Test krvi za markere sistemskog eritemskog lupusa. Antinuklearni faktor: što pokazuje analiza Antinuklearni faktor i štitnjača

Sistemske reumatske bolesti
Antinuklearni faktor (ANF) i vrsta luminiscencije

Određivanje antinuklearnog faktora (ANF) glavna je metoda za otkrivanje antinuklearnih protutijela, koja omogućuje otkrivanje većine vrsta antinuklearnih protutijela, uključujući autoprotutijela na nukleinske kiseline (dsDNA, ssDNA, RNA), konformacijske i netopljive antigene. Rezultat određivanja ANF je prisutnost autoantitijela u dijagnostičkom titru, konačni titar razrjeđenja seruma, koji odražava afinitet i koncentraciju autoantitijela, kao i tip luminiscencije stanične jezgre. (test 01.02.15.005). Karakteristike pojedine tehnike ovise prvenstveno o izboru supstrata, koji može varirati od kriosekcija (jetra ili bubreg štakora) do kultiviranih proliferirajućih staničnih linija (Hep2, Kb, HeLa), kao i metodi fiksacije tkiva koja može utjecati na očuvanje niza nuklearnih antigena ANA.

Povijest razvoja testova za otkrivanje antinuklearnih protutijela:

Početak dvadesetog stoljeća - "hijalinska tjelešca" u citoplazmi leukocita

1948. Hargraves, Richmond, Morton - metoda in vitro detekcije LE stanica tijekom dugotrajne inkubacije leukemije kod SLE pacijenata

1951. Lee, Michael, Vural - otkrili serumski faktor koji stimulira fagocitozu jezgri limfocita leukocitima periferne krvi

1957. Holoborow, Weir, Johnson upotrijebili su metodu neizravne imunofluorescencije koju je razvio Coons 1950. za otkrivanje ANF-a u kriosekcijama ljudske jetre

1961 Beck - korišteno tkivo laboratorijskih životinja

1982 Tan - koristio ljudsku kontinuiranu staničnu liniju HEp-2, ovaj test je postao zlatni standard za otkrivanje ANA

1958. Jones - otkrio je u krvi pacijenata sa Sjögrenovim sindromom faktor sposoban za precipitaciju ekstrakata staničnih jezgri, što je poslužilo kao poticaj za opis većine vrsta antinuklearnih protutijela

Indirektna imunofluorescencija na kontinuiranoj staničnoj liniji Hep2

Metodu za otkrivanje ANF-a razvio je Tan (1982), koji je koristio ljudsku kontinuiranu epiteloidnu staničnu liniju HEp-2 (ATCC ref. br. CCL-23) kao supstrat. Ova stanična linija, izvedena iz ljudskog laringealnog adenokarcinoma, velika je poliploidna pločasta epitelna stanica bez keratinizacije koja tvori jednoslojni sloj na plastici i staklu.

Slika: stanice HEp-2 stanične linije, obojene hematološkom bojom.

Usporedna nepretencioznost ove linije, velike jezgre i prisutnost svih ljudskih antigena učinili su metodu neizravne imunofluorescencije kontinuiranom staničnom linijom HEp-2 glavnom metodom za otkrivanje ANF-a. U literaturi na engleskom jeziku ne postoji jedinstven naziv za ovu metodu, ponekad se ova metoda skraćeno naziva FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Nedostatak jedinstva u nomenklaturi doveo je do zbrke u nazivima laboratorijskih testova. Ponekad se termin "antinuklearna protutijela" koristi u imunološkim laboratorijima za označavanje testova koji se temelje na metodama enzimske imunoeseja i imunokemijske analize, kao i metode imunofluorescencije. U literaturi na ruskom jeziku smatramo potrebnim sačuvati domaći naziv za ovaj pokazatelj - "antinuklearni faktor" (ANF) kako bismo razlikovali imunofluorescentnu metodu od drugih testova za otkrivanje ANA.

Potrebno je identificirati ANF klase IgG, budući da otkrivanje ANF predstavljenog drugim klasama imunoglobulina nema neovisnu dijagnostičku vrijednost. Standardna razrjeđenja seruma pacijenta inkubiraju se s tkivnim supstratom, omogućujući antinuklearnim antitijelima iz seruma pacijenta da se vežu na odgovarajuće nuklearne mete. Mjesta vezanja autoantitijela zatim se otkrivaju korištenjem fluoresceinom obilježenog antihumanog antiseruma.

Iako se kao supstrati mogu koristiti i druge ljudske stanične linije, Hep-2 je zbog svoje dobre morfologije i lakoće uzgoja postao općeprihvaćen supstrat za neizravnu imunofluorescenciju. Njegova uporaba poboljšava osjetljivost testa zbog svijetle fluorescencije čak i uz značajna razrjeđenja seruma pacijenta, a velika jezgra bogata eukromatinom omogućuje točan opis vrste fluorescencije. Osim toga, korištenje Hep-2 stanične linije olakšava detekciju Ro/SS-A protutijela, kao i protutijela na nukleolarne antigene, koji su loši pri korištenju krioreza tkiva laboratorijskih životinja. Ostale prednosti HEp-2 uključuju visoku učestalost stanične diobe, što omogućuje otkrivanje antitijela na antigene izražene samo tijekom stanične diobe, i odsutnost stanične matrice tkiva, što otežava vizualizaciju specifične luminiscencije u usporedbi s histološkim odjeljci.

Titar antinuklearnog faktora

Titar ANF definiran je kao posljednje razrjeđenje seruma pacijenta, koje ima jasnu fluorescenciju staničnih jezgri. Pri korištenju tkiva laboratorijskih životinja dijagnostički titar ANF je 1:8-1:10, dok se pri korištenju stanične linije HEp-2 preporuča koristiti početni titar 1:80. U ovom slučaju, normalni titri ANF su manji od 1:160.

