효과의 확인은 1년 이내에 역가가 4배 이상 감소한 것으로 간주됩니다.

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혈청학적 방법은 다음을 기반으로 하는 일련의 반응입니다. 항원-항체 상호작용(Ag-Ab)혈청 및 기타 체액에서 전염병 병원체의 항원에 대한 항체 또는 미생물 항원 자체를 식별하는 것을 목표로 합니다. 혈청학적 방법은 높은 민감도와 특이도를 특징으로 합니다. 이 방법의 대부분의 반응은 수행 및 기록이 쉽고 광범위한 실험실에서 사용할 수 있으며 일반적으로 안전하고 경제적이며 표준화가 가능합니다. 에게 단점혈청학적 방법은 다음과 같은 이유로 인해 발생할 수 있습니다. 1) 질병의 원인이 병원체의 분리가 아니라 병원체에 대한 신체의 (면역) 반응에 의해 판단될 때 결과의 간접적인 성격; 2) 환자의 신체에 대한 비경구적 개입의 필요성; 3) 대부분의 경우 체액성 면역 반응의 자연적인 역동성에 의해 설명되는 후기 진단; 4) 과거 질병이나 예방접종으로 인해 과거의 Ab를 현재 감염으로 착각할 가능성이 있습니다. 미생물 항원 3과 4를 결정할 때 단점은 없으나, 서로 다른 미생물 항원의 순환 특성을 고려하고 이러한 특성을 연구용 물질의 활용 가능성과 연관시킬 필요가 있습니다.

혈청학적 방법의 단계:

1) 복용 연구용 재료. 대부분의 경우 재료는 다음과 같습니다. 혈청. 이는 혈전이 형성된 후 얻어지며 표준 기술에 따라 엄격한 무균 조건에서 혈액을 수집해야 합니다.

2) 특정 사례에 대한 혈청학적 반응의 선택은 연구 목적, 의심되는 질병, 질병의 단계, 연구 재료, 반응의 민감도 및 특정 실험실의 능력에 따라 달라집니다. Ag뿐만 아니라 Ab도 검출하기 위해 응집 반응이 사용됩니다( 라), 수동적 적혈구응집( RPGA)), 면역형광 (암초), 적혈구 응집 억제 ( RTGA), 강수량, 응집, 보체 고정 반응(FFR) 등

3) 혈청학적 반응을 설정하고,

4) 감염의 혈청학적 표지의 존재를 결정하기 위한 혈청학적 반응의 등록.

다양한 혈청학적 반응은 다음과 같은 특징이 있습니다. 일반적 특성:

1) 모든 혈청학적 반응은 Ab와 Ag 사이의 상호작용 반응이기 때문에 모든 경우에 연구 중인 기질에 Ab의 존재를 확인하기 위해 알려진 표준 미립자 또는 가용성 Ag 세트를 사용합니다. 진단. 차례로 Ag의 존재를 확인하기 위해 면역진단 혈청,

2) Ag와 Ab의 상호 작용은 일반적으로 등장성 염화나트륨 용액 또는 완충 혼합물인 전해질이 있는 경우에만 발생하며 시스템의 pH는 약 7이어야 합니다.

3) Ag-At 복합체의 형성에는 특수 온도 조건(+4°C ~ 37°C)에서 잠복기가 필요합니다. 특정 면역 복합체의 형성은 빠르게 발생합니다. 육안으로 볼 수 있는 현상(응집, 용해 등) - 천천히, 몇 시간 또는 며칠 후에,

4) 혈청학적 반응의 두 구성요소(항원과 항체)가 동일한 비율로 존재해야 합니다. 구성 요소가 너무 많으면 Ag-At 복합체의 형성이 차단되고 위음성 결과가 발생합니다.

