Uzimanje patološkog materijala za dijagnostiku mikoza i njegovo mikroskopsko ispitivanje. Laboratorijska dijagnostika mikoza Metode mikrobiološke dijagnostike i prevencije mikoza

Sadržaj

Izuzetno je teško identificirati leziju i odrediti patogen kada je gljiva zaražena u prvim fazama. Dijagnoza je komplicirana činjenicom da se patologija ne manifestira odmah ili ima različite simptome. Da bi se odredio patogen, biomaterijal se uzima iz područja zahvaćenog patogenom mikroflorom: sputum, dio kože, zaraženi nokat, krv, biopsija limfnih čvorova ili unutarnjih organa.

Što su gljivične bolesti

Kako izgleda

Razlog za kontaktiranje dermatologa su, u pravilu, prve patološke manifestacije bolesti. Klinički znakovi će se razlikovati ovisno o mjestu infekcije i uzročniku gljivične bolesti. Razlikuju se sljedeće vrste patogenih mikroorganizama:

• gljivica Candida – uzrokuje infekcije kandidijaze;
• Trichophyton (Trichophyton) - izaziva zarazne patologije noktiju, kože, sluznice;
• Kriptokokoza - napada unutarnje organe, pluća;
• Aspergiloza je gljivična bolest uzrokovana smanjenim imunitetom.

Tijekom dijagnoze lokalizacijom se može odrediti jedna od 2 skupine infekcija:

Patogena mikroflora prodire kroz rane na površini epidermisa, mikrotraume, uzrok bolesti može biti svaka ogrebotina koja izaziva mikozu glatke kože. Tijelo se ne može nositi s napadom patogena kada su njegove zaštitne funkcije smanjene. Tijekom dijagnoze često se utvrđuje infekcija rodom Trichophyton ili Candida. Potonji uzrokuju sljedeće bolesti:

• drozd;
• kandidijaza kod muškaraca;
• oralna kandidijaza.

Postoji više od nekoliko desetaka patogena, podijeljeni su prema načinu oštećenja tkiva. Tijekom dijagnoze mogu se identificirati sljedeće vrste gljivičnih mikroorganizama:

• duboke sistemske mikoze izaziva Histoplasma capsulatum;
• subkutane subkutane mikoze uzrokuje Sportrichum schenckii;
• epidermomikoza se razvija zbog Epidermophyton floccosum;
• pityriasis versicolor, površinska mikoza - Malassezia furfur;
• oportunističke gljivične bolesti - Candida albicans.

Klasifikacija mikoza

Opći naziv svih bolesti ove vrste skriva različite vrste oštećenja ljudskog tijela gljivicama. Prilikom dijagnosticiranja liječnici kožne bolesti dijele u 4 skupine:

1. Keratomikoza. Mjesto lokalizacije postaje stratum corneum epidermisa; u ostalim slojevima kože nema upalnih pojava (piedra, pityriasis versicolor, krasta, sporotrichosis). Sljedeće gljive uzrokuju ovu vrstu patologije: Sporotrichium, Trichosporon, Piedraia, Exophiala, Pityrosporum.
2. Dermatomikoze. Karakterizira ih izražen upalni proces, lokaliziran na koži, vlasištu i noktima (faus, trichophytosis, epidermophytosis, microsporia). Sljedeći sojevi gljivica izazivaju patologije: Epidermophyton, Microsporum, Trichophyton.
3. Kandidijaza. Ova vrsta gljivica utječe na sluznicu, kožu i njezine dodatke. Unutarnji organi često su meta napada gljivica roda Candida.
4. Duboke mikoze. Izazivaju teške infekcije svih slojeva kože, unutarnjih organa, sluznica, kostiju, mišića (mukoroza, peniciloza, aspergiloza).

Postoje zasebne pseudomikoze (aktinomikoza, eritrasma), koje nisu gljivične bolesti, ali su im simptomi slični pravim mikozama. U tim slučajevima potrebna je diferencijalna dijagnoza. Dijagnostika je u takvim slučajevima vrlo važna jer pomaže odrediti vrstu gljivične infekcije ili je isključiti. O tome ovisi svrha režima liječenja, njegovo trajanje i učinkovitost.

Dermatomikoze

Dermatofitne gljivice prodiru duboko u kožu i izazivaju dermatomikozu, na primjer, sljedeće poznate patologije:

• mikrosporija;
• trichophytosis;
• altetsko stopalo;
• rubrofitija;
• omiljeni.

Ova vrsta patologije svrstava se među razne bolesti koje stvaraju ožiljke, deformacije šaka, noktiju nogu, promjene strukture i gubitak kose. Patogeni utječu na gornje, duboke slojeve kože, što dovodi do pojave čvorova poput čireva, pustularnih osipa i opsežnih žarišta upale. Povoljan uvjet za razvoj je loša higijena stopala. Gljivice se prvo razvijaju na koži stopala, u prostorima između prstiju, zatim se šire na nokte.

Kandidijaza

Patogeni mikroorganizmi zahvaćaju duboke i površne slojeve kože, šireći se na nokte, kosu i unutarnje organe. Bolesti su uzrokovane gljivicama iz roda Candida, bolesti pripadaju skupini kandidijaza. Razlikuju se sljedeće vrste ovih bolesti:

• generalizirano;
• površno;
• visceralni.

Gljivice Candida klasificiraju se kao oportunističke. Uzročnici slični kvascu mogu se otkriti tijekom dijagnoze u crijevima, usnoj šupljini i kod zdrave osobe. Jak imunitet koči širenje patogenih mikroorganizama, a kada oslabi počinje aktivno razmnožavanje kandide, što dovodi do oštećenja kože trupa, stopala, glave i ruku. Kliničke promjene opažaju se kod svih vrsta kandidijaza. Liječenje ovisi o težini bolesti i vrsti lezije.