Kada se koriste titri manji od 1:160, učestalost slabo pozitivnih rezultata u klinički zdravih osoba neće biti veća od 5%, au isto vrijeme neće dopustiti da se značajni titri ANA propuste u bolesnika s difuznim bolestima vezivnog tkiva.

Za određivanje konačnog titra obično se koristi titracija u x2 koracima (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120, itd. Može se koristiti i grublja titracija. U odnosu na pozadinu egzacerbacije reumatskih bolesti obično se opažaju titri ANF-a veći od 1: 640, a tijekom remisije titri se smanjuju na 1: 160-1: 320.

Postoje preporuke za bodovanje rezultata identifikacije ANF-a, s naznakom sadržaja "u križićima". To omogućuje laboratorijima da uštede reagense i smanje troškove rada za istraživanje. U tom slučaju određivanje konačnog titra nije moguće. Mora se uzeti u obzir da je konačni titar važniji od količine autoantitijela vezanih na supstrat, budući da je izravno povezan s afinitetom njihove interakcije s antigenom. Preporučljivo je odrediti konačni titar kod svih pozitivnih bolesnika, što omogućuje razjašnjenje prisutnosti u serumu autoantitijela visokog afiniteta, koja su u većoj mjeri povezana s aktivnošću procesa.

Tip luminiscencije jezgre antinuklearnog faktora

Već u prvim iskustvima kliničke primjene neizravne imunofluorescencije za detekciju ANF pomoću kriosekcija laboratorijskih tkiva uočeno je da je serum bolesnika s autoimunim bolestima različito “bojio” stanične jezgre, što je dovelo do selektivne luminiscencije nekih nuklearnih struktura. Pojašnjenje ovog fenomena dovelo je do opisa takozvanih "vrsta luminescencije" jezgre u testu imunofluorescencije. To je zbog činjenice da svaka vrsta ANA ima specifične stanične mete, zbog čega vrsta luminiscencije jezgre, nukleolusa i citoplazme stanice odražava interakciju ANA u serumu pacijenta sa strukturama koje sadrže antigen unutar stanica. Vrsta luminiscencije ovisi o prisutnosti specifičnih autoantitijela u krvnom serumu bolesnika, na temelju čega se može donijeti preliminarni zaključak o tipovima ANA koje su prisutne u ovom serumu. Međutim, korištenje histoloških presjeka tkiva laboratorijskih životinja ne dopušta pouzdano utvrđivanje vrste luminiscencije. Istodobno, korištenje kontinuiranih staničnih linija, poput Hep-2, omogućuje opisivanje značajnog broja varijanti nuklearnog i citoplazmatskog bojenja. Postoje tri glavne skupine antigena, čija prisutnost antitijela određuje različite vrste luminiscencije:

Vrsta luminiscencije stanične jezgre značajno povećava informacijski sadržaj identificiranja ANF-a, pa se stoga treba rutinski odrediti pri određivanju ovog pokazatelja. Korištenje HEp-2 stanica omogućuje karakterizaciju više od 20 različitih varijanti bojenja jezgre, koje ovise o spektru ANA prisutnih u serumu koji se proučava. Međutim, za praktični laboratorij dovoljno je razlikovati 6 glavnih opcija za vezanje autoantitijela na stanične strukture koje sadrže antigen.

Postoje homogeni, periferni, granularni (mali/veliki), nukleolarni, centromerni i citoplazmatski tipovi nuklearne luminiscencije. Svaka vrsta luminiscencije ima vrlo karakteristične značajke koje omogućuju razlikovanje jedne opcije od druge, kao i skup antigena s kojima reagiraju autoantitijela u serumima pacijenata. Opis tipova luminiscencije sam po sebi pruža vrijedne kliničke informacije, osim toga, vrsta luminiscencije može ukazivati ​​na potrebu za određenim laboratorijskim testovima u budućnosti.

Na homogeni tip sjaj autoantitijela reagiraju s onim antigenima koji su difuzno raspoređeni u jezgri, tj. dio su kromatina. Tipično, kada se otkrije homogena vrsta luminiscencije, kondenzirani kromosomi su jarko obojeni u stanicama koje se dijele. Glavne strukturne jedinice kromatina su nukleosomi - kompleksi DNA i histona. Dakle, homogeni tip luminescencije sugerira prisutnost antitijela protiv nukleosoma, dsDNA i antitijela na histone. Javlja se u bolesnika sa SLE i lupusom izazvanim lijekovima, kao i u bolesnika sa sklerodermijom. Tipično, otkrivanje visokog titra ANF s homogenim tipom luminiscencije ukazuje na dijagnozu SLE.

Periferni tip sjaj se često izdvaja odvojeno, iako je to vrsta homogenog sjaja. Njegovo otkrivanje je artefakt fiksacije stanica, što dovodi do preraspodjele kromatina u jezgri na periferiju. Važno je razlikovati periferni tip luminiscencije od bojenja nuklearne membrane, koja se opaža kod autoimunih bolesti jetre. Periferni tip luminiscencije nalazi se u bolesnika s protutijelima na dvolančanu DNA i otkriva se uglavnom u bolesnika sa SLE.

Granularni tip je najčešći i ujedno najnespecifičniji. Ponekad se ova vrsta sjaja u ruskoj literaturi naziva "pjegavim" ili "mrežastim". Naziv "granularno" točnije odražava ovaj fenomen, budući da u ovom slučaju autoantitijela reagiraju s granulama u jezgri, koje su supramolekularni nukleoproteinski kompleksi. Takvi kompleksi proteina i nukleinskih kiselina obavljaju