혈청학적 반응은 시각적으로 기록되며 때로는 돋보기를 사용하여 기록됩니다. 혈청학적 반응을 고려하는 본질은 Ag-At 복합체의 형성에 의한 Ag와 Ab의 결합 현상을 결정하는 것입니다. 시각적으로 Ag-At 복합체의 형성에는 응집과 침전이라는 두 가지 주요 현상이 동반됩니다. 이들 사이의 차이점은 그들에 특이적인 항원과 항체의 특성에 따라 결정됩니다. 동시에, 미생물 항원 중에는 비침전성 항원의 합성을 유도하는 항원도 있는데, 이 경우 Ag-Ab 복합체의 형성에는 응집 현상이나 침전 현상이 수반되지 않으며, Ag-Ab 복합체가 형성된다는 사실은 반응의 진단 구성요소를 특수 라벨로 라벨링하거나 진단 항원을 다른 응집 상태로 전환해야 합니다.

반응을 평가할 때 3가지 주요 기준이 사용됩니다: 1) 반응의 존재 및 강도(플러스 등) 2) 진단 역가, 3) 질병이 진행되는 동안 Ab 역가가 4배 이상 증가합니다. 반응의 존재는 시각적 현상이나 면역화학적 표지의 결합에 의해 결정됩니다. 혈청학적 반응의 강도를 평가하기 위해 4 "+" 원칙이 사용됩니다(표 7).

표 7.

응집 및 침전 반응에 대해 4 "+"로 혈청학적 반응을 평가하는 시스템

혈청학적 반응의 결과를 정량적으로 나타내기 위해 항체 또는 항원 역가의 개념이 사용됩니다. Ab 수준(또는 Ag 역가)을 결정하려면 혈청이나 기타 물질(적정액)을 여러 번 희석하여 혈청학적 반응을 수행해야 합니다. 혈청 희석액을 준비할 때 전해질 용액(가장 흔히 등장성 염화나트륨 용액)이 사용됩니다. 희석 단계(적정)는 전해질 용액의 부피와 혈청의 부피의 비율로 설정됩니다. 예를 들어, 2배 간격으로 연속 희석하면 첫 번째 시험관에 동량의 전해질 용액과 혈청을 혼합하고, 5배 간격으로 전해질 4부피에 혈청 1부피를 첨가합니다. 용액, 10 배 단계 - 9 1 부피의 혈청을 전해질 용액의 부피에 첨가합니다 (표 8).

이 사이트는 정보 제공의 목적으로만 참조 정보를 제공합니다. 질병의 진단과 치료는 반드시 전문의의 감독하에 이루어져야 합니다. 모든 약물에는 금기 사항이 있습니다. 전문가와의 상담이 필요합니다!

혈청학적 혈액 분석특정 항원이나 항체를 실험실에서 테스트하는 방법입니다. 특정 단백질) 환자의 혈청에서 신체의 면역 반응을 기반으로 합니다. 이 방법은 다음과 같은 경우에 사용됩니다. 진단환자의 혈액에서 특정 유형의 바이러스 또는 박테리아에 대한 항체의 존재를 감지하고 혈액형을 결정하는 전염병.

연구중인 자료

우선, 혈청학적 분석을 위해 환자로부터 채취한 생체물질을 사용합니다.

혈청
타액
대변

어떤 경우에는 특정 환경 물체로부터 분리된 물질을 검사합니다.

토양

분석 또는 혈액 샘플링 방법

이 분석에는 환자의 특별한 준비가 필요하지 않습니다. 채혈은 아침 공복에 실시하며, 일반적으로 통용되는 혈액학적 방법에 따라 의료기관의 치료실에서 실시됩니다. 혈청학적 검사를 위해 혈액은 환자의 척골정맥에서 채취하는 정맥혈과 약지에서 모세혈관혈을 채취하는 두 가지 방법으로 채취합니다. 혈액을 멸균 밀봉 튜브에 넣습니다.