Duboka mikoza

Ovo je vrsta bolesti koja zahvaća duboke slojeve kože i unutarnje organe. Bolesti se razvijaju jakim smanjenjem tjelesne obrane, promjenama hormonalnih razina i metaboličkim poremećajima. Sljedeće patologije klasificiraju se kao duboke mikoze:

• kokcidioidoza;
• kromomikoza;
• rinosporidioza;
• histoplazmoza;
• sporotrihoza;
• blastomikoza;
• mukoroza;
• cefalosporioza;
• micetom;
• kladosporioza;
• madura stopala;
• aspergiloza.

Keratomikoza

Ovo je skupina patologija koje su lokalizirane samo na kutikulama kose, stratum corneumu i površinskom sloju kože. Karakterističan znak keratomikoze je odsutnost upalnih pojava. Uzročnici bolesti su plijesni, gljivice slične kvascu, dermatofiti (oko 70 vrsta patogena). Oni izazivaju sljedeće bolesti:

• shimberi;
• pityriasis alba;
• crni lišaj;
• imbricate mycosis;
• tropski bijeli i žuti lišaj;
• nodularna trihosporija;
• piedra;
• pityriasis versicolor (pityriasis versicolor).

Kako dijagnosticirati gljivice

Zatim počinje vizualni pregled, koji pomaže u određivanju opsega oštećenja i područja zahvaćenih gljivicama. Liječnik treba obratiti pozornost na prisutnost stanja imunodeficijencije pacijenta. Za određivanje vrste patogena potrebno je prikupiti materijal koji se šalje na laboratorijsko ispitivanje. Iskusni liječnik može postaviti dijagnozu tijekom početnog pregleda, ali da biste sastavili režim liječenja, još uvijek morate proučiti biomaterijal. Za dijagnosticiranje gljivičnih bolesti koriste se sljedeće metode:

• mikroskopija - ispitivanje biomaterijala pod mikroskopom, uobičajena i jednostavna dijagnostička metoda;
• pregled pod Woodovom svjetiljkom - poseban spektar ultraljubičastog osvjetljenja (luminiscencija) pomaže uočiti gljivične lezije;
• bakteriološka kultura je točna metoda dijagnoze, ali potrebno je 2-3 tjedna dok kolonija ne raste na hranjivom mediju;
• PCR dijagnostika je najprecizniji način utvrđivanja vrste patogene mikroflore, ali točna dijagnoza može zahtijevati nekoliko testova, što zahtijeva trošenje novca.

Laboratorijske metode

Samo pravovremena, točna dijagnoza pomoći će propisati učinkovit režim liječenja i smanjiti trajanje tečaja. Laboratorijska dijagnoza gljivičnih bolesti je najučinkovitija metoda za određivanje vrste patogena. Za identifikaciju koriste se sljedeće mogućnosti istraživanja:

• bakteriološka kultura;
• histološka analiza;
• PCR dijagnostika;
• imunološka istraživanja;
• mikrobiološke studije;
• istraživanje kulture.

Diferencijalna dijagnoza mikoza

Postavljanje točne dijagnoze je teško jer različite vrste mikoza uzrokuju različite simptome. U takvim slučajevima koristi se diferencijalna dijagnostička metoda i uspoređuje se mikoza s drugim dermatološkim patologijama. Često se znakovi mikoze zbunjuju s psorijazom, ali kada se ljuske ostružu, gljivična patologija neće krvariti. Slični simptomi se opažaju kod parapsorijaze.

Liječnik mora isključiti mogućnost razvoja numularnog ekcema. Ovo je posebna vrsta patologije koja se može otkriti samo laboratorijskom dijagnostikom. Često se znakovi gljivica pogrešno smatraju polimorfnom fotodermatozom, koja se može razviti samo kod odrasle osobe, a nikada se ne pojavljuje kod djeteta. Za postavljanje točne dijagnoze i propisivanje kompetentnog liječenja potrebna je laboratorijska i diferencijalna dijagnostika.

Mikrobiološka dijagnostika mikoza

Ovo je najjednostavniji i najčešći način otkrivanja mikoza na koži i u krvi. Za točnu dijagnozu potrebno je prikupiti materijal za istraživanje. Ako je zahvaćeno vlasište, potrebno je pincetom pokupiti zahvaćenu kosu i ostrugati oštećeno područje s kože. Laboratorijska ispitivanja gljivičnih bolesti mikrobiološkom metodom provode se stavljanjem biomaterijala u 30% otopinu kalijevog hidroksida, a zatim na stakalcu.

Analiza će pomoći odrediti gdje se nalazi gljiva (izvan ili unutar kože, dlake), te njezinu veličinu. Ako je materijal pogrešno prikupljen, analiza može dati pogrešan rezultat. Za dijagnozu se koriste sljedeće mikrobiološke dijagnostičke metode:

• mikroskopiranje nativnim i neobojenim preparatima;
• mikroskopija s obojenim preparatima.

Metode istraživanja

Prilikom postavljanja dijagnoze stručnjak mora uzeti u obzir strukturu micelija (strukturu hifa, njihovu septaciju, boju), strukturne značajke spora, kondija, njihovu boju, oblik i veličinu, strukturu stanične stijenke itd. uzimaju se u obzir. Za studiju se pripremaju nativni, obojeni preparati. Potonji zahtijevaju obradu materijala na različite načine:

1. PAS bojenje. Ova vrsta bojenja pomaže identificirati neutralne polisaharide u stijenkama mikroorganizama. To uključuje kompleks glukan-manan, koji se nalazi u staničnoj stijenci mnogih eumiceta. Izaziva proces bojenja.
2. PAS reakcija. Koristi se za dijagnosticiranje gljivične infekcije oblika tkiva. U laboratoriju se za ovu studiju koriste različite modifikacije, na primjer, Gridley bojenje ili Bauerova reakcija.
3. Metoda po Gramu. Bojanje na ovaj način pomaže u prepoznavanju prisutnosti popratnih mikroorganizama.
4. Ziehl-Nielsonovo bojenje. Pomaže u prepoznavanju mikroorganizama otpornih na kiseline. Ako je biomaterijal tekući, pripremite poseban neobojeni razmaz u prozirnim tekućinama za mikroskopiranje: glicerin i alkohol se miješaju u jednakim omjerima.

Test kulture na gljivice

Biomaterijal se stavlja na hranjivi medij (uzgoj) kako bi se izolirala čista kultura na sobnoj temperaturi. Dimorfne gljive u takvim uvjetima stvaraju micelij, a kada rastu do 37 stupnjeva, počinju se formirati stanice slične kvascu. Sabouraudov medij koristi se za dermatofite i gljivice Candida, a za pljesnive (hifalne) gljive potreban je Czapekov medij. U sastav se često dodaje antibiotik. Duboke mikoze mogu se odrediti samo u kliničkim laboratorijskim centrima zbog njihove visoke zaraznosti.

Luminescentna dijagnostika gljivičnih bolesti

Za prepoznavanje zahvaćenih područja kože s patogenom mikroflorom roda Microsporum koristi se ultraljubičasta svjetiljka. Ovo je opcija za ekspresnu dijagnostiku, koja se koristi ako je potrebno potvrditi prisutnost infekcije kože ili simptome bolesti lišajeva. Ultraljubičasto zračenje nije glavni način određivanja gljivica, to je pomoćna metoda, pa nije potrebna.

Za pregled pacijenta koristi se Woodova svjetiljka, emitiraju UV zračenje, pod njihovim utjecajem otpadni proizvodi gljivica svijetle jakim svjetlom. Boja ovisi o vrsti patogena koji je zahvatio pacijenta:

• zelenkasto – lišajevi na tjemenu;
• plava - eritematozni lupus na usnama;
• žućkasto – plosnate lišajeve tvorevine.

Imunološki enzimski test krvi za gljivice

Za otkrivanje mikoza koje su zahvatile kožu i unutarnje organe (histoplazmoza, kokcidioidoza), koristi se imunološki enzimski krvni test za gljivične bolesti. Ova se tehnika često koristi ako iz određenih razloga nije moguće uzeti biopsiju tkiva za proučavanje. Tehnika se temelji na traženju titra protutijela na određenu vrstu gljivične bolesti.

U ove svrhe koristi se određivanje IgG za aspergilozu i kandidijazu. Točnost analize je oko 80%, u rijetkim slučajevima možete dobiti lažno pozitivan rezultat u nedostatku dubokih mikoza. To se događa kada pacijent ima gljivice na sluznici usne šupljine ili uznapredovali oblik soora. ELISA zahtijeva uzorak venske krvi, rano ujutro ili 4 sata nakon zadnjeg obroka. Za analizu nije potrebna nikakva druga priprema.

Odgovor na analizu bit će nekoliko dana nakon prikupljanja biomaterijala. Rijetko karenca prelazi 5 dana. Kvaliteta opreme u laboratoriju utječe na brzinu studije, ako postoje razlozi za provođenje dodatnog istraživanja uzoraka krvi. Nakon završetka postupka, pacijentu se daje zaključak koji će navesti jednu od sljedećih vrijednosti:

• ako se potvrdi prisutnost gljivica, bit će napisano "pozitivan rezultat";
• ako nema potpune sigurnosti da je gljivica otkrivena u krvi, pišu "sumnjiv rezultat";
• u nedostatku patogene mikroflore u uzorku biomaterijala, piše se "negativan rezultat";
• Ako imate dobru opremu, krvni testovi mogu odrediti koncentraciju stanica mikoze i naznačiti pokazatelj u zaključku.

PCR dijagnostika gljivičnih bolesti

Najprecizniji i najpouzdaniji način dijagnosticiranja gljivica i drugih zaraznih bolesti je lančana reakcija više veličina. Dijagnostička metoda ima sljedeće prednosti:

• niska cijena analize;
• visoka točnost;
• istraživanje biomaterijala provodi se brzo;
• Za analizu možete uzeti bilo koji uzorak tkiva (komadić kože, sluznice, strugotinu s tabana, prstiju, površine noktiju, kosu, krv).

Glavno ograničenje ove studije je njezin uski fokus. Da biste dijagnosticirali mikozu, morate točno znati gdje je utjecala na ljudsko tijelo. PCR određuje vrstu patogena i njegovu koncentraciju u tijelu pacijenta. Rezultati će biti poznati za jedan dan, u nekim slučajevima (u nedostatku nepovoljnih uvjeta), odgovori dolaze na dan isporuke (za 5-6 sati). Brzina studije ovisi o ispravnosti prikupljanja uzorka, iskustvu medicinskog osoblja i opterećenju laboratorija.

Kako prepoznati gljivice kod kuće

Uz sposobnost prepoznavanja simptoma mikotičnih patologija i korištenje kućnih dijagnostičkih metoda, moguće je odrediti vrstu patogena. Pacijent mora ispravno procijeniti tijek bolesti, u ranim fazama, gljivična bolest može se zamijeniti s psorijazom ili lišajem. Da biste to izbjegli, morate znati glavne znakove mikoze, koji je razlikuju od drugih bolesti. Simptomi gljivične infekcije:

• nokti postaju žuti i počinju se ljuštiti;
• promjena oblika ploče nokta;
• nema razdoblja remisije i egzacerbacije, počinje potpuno odvajanje ploče, što se ne događa s kožnim patologijama i psorijazom;
• zahvaćeno područje ima neugodan miris, boli na dodir, svrbež, ljuštenje, a na površini kože mogu se formirati plakovi;
• Gljivice obično zahvaćaju prostore između prstiju na jednoj ili obje noge, zatim se bolest širi na nokat i ostatak stopala.