혈액 수송 및 혈청 저장의 특징

채혈 후 즉시 특수검사실로 이송되어 당일 혈청을 조제합니다. 유청은 2~4도 온도의 냉장고에 4~6일 이상 보관할 수 없습니다. 장기간 보관이 필요한 경우 유청을 냉동시킵니다. 유청의 품질 저하를 방지하기 위해 유청을 한 번 냉동한 후 해동할 수 있습니다. 장기간 보관하는 동안 항체는 그 특성을 잃고 부분적으로 비활성화됩니다. 해당 클래스의 면역글로불린은 동결에 가장 민감합니다. 중. 혈청을 해동시킨 후 부드러워질 때까지 완전히 혼합해야 하며, 이는 이 혈청에 포함된 항체의 농도를 회복하는 데 도움이 됩니다.

혈청학적 검사는 어떤 용도로 사용되나요?

혈청학적 실험실 진단 방법은 다음과 같은 질병을 식별하는 데 사용됩니다. 에키노코쿠스증, 선모충증, 톡소카로스증, opisthorchiasis, 낭미충증, 톡소플라스마증, 아메바증, 편모충증, 치료 과정의 효율성을 확인하고 마지막으로 환자가 완전히 회복된 후 재발성 질환을 발견하기 위해 사용됩니다.

혈청학적 진단의 기본 방법

면역형광반응(RIF)

이 반응은 혈청학적 테스트의 간접적 버전입니다. 즉, 두 단계로 수행됩니다. 첫 번째 단계에서는 면역 혈청 단백질과 구조가 유사한 항글로불린을 사용하여 순환하는 항원-항체 복합체에서 필요한 항체를 식별합니다. 항글로불린을 사용하지 않고 형광 현미경으로 미리 준비된 항원 제제를 연구함으로써 원하는 항체를 식별하는 것도 가능합니다.

면역형광반응은 매우 노동집약적인 과정으로 전문가의 많은 시간과 책임이 요구됩니다. 반응은 용액 준비로 시작되며, 이후 혈청과 대조 샘플이 적정됩니다( 시험용액을 조절된 양의 시약과 서서히 혼합하여 특정 물질의 함량을 결정하는 과정). 미리 준비된 희석액과 대조 샘플을 항원이 들어 있는 유리 슬라이드에 조심스럽게 적용합니다. 그런 다음 제제를 배양한 후 세척하고 공기 건조합니다. 항혈청의 얇은 층을 항원이 있는 슬라이드에 적용한 후 제제의 2차 배양이 수행되고 이전의 전체 일련의 작업이 반복되어 제제의 건조로 끝납니다. 결과적으로 유리 슬라이드 위의 제제를 글리세롤로 처리하고 형광 현미경으로 검사합니다.

반응 결과는 항원 세포의 표면 황록색 빛의 강도를 특징으로 하는 4점 척도로 평가됩니다.
+ 세포의 매우 희미한 빛, 주변에서만 눈에 띌 수 있음
++ 세포 주변의 희미한 빛이 나지만 분명히 눈에 띄는 녹색 색조가 있음
+++/++++ 세포 주변의 밝은 녹색 빛
반응 역가는 항원 세포의 최소 50%가 반응의 결과로 투명한 표면 빛을 나타내는 혈청 희석액으로 간주됩니다. +++ 또는 ++++ . 반응 범위 값은 1/80 ~ 1/100입니다.

반응의 강도는 형성된 구멍 바닥에 침전된 적혈구의 수에 따라 달라집니다.
– 가장자리가 매끄러운 작은 고리 또는 "버튼"의 형태로 적혈구가 우물 바닥에 침착되는 것을 특징으로 하는 음성 반응
+ 낮은 강도의 이 반응은 구멍 바닥에 작은 단일 침전물이 나타나는 것이 특징입니다. 응집되지 않은 적혈구는 우물 중앙에 "작은 고리"를 형성합니다.
++ 중간 강도, 구멍 바닥에 비응집 적혈구의 "넓고 조밀한 고리"가 형성되는 것이 특징입니다.
+++ 강렬한 반응, 응집된 적혈구는 소위 "우산"을 형성하며, 그 중심에는 정착된 비응집 적혈구에 의해 형성된 고리가 명확하게 보입니다.
++++ 모든 적혈구가 응집되어 "우산"을 형성하여 우물 바닥에 늘어지는 매우 강렬한 반응입니다.
이 반응의 역가는 적어도 적혈구의 명백한 응집이 검출되는 마지막 혈청 희석으로 간주됩니다. +++ , 즉 강렬하거나 급격하게 강렬한 반응을 보입니다.