Dijagnosticiranje gljivica na noktima nogu pomoću kalijevog permanganata

Ako primijetite da su se nokti na prstima na rukama i nogama počeli mijenjati ili da se pojavio neugodan miris, možete provjeriti prisutnost ili odsutnost infekcije kod kuće. Trebat će vam mangan, topla voda i spremnik za analizu. Postupak se provodi na sljedeći način:

• ako postoje znakovi kožne bolesti, nanesite tanki sloj joda na ovo područje;
• pričekajte 2 minute;
• ako postoji problem, tada će lezije poprimiti bogatu boju;
• zdrava područja kože neće biti istaknuta.

Koliko košta dijagnosticiranje gljivičnih bolesti u moskovskim klinikama?

Video

Pažnja! Informacije predstavljene u članku samo su u informativne svrhe. Materijali u članku ne potiču samoliječenje. Samo kvalificirani liječnik može postaviti dijagnozu i dati preporuke za liječenje na temelju individualnih karakteristika pojedinog pacijenta.

4402 0

Nažalost, i danas se može konstatirati da je dijagnoza gljivičnih oboljenja često nepravodobna (područja prorijeđene kose, ljuskanja često se pogrešno zamjenjuju s “prhuti”, “suhoćom”). Istodobno, subjektivni osjećaji (svrbež, bol, itd.) Često se ne pojavljuju u lezijama, a pacijenti se zbog toga dugo ne obraćaju stručnjaku.

Promjene na noktima (ružni, mrvi, stanjeni) smatraju se "onihodistrofijom" nakon modrice, ozebline itd. Istodobno (čak i izolirane lezije, uključujući nokte) mogu dovesti do stvaranja alergijskih promjena u tijelu, utječući na krvožilni i limfni sustav krvne žile itd. Bolesnici ostaju izvor gljivične infekcije na neodređeno vrijeme. U vezi s navedenim uvijek je aktualna pravovremena laboratorijska dijagnostika mikoza i eventualno rano liječenje.

Raznolikost kliničkih varijanti gljivičnih bolesti, uglavnom pronađenih kod ljudi, kao i mikrobiološke, morfostrukturne, imunološke i druge karakteristike različitih vrsta (i rodova) gljiva uvjetovale su dostupnost značajnog broja metoda za dijagnosticiranje mikoza. ; Treba napomenuti da se dostupne metode stalno poboljšavaju i (relativno nedavno) imaju posebnu pristranost prema imunološkim i molekularno-genetičkim testovima.

S druge strane, kulturalne studije su još uvijek “blizu zlatnih standarda” i koriste se za potvrđivanje dvojbenih rezultata drugih studija; Postoji mišljenje da je kombinacija kulturalnih i molekularno-genetičkih metoda za dijagnostički "upitne" oblike mikoza (osobito diseminirane, na pozadini imunosupresije bilo kojeg podrijetla, s oštećenjem unutarnjih organa itd.) jedna od najpouzdanijih. načini registracije mikotičnosti procesa.

No, ne treba zanemariti ni “stare” metode, posebice bakterioskopiju (osobito tijekom inicijalnog pregleda), tim više što se u svakodnevnoj praksi mikroskopska “verifikacija” mikoza u mnogim dermatološkim ustanovama najviše koristi u usporedbi s drugim pretragama.

Uzimajući u obzir značajno povećanje broja alergijskih manifestacija na koži (a ponekad i visceralnim) - u slučaju dugotrajnog, kroničnog, povremeno pogoršanog tijeka mikoze (koža, nokti, itd.), preporučljivo je provesti alergološke testovi za utvrđivanje stupnja senzibilizacije tijela, uključujući kombiniranu gljivično-bakterijsku infekciju; ta činjenica može utjecati na specifičnosti liječenja pojedinog bolesnika - na primjer, odrediti racionalno propisivanje antimikotika i desenzibilizirajućih sredstava itd.

Tradicionalno, pretpostavljena dijagnoza gljivične bolesti postavlja se na temelju kliničkih manifestacija i potvrđuje laboratorijskim testovima.

U ovom dijelu knjige ukratko dajemo osnovne metode snimanja mikoza (bez obzira na njihovu lokaciju), uzimajući u obzir "vrstu studije i uzeti materijal". Valja napomenuti da polimorfizam kliničkih manifestacija mikoza (uključujući one s alergijskom komponentom) određuje raznolikost patološkog materijala koji se ispituje. U isto vrijeme, uspjeh traženja elemenata gljive ovisi o njezinom pravilnom odabiru.

Dakle, periferna zona eritematoskvamoznih, često figuriranih osipa bogatija je micelijem, gljivičnim sporama; na dlakavim područjima lezije uzimaju se kovrčave, bjelkaste, izbijeljene, dosadne dlake ili njihovi fragmenti - „patrljci” (preporučljivo je kontrolirati sakupljanje dlaka pomoću Woodove lampe). Određene vještine potrebne su za prikupljanje materijala (pomoću igle) iz tzv. "crne točkice" - tamni rožnati češeri na ustima folikula.

U svakodnevnoj praksi najčešće se pregledavaju ljuskice kože (sakupljene struganjem, mazanjem, ljepljivom trakom), struganje obojenih noktiju, područje subungualne hiperkeratoze, kao i iscjedak sluznice. Prema indikacijama, ispituje se ispljuvak, tekućina za ispiranje i urin (u bolesnika s nekateteriziranim mjehurom); urin iz pisoara i noćnih posuda ne može se prikupljati za istraživanje.

Dijagnostičku vrijednost imaju i krv (za kulturološki pregled, kao i ELISA, PCR), cerebrospinalna tekućina i druge tjelesne tekućine (pleuralne, intraartikularne, intraperitonealne – uključujući one prikupljene aspiracijom ili drenažom); u nekim slučajevima (ovisno o topikalnoj dijagnozi) važni su žuč, feces, punktati potkožnih apscesa i iscjedak iz fistula (osobito kod dubokih mikoza). Čak i jednostavni dijagnostički testovi zahtijevaju strogo pridržavanje niza uvjeta.

Trenutno se koriste sljedeće metode za dijagnosticiranje gljivičnih bolesti:
- mikroskopija; temelji se na otkrivanju patogena u ispitivanom materijalu, uklj. u ljudskim tkivima;
- kulturalni pregled nakon kojeg slijedi mikroskopski pregled kulture gljivica;
- histološki pregled (g.o. za duboke mikoze);
- imunološke i molekularne metode.

Mikroskopska dijagnostika

Mikroskopska dijagnostika uključuje proučavanje neobojanih (nativnih) i obojenih preparata. Ova je metoda, kao što je navedeno, najzastupljenija u dermatološkoj praksi zbog svoje razmjerne jednostavnosti i niske cijene, no, s druge strane, nije dovoljno osjetljiva i zahtijeva u nekim slučajevima ponovljena ispitivanja i potvrdu drugim metodama.

Tako se pri pregledu neobojanih preparata, osim gljivičnih elemenata, mogu detektirati epitelne stanice, krvne stanice i različiti kontaminanti iz vanjske sredine, što otežava pronalaženje uzročnika mikoze i zahtijeva dodatnu "pripremu" materijala - takozvani. “prosvjetljivanje” (maceracija), koncentracija, razrjeđivanje itd.

Unatoč tome, izravna mikroskopija nativnih pripravaka omogućuje brzo dijagnosticiranje mikoze i određivanje na koje hranjive podloge (ako je potrebno) materijal treba inokulirati; postoji mišljenje da pozitivan nalaz može ostati jedina laboratorijska potvrda mikoze s negativnim odgovorom. u kulturi (A.Yu. Sergeev, Yu.V.Sergeev, 2003).

Među raznim opcijama za “pročišćavanje” lijekova, najčešći je dodatak KOH ili NaOH ispitivanom materijalu (češće se koristi za otkrivanje gljivica u ljuskama kože, kosi, kao i niza uzročnika dubokih mikoza u ispljuvku i uzorci biopsije).

Za maceraciju usitnjenog i nanesenog na predmetno staklo koristi se 10-20% otopina kaustične sode (ili kalija) - 1-3 kapi, 10-20 minuta; Pripravak se lagano pritisne pokrovnim staklom, a radi brže maceracije zagrijava se na plamenu do pojave para. Gledanje se provodi prvo pod malim povećanjem, zatim pod velikim povećanjem (suhi sustav).

Pravilno pripremljen pripravak koji nije podvrgnut oštrim mehaničkim, toplinskim i kemijskim utjecajima daje sliku homogene mase koju čine epitelne stanice, produkti staničnog raspada gljivičnih elemenata - niti micelija i spore.

Promijenjena dlaka se stavlja na predmetno stakalce s 10-30% lužinom i tretira na isti način, ali duže vrijeme - od 20 minuta do 3-4 sata.Ako je sadržaj pigmenta obilan, preporuča se prvo izbjeljivanje. kosu 5% otopinom hidrogen peroksida. Pridaju važnost otkrivanju gljivičnih elemenata, kao i njihovom položaju u odnosu na kosu.

Priprema materijala od patološki promijenjenih noktiju (po mogućnosti finog praha dobivenog struganjem iz dubine lezije) provodi se na sličan način, ali uz upotrebu 30% kaustične sode, uz obavezno pažljivo zagrijavanje na plamenu do laganih para i izlaganje za oko 1 sat (ponekad i do nekoliko sati). Pripravci tretirani lužinama ne smiju se čuvati dulje od 1,5-2 sata zbog njihovog "kvarenja" (kristalizacija reagensa, smanjenje dijagnostičke pouzdanosti utvrđene mikroskopskom slikom).

Umjesto KOH ili NaOH može se koristiti: a) otopina mješavine KOH s 15% DMSO; b) smjesa fenola (2 dijela) s kloralhidratom (2 dijela) i mliječnom kiselinom (1 dio); c) kalkofluor bijeli, koji ima afinitet prema hijaginu i celulozi; Za istraživanje je potreban fluorescentni mikroskop (primjećuje se plavi ili zeleni sjaj, što ovisi o korištenom filteru). Pri ispitivanju cerebrospinalne tekućine (ako postoji sumnja na kriptokokozu) često se koristilo bojenje tintom.

Kulaga V.V., Romanenko I.M., Afonin S.L., Kulaga S.M.

Precizna dijagnostika invazivnih mikoza Nije lako. To se objašnjava ne samo poteškoćama u dobivanju kulture gljiva, već iu tumačenju rezultata istraživanja, budući da gljive, i kvasce i filamentoze, mogu kolonizirati sluznice i kontaminirati proučavane uzorke. U tom smislu, dijagnoza invazivnih mikoza temelji se na integriranom pristupu, uključujući ne samo rezultate mikoloških (kulturalnih) i seroloških (određivanje gljivičnog antigena) studija, već i kliničkih simptoma gljivične infekcije, podataka iz pomoćnih istraživačkih metoda ( kompjuterska ili magnetska rezonancija, ultrazvuk).

Europsko-američka skupina za suradnju za proučavanje invazivnih mikoza Kriteriji za dijagnosticiranje invazivnih mikoza razvijeni su u imunokompromitiranih bolesnika. Predstavljeni su 2001. na Međunarodnoj konferenciji o antimikrobnim lijekovima i kemoterapiji (ICAAC, Chicago), a 2002. u tisku. Definirani su kriteriji za dokazanu, vjerojatnu i moguću invazivnu mikozu koji se preporučuju za korištenje u kliničkim i epidemiološkim studijama.

Dokazana invazivna mikoza uzrokovana filamentoznim gljivama: otkrivanje gljivičnog micelija u biopsijama ili aspiratima tijekom histološkog ili citološkog pregleda ili izolacija kulture iz uzoraka dobivenih u aseptičkim uvjetima iz normalno sterilne lezije, što je, prema rezultatima kliničkih i radioloških studija, povezano s infekcijom, s izuzetak su studije urina i sluznice.