혈청학적 진단 방법의 신뢰성과 품질은 분석 결과의 품질을 평가하기 위해 고안된 여러 가지 독립적인 절차로 구성된 내부 및 외부 실험실 통제의 구성에 따라 달라집니다.

Treponema pallidum 고정화 반응(RIBT). 전제 조건은 검사 전에 환자가 Treponema pallidum에 독성 영향을 주어 비특이적 고정을 유발하는 항생제를 복용하지 않는다는 것입니다.

RIBT의 양성 결과는 대략 2차 매독의 중간쯤에 발견되며, 치료 후에도 오랫동안 지속될 수 있습니다. 필요한 경우 이 방법을 사용하여 뇌척수액에서 AT를 검출합니다. 이 연구는 특이도는 높지만 민감도는 낮습니다(약 40%).

RIBT는 AT-immobilisin의 늦은 출현(감염 후 8~9주 이내)으로 인해 초기 형태의 매독을 진단하는 데 거의 사용되지 않습니다. 이 방법은 특히 자가면역 질환, 악성 질환, 당뇨병 환자의 경우 위양성 결과를 초래할 수 있습니다. 또한 RIBT는 고도의 자격을 갖춘 인력과 동식물 사육장이 필요한 다소 복잡하고 노동 집약적이며 비용이 많이 드는 분석이므로 최근에는 특정 실험실에서만 사용되었습니다. 진단에서 RIBT는 다른 혈청학적 연구 결과에 불일치가 있을 때 위양성 결과를 구별하고 후기 형태의 매독 진단을 확립할 때 반응 중재자로 사용됩니다.

트레포네말 항원(TA가 포함된 RSC)을 사용한 보체 고정 반응이 방법의 민감도는 약 80%, 특이도는 98%이다. 이 방법은 1985년 9월 2일자 소련 보건부 명령 제1161호 "매독의 혈청학적 진단 개선에 관한" 규정에 따라 매독에 대한 일련의 표준 혈청학적 반응의 일부였습니다. 현재 카디오리핀 항원을 사용한 CSC와 같은 이 반응의 사용은 개별 실험실로 제한됩니다.

면역형광반응(RIF). 매독을 진단하기 위해 RIF의 여러 변형이 사용됩니다. RIF-c - CSF에서 AT를 검출하기 위해 RIF-200(시험 혈청은 반응 전에 200배 희석됩니다); RIF-abs(흡수가 있는 RIF), IgM-RIF-abs(IgM AT 결정용). 민감도와 특이도 측면에서 RIF-abs는 RIBT보다 열등하지 않지만 이 방법의 구현은 훨씬 간단합니다. RIF-abs 검사 결과는 감염 후 3주(연성하감이 나타나기 전 또는 동시에 나타나기 전)부터 양성으로 나타나는데, 이는 매독의 조기 진단을 위한 방법이다. 긍정적인 연구 결과는 초기 매독의 완전한 치료 후 수년이 지난 후, 후기 매독 환자의 경우 수십 년 동안 발견되는 경우가 많습니다.

RIF-ab 수행에 대한 적응증:

매독을 나타내는 임상 및 기록 데이터가 없는 임산부의 NTT에 대한 긍정적인 결과;
NTT의 긍정적인 결과가 기록된 다양한 신체 및 전염병 환자에 대한 검사;
매독의 특징적인 임상 증상이 있지만 NTT 결과가 음성인 사람에 대한 검사
매독의 조기 진단;
어떤 경우에는 매독 치료 성공의 기준으로 사용됩니다. 치료 후 양성 RIF-abs가 음성 RIF-ab로 전환되는 것이 매독 치료의 100% 기준입니다.