Dokazana invazivna mikoza uzrokovana kvasnim gljivicama: otkrivanje stanica kvasca (gljivice roda Candida mogu tvoriti pseudomicelij ili pravi micelij) u biopsijama ili aspiratima, s iznimkom uzoraka sa sluznica, ili izolacija kulture iz uzoraka dobivenih u aseptičnim uvjetima iz normalno sterilne lezije, koja prema na rezultate kliničkog i radiološkog pregleda povezanog s infekcijom, s iznimkom urina, uzoraka iz sinusa i sluznice, ili otkrivanje mikroskopijom i specifičnim bojenjem (u kapi indijske tinte, mucikarminom) stanica kvasca ili pozitivan antigen Cryptococcus spp. u cerebrospinalnoj tekućini.

Fungemija uzrokovana filamentoznim gljivama: izolacija hemokulture gljivica, s izuzetkom Aspergillus spp. i Penicillium spp., uključujući Penicillium marneffei, u kombinaciji s kliničkim simptomima infektivnog procesa kompatibilnog s izoliranim patogenom.

Fungemija uzrokovana kvasnim gljivicama: izolacija iz hemokulture Candide ili drugih gljivica kvasca iz bolesnika s kliničkim znakovima infekcije povezane s ovim patogenom.

Kompleks dijagnostičkih studija za invazivne mikoze

Moguća invazivna mikoza dijagnosticira se na temelju kombinacije sljedećih kriterija:
jedan znak iz kategorije mikrobioloških kriterija;
jedan znak iz kategorije "značajnih" ili dva iz skupine "manje značajnih" kliničkih simptoma infektivnog procesa.

Moguća invazivna mikoza dijagnosticira se na temelju kombinacije sljedećih kriterija:
prisutnost barem jednog čimbenika rizika koji potiče razvoj invazivne mikoze;
jedan znak iz kategorije mikrobioloških kriterija ili jedan znak iz kategorije "značajnih" (dva iz skupine "manje značajnih") kliničkih simptoma infektivnog procesa.

Koncept " moguća invazivna mikoza» Ne preporučuje se za korištenje u kliničkim ispitivanjima koja proučavaju učinkovitost antifungalnih lijekova. Ovaj izraz možete koristiti kada analizirate empirijsku terapiju protiv gljivica, epidemiološke studije i proučavate farmakoekonomiju.

Na mikološka istraživanja sterilni aspirati ili biopsije uzimaju u obzir ne samo izolaciju gljivičnih kultura, već i detekciju micelija ili pseudomicelija mikroskopijom. U histološkim preparatima Aspergillus je teško razlikovati od Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum i nekih drugih filamentoznih gljiva. Za diferencijalnu dijagnozu potrebno je provesti imunohistokemijsku studiju s protutijelima na Aspergillus.

Izolacija gljivica kvasca iz krvi u barem jednoj studiji spada u kategoriju “dokazanih” invazivnih mikoza i apsolutna je indikacija za propisivanje sistemskih antimikotika u bolesnika s neutropenijom. Učestalost otkrivanja kvasnih gljivica iz krvi je niska, čak i kod diseminirane kandidijaze iznosi 35-50%.
Izvođenje ponovljene hemokulture povećava vjerojatnost dobivanja pozitivnih rezultata.

ostalo tumačenje rezultati u slučaju otkrivanja filamentoznih gljiva u krvi. Visoka učestalost izolacije filamentoznih gljiva karakteristična je za Fusarium spp. i iznosi 40-60%. Aspergillus se otkriva iznimno rijetko, u većini slučajeva se smatra kontaminacijom, s izuzetkom Aspergillus terreusa.

Izbor Aspergillus terreus iz krvi bolesnika s hemoblastozama može ukazivati ​​na pravu aspergilemiju, a u prisutnosti kliničkih simptoma infekcije temelj je za propisivanje antimikotika.

Kriteriji za invazivne mikoze

Na otkrivanje u krvi ili drugih sterilnih biosupstrata gljivica kvasca, potrebno je izvršiti identifikaciju na vrstu i odrediti osjetljivost na antifungalne lijekove; kod izolacije filamentoznih (plijesni) gljiva samo identifikacija na vrstu, osjetljivost se ne utvrđuje.

U kliničkom praksa Osjetljivost filamentoznih gljiva nije proučavana zbog nesavršenih standarda za određivanje osjetljivosti takvih gljiva na antimikotike. Štoviše, samo je jedna studija pokazala korelaciju između osjetljivosti Aspergillus spp. te rezultati liječenja invazivne aspergiloze u bolesnika s hematološkim zloćudnim bolestima. Niti jedna od kasnijih studija nije pronašla slične rezultate.

Nedavno su se počela pojavljivati ​​izolirana izvješća o stvaranju stečene rezistencije gljivica A. fumigatus na itrakonazol i vorikonazol.

Određivanje vrsta gljiva, posebice onih dobivenih iz sterilnih lokusa, nužna je prvenstveno za izbor antimikotika i provođenje adekvatne antifungalne terapije. Dakle, Candida krusei je otporna na flukonazol i manje osjetljiva od drugih vrsta kvasca na amfotericin B; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. otporan na amfotericin B; Mucorales su rezistentne na itrakonazol, vorikonazol, Candida glabrata pokazuje dozno ovisnu osjetljivost na flukonazol, a kod izoliranja ove vrste gljivica, čak i osjetljivih sojeva, potrebno je povećati dozu flukonazola (odraslima se propisuje 800 mg umjesto 400 mg); Candida lusitaniae je otporna na amfotericin B.

Određivanje vrsta gljiva važno je i za provođenje epidemiološke analize u bolnici - utvrđivanje uzročnika izbijanja infekcije i, ako je moguće, izvora infekcije. Opisani su izbijanja infekcija uzrokovanih tako rijetkim gljivama kao što su C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Na temelju identifikacija vrsta gljiva Može se pretpostaviti invazivna mikoza ili gljivična kolonizacija sluznice. Na primjer, znatno je manja vjerojatnost da će Aspergillus niger od Aspergillus fumigatus izazvati invazivnu aspergilozu kod pacijenata s akutnom leukemijom. Izolacija Aspergillus niger iz tekućine bronhoalveolarnog lavaža najčešće se smatra kolonizacijom respiratornog trakta, a iz sputuma kontaminacijom iz zraka te zahtijeva dodatna istraživanja pri potvrdi dijagnoze invazivne aspergiloze.

Na temelju izlučevine nitastih gljiva iz sputuma, bronhoalveolarne tekućine i aspirata paranazalnih sinusa, može se samo pretpostaviti invazivna mikoza, bez uključivanja u kategoriju "dokazanih". Međutim, uvijek treba uzeti u obzir otkrivanje Aspergillus u sputumu, osobito Aspergillus fumigatus ili Aspergillus flavus, u bolesnika s neutropenijom koji primaju alogenu koštanu srž. To zahtijeva ponovni mikološki pregled i kompjutoriziranu tomografiju pluća. Dakle, s neutropenijom, vjerojatnost otkrivanja invazivne aspergiloze u slučaju pozitivne kulture Aspergillus spp. u sputumu je 80%.

Izbor Cryptococcus neoformans u imunokompromitiranih bolesnika iz respiratornog trakta (ispiranje, ispiranje) dijagnostički je značajan. Ako identifikacija kvasnih gljivica iz tekućina dobivenih iz respiratornog trakta (traheja, bronhijalni ispirci, bronhoalveolarni ispirci) imunokompromitiranih pacijenata nije potrebno istraživanje, tada je potreban probir za identifikaciju Cryptococcus neoformans iz tih uzoraka.

Otkrivanje kandide u urinu u bolesnika s neutropenijom i vrućicom obično se smatra manifestacijom diseminirane infekcije kandidom.

Pravovremeno dijagnostika invazivne uspješno koriste komercijalni test za otkrivanje cirkulacije specifičnog antigena Aspergillus spp. galactomann (polisaharidna vodotopljiva komponenta stanične stijenke gljive).

Galactomann može se odrediti dvjema metodama: metodom lateks aglutinacije (Pastorex Aspergillus, BioRAD) i metodom enzimskog imunološkog testa (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Prednost enzimska imunološka metoda je donji prag osjetljivosti za određivanje razine galaktomana u krvi - 1 ng/ml ili manje, a lateks aglutinacijom - 15 ng/ml. Dijagnostičku vrijednost ima određivanje galaktomana u krvi (najmanje 2 uzorka), cerebrospinalnoj tekućini i bronhoalveolarnom lavažu. Osjetljivost metode enzimske imunološke analize je oko 90%, specifičnost je 90-99%, u primatelja alogene koštane srži ti su pokazatelji niži i jednaki su 60-70%, odnosno 80-90%, zbog profilaktičke uporaba antifungalnih lijekova (antimikotici smanjuju razinu praga galaktomana).

U 40% slučajeva otkrivanje galactomann u krvi ispred manifestacija invazivne aspergiloze, utvrđenih kompjutorskim pregledom pluća, a u 70% ispred kliničkih simptoma infekcije.

Dijagnostička vrijednost testa za otkrivanje antigena Aspergillus je slučaj ako se studija provodi više puta. Određivanje Aspergillus antigena u krvi treba provesti tijekom vrućice tijekom liječenja antibioticima širokog spektra u bolesnika s neutropenijom 2 puta tjedno; za upalu pluća koja se javlja ili traje tijekom antibakterijske terapije; kada se otkriju lezije u plućnom tkivu (kompjuterizirana tomografija).

Klinička slika gljivičnih bolesti kože vrlo je polimorfna, pa se u svim slučajevima dijagnoza mora potvrditi laboratorijskim istraživačkim metodama. Za laboratorijsku dijagnostiku mikoza koriste se mikroskopske, luminiscentne, kulturološke, imunološke (alergološke i serološke) metode istraživanja, kao i pokusi na životinjama.

Laboratorijska dijagnoza mikoza sastoji se od nekoliko faza. Rutinska klinička praksa obično je ograničena na mikroskopsko i kulturološko ispitivanje kontaminiranog materijala. Ako je potrebno, ove metode se nadopunjuju imunološkim, histološkim studijama i infekcijom pokusnih životinja. Za neke kožne mikoze, luminiscentna metoda ima važnu pomoćnu ulogu u dijagnozi.

Uzimanje patološkog materijala.

Uspjeh laboratorijskih istraživanja mikoza uvelike ovisi o pravilnom prikupljanju patološkog materijala. Budući da gljive mogu inficirati različite ljudske organe, ako se sumnja na mikozu, potrebno je ispitati različite patološke materijale. U dermatološkoj praksi najčešće se susrećemo s mikozama, kod kojih se kožne ljuskice, kosa i nokti podvrgavaju ispitivanju na gljivice. Ako se sumnja na duboke i sistemske mikoze, može postojati potreba za laboratorijskom dijagnostikom gljivica u ispljuvku, vodi od ispiranja, urinu, fecesu, gnoju, iscjetku sluznice, krvi, komadićima organa i bioptiranom tkivu.

U lezijama na koži iz kojih treba uzeti patološki materijal potrebno je prekinuti svako liječenje nekoliko dana ili tjedana unaprijed. Treba imati na umu da uporaba slabih otopina za dezinfekciju ili čak indiferentnih sredstava može ometati studiju. Neposredno prije prikupljanja patološkog materijala, lezija se mora tretirati 96% alkoholom ili otopinom ksilena. Najbolje je uzeti materijal sa svježih, ali već potpuno razvijenih lezija. Ljuskice kože potrebno je ostrugati s periferije lezija, gljive se tu najčešće nalaze u obliku micelija i spora. Ljuskice kože uklanjaju se skalpelom, kruste se uklanjaju epilacijskom pincetom.