IgM-RIF-abs는 어린이의 신체에서 합성된 Treponema AT가 IgM으로 표시되고 IgG AT가 모체 유래일 때 선천성 매독 진단에 특히 중요한 Ig 클래스 AT의 별도 검출에 사용됩니다. 이 연구의 적응증은 다음과 같습니다: 선천성 매독 진단; 초기 매독 치료 결과 평가.

RIF는 거의 모든 형태의 매독에 대해 높은 민감도(98.5%)와 특이도(99.6%)를 가지고 있습니다. RIF의 단점은 다음과 같습니다. 연구 자동화 및 결과 기록이 불가능합니다. 감염된 토끼의 고환에서 얻은 Treponema pallidum 현탁액으로부터 고품질 항원을 제조하는 데 어려움이 있습니다. 결과 평가의 주관성.

수동 적혈구응집 반응(RPHA). RPGA와 RIBT, RIF-abs, CSR, MRP를 이용하여 얻은 결과를 비교한 결과, 매독 진단에 있어 RPGA의 높은 민감도와 특이도가 RIF-abs의 결과와 일치하는 것으로 나타났다.

RPGA는 정성적 버전과 정량적 버전으로 수행될 수 있으며 거시적 수정과 미시적 수정이 있습니다. 정량적 RPGA 방법을 사용하면 혈액 내 특정 트레포네마 항체의 농도를 추정할 수 있습니다. 과거 매독 치료를 받은 환자의 경우 1:640 이하의 역가가 일반적입니다. 활동성, 치료되지 않은 감염의 경우 역가가 더 높은 것이 일반적입니다.

RPGA의 양성 결과는 대개 하감이 나타난 후 3주 후에 나타나며, 수년 동안, 종종 평생 동안 매독을 앓은 환자의 경우에는 나타납니다.

일차 매독에 대한 RPGA의 민감도는 76%입니다. 2차 매독의 경우 100%; 잠복 매독의 경우 97%; 후기 매독의 경우 94%. RPGA의 특이도는 RIF–abs의 특이도보다 99%로 높습니다.

매독 혈청진단을 위한 트레포네마 검사 중 높은 특이도, 민감도, 수행 용이성, 시약의 표준화 비율로 인해 RPGA는 전 세계 임상에서 꾸준히 선두 자리를 차지하고 있습니다.

ELISA의 특별한 장점방법의 높은 민감도와 특이성; 반응 설정 자동화; 높은 수준의 표준화; 다수의 혈청 샘플을 연구하는 능력; 얻은 결과에 대한 정량적 회계 및 객관적인 문서화 하나의 샘플에서 다양한 클래스(IgG 및 IgM)의 항트레포네마 항체 역가를 동시에 측정할 가능성; 매독의 조기 진단 및 선천성 매독 진단에 대한 적합성; 수혈 서비스에서 혈액 검사에 사용하기 쉽습니다. 확증적인 특정 트레포네마 검사로서의 적용 가능성. ELISA 민감도는 98~100%, 특이도는 96~100%입니다.

ELISA의 단점은 다음과 같습니다: 단일 샘플 연구에 부적합함; 예를 들어 RPGA에 비해 결과를 얻기까지 더 오랜 시간이 걸리고 ELISA 키트의 유효 기간이 더 짧습니다.

면역 오점(IB).매독을 진단하는 현대적인 방법 중 하나는 특정 Treponema pallidum 항체에 대한 IgG 또는 IgM 항체를 확인하는 IB입니다.