U bolesnika s mikozama vlasišta zahvaćena dlaka uklanja se pincetom za epilaciju. Za istraživanje je potrebno uzeti kratku, uvrnutu, zakrivljenu dlaku u obliku luka ili zareza, kao i dugu dlaku, ali prekrivenu omotačem u podnožju. Ako sumnjate na favus, morate zapamtiti da se kosa ne prekida, već postaje dosadna, beživotna i sivkasta.

Skalpelom se prave strugotine s površinskih lezija zahvaćenih ploča nokta, skalpelom ili škaricama za nokte odrežu se zadebljane ploče nokta.

Tekući patološki materijal skuplja se aseptično u sterilnu posudu, ljuskice kože, noktiju i kose skupljaju se na komadiće običnog ili mekog pergament papira.

Iscjedak iz sluznice za inokulaciju uzima se upijajućom vatom koja se stavlja u suhu sterilnu epruvetu ili epruvetu s 2 ml hranjive podloge (Sabouraudova sladovina). Vaginalni materijal se uzima iz stražnjeg forniksa; iz glave penisa - iz područja koronarnog sulkusa.

Materijal iz vanjskog zvukovoda uzima se petljom ili tupferom koji se stavlja u epruvetu.

Materijal primljen u laboratorij pregledava se unutar 1 sata nakon uzimanja ako se čuva na sobnoj temperaturi ili najviše 3 sata kasnije ako se čuva u hladnjaku na temperaturi od 4 °C.

Krv za testiranje na gljivice uzima se iz kubitalne vene u količini od 5 - 10 ml i odmah se dodaje u tikvicu s tekućom hranjivom podlogom ili jednakom količinom natrijeva citrata.

Ako je potrebno ispitati biopsijski materijal na gljivice, stavlja se u sterilnu Petrijevu zdjelicu i koristi za mikroskopiranje, kulturu na hranjive podloge i izradu histoloških preparata.

Mikroskopski pregled.

Mikroskopski pregled patološkog materijala na gljivice provodi se u nativnim i obojenim preparatima. Za pripremu neobojanih pripravaka dobiveni materijal se zdrobi skalpelom ili iglom za disekciju i stavi u sredinu predmetnog stakla. Da bi se jasnije identificirali elementi gljive, materijal se bistri (macerira). U tu svrhu pribjegavaju se raznim tvarima, najčešće kaustičnim lužinama (KOH, NaOH), koje otapaju epidermalne ljuskice, sluz, gnoj, posvjetljuju pigment dlake i time gljive čine dostupnima za istraživanje.

U nekim laboratorijima pripravci za mikroskopsko ispitivanje bistre se 15-30% otopinom KOH u koju se dodaje 5-10% komercijalne tamnoplave tinte tvrtke Parker (Parker's SuperchromeBlue-BlackInk).Tim bojanjem se hife i spore boje. plava.

Za dijagnosticiranje mikoza mogu se koristiti mikroskopske, mikološke (kulturalne), alergijske, serološke, biološke i histološke metode istraživanja. Ovisno o patogenezi, materijal za istraživanje može biti gnoj, sputum, zahvaćena kosa, nokti, ljuskice kože, ubodi koštane srži, limfni čvorovi, unutarnji organi, krv, žuč, izmet, biopsije tkiva itd.

Mikroskopski pregled uključuje mikroskopiranje nativnih (nebojanih) i obojenih razmaza. Za pripremu nativnih pripravaka kosa, strugotine kože i nokti bistre se u 10,30% otopinama KOH ili NaOH. Alkalijski tretirani materijal stavi se na predmetno stakalce u kapljicu glicerina, pokrije pokrovnim stakalcem i mikroskopira (može se koristiti fazno-kontrastna mikroskopija), što omogućuje proučavanje strukture gljive i položaja spora. , no konačan zaključak o vrsti gljive može se donijeti tek nakon proučavanja kulture.

Za bojenje razmaza najčešće se koriste metode po Gramu, Ziehlu, Nielsenu i Romanovsky-Giemsa. Metode Sabourauda, ​​Adamsona i drugih također se koriste za bojenje dermatofita.

Kulturalna (mikološka) istraživanja provode se kako bi se izolirala čista kultura gljive i identificirala. Koristite čvrste i tekuće hranjive podloge (Sabouraud, wort agar, Chapek itd.). Inkubacija u termostatu (22,28ºS) je duga (3,4 tjedna). Čista kultura gljive identificira se skupom karakteristika: oblikom kolonija, njihovom bojom, konzistencijom, mikroskopskom slikom (priroda micelija, položaj spora, konidiofora) i drugim karakteristikama Serološke reakcije za dijagnozu gljivičnih bolesti provode se gljivičnim antigenima prema općeprihvaćenim metodama, kao i za dijagnostiku drugih zaraznih bolesti (RA, RP, RSK, RNGA, RIF i dr.).

Alergotestovi se mogu provoditi prema općeprihvaćenim metodama intradermalnim ubrizgavanjem odgovarajućih alergena (polisaharidnih i proteinskih frakcija iz stanica ili staničnih membrana, suspenzija stanica ubijenih gljivica, filtrati kulture). Za identifikaciju GNT-a može se koristiti test degranulacije tkivnih i serumskih bazofila, a za detekciju GNT-a reakcija inhibicije migracije fagocita i blast transformacije limfocita.

Biološka istraživanja provode se na laboratorijskim modelima (miševi, štakori, zamorci, kunići, psi, mačke). Biološki model mikoze koristi se za utvrđivanje patogenosti uzročnika, izolaciju čiste kulture i proučavanje novih antimikotika. Histološki pregled omogućuje otkrivanje gljivica u tkivima, proučavanje njegove morfologije i obilježja patološkog procesa uzrokovanog njime u tijelu.