이 방법은 높은 민감도(최대 100%), 특이도(98%) 및 재현성(100%)을 갖습니다. 이번 연구를 통해 비특이적 혈청 반응성을 최소한으로 감소시키는 고도로 정제된 재조합 항원과 펩타이드 항원을 사용하여 여러 T. pallidum 항원에 대한 항체의 스펙트럼을 한 번에 연구할 수 있게 되었습니다.

이 모든 것은 어려운 경우 매독 진단을 확인하기 위해 다른 트레포네마 검사보다 IB 방법의 사용을 선호할 가능성을 결정합니다. 특히 잠복기 후반의 매독 진단, 잠복기 첫날의 잠복 선천 매독 진단을 위해. 체액 반응이 약한 사람의 잠복 매독을 확인하고 위양성 결과를 다른 검사와 구별하기 위한 것입니다.

전염병은 아픈 사람의 혈액에서 적절한 항체 생산을 시작합니다. 이것이 신체의 면역 방어가 작동하는 방식입니다.

특정 바이러스나 박테리아에 대한 항체의 존재를 확인하면 질병의 주요 증상이 나타나기 전에 질병의 발병을 알아낼 수 있습니다. 오늘날 혈청학적 테스트는 가장 완벽한 그림을 제공합니다. 따라서 이번 글에서는 혈청학적 검사에 대해 이야기해보겠습니다.

혈청학적 검사란 무엇인가

감염과의 싸움에서 보호 반응으로 신체가 생성하는 항체나 항원을 검출할 수 있는 사람과 동물의 생물학적 물질을 연구하는 방법을 혈청학적 연구라고 합니다. 이러한 방법은 감염의 원인을 확인하고 다음 목적으로 사용됩니다.

혈액형 결정,
체액 성분의 수준을 결정하여 면역력을 연구하고,
조직 항원의 결정.

누구에게 처방되나요?

왜 하는가?

이 방법은 질병에 대한 고품질 진단을 내리는 방법으로 전문가들에 의해 높이 평가됩니다.

환자가 질병 단계에 있는 경우, 사용된 치료법의 효과를 모니터링하기 위해 약 1주일 간격으로 반복 연구를 수행하는 것이 좋습니다.
혈청학적 검사는 환자가 질병을 앓은 후 어떤 병원체가 질병을 일으켰는지 확인하는 데 종종 사용됩니다.

절차 유형

혈청학적 연구 방법은 다양한 반응을 기반으로 합니다.

중화반응면역 혈청 항체의 특성에 의존하여 독소나 미생물 자체에 대한 중화제 역할을 하여 손상 효과를 방지합니다.
응집반응, 이는 다음과 같은 하위 유형으로 나뉩니다.
- 직접 반응 - 항체가 있는지 혈청을 검사하는 데 사용됩니다. 연구 대상 조성물에 죽은 미생물이 추가되며 침전물이 플레이크 형태로 나타나면 이러한 유형의 미생물에 대한 반응이 긍정적임을 의미합니다.
- 간접 적혈구응집 반응은 항원이 흡착된 혈청 적혈구에 도입하여 수행되며; 이들 제제는 혈청에 존재하는 동일한 종류의 항원과 상호작용하여 부채꼴 침전물을 생성합니다.
보체와 관련된 반응전염병을 탐지하는 데 사용됩니다. 이 방법은 보체의 활성화와 연구 중인 배지에서 발생하는 반응의 관찰을 통해 구현됩니다.
침전 반응항원 용액을 액체 배지(면역 혈청) 위에 층층이 쌓아서 수행됩니다. 이 방법에 사용되는 항원은 가용성입니다. 반응은 항원-항체 복합체가 침전되는 것입니다. 생성된 침전물을 침전물이라고 합니다.
표지된 항원과 항체를 이용한 반응특정 방식으로 처리된 미생물이나 조직 항원이 자외선의 영향을 받아 빛을 방출하는 능력을 획득한다는 사실에 기초합니다. 이 방법은 항원을 진단하는 것뿐만 아니라 의약물질, 효소, 호르몬을 결정하는 데에도 사용됩니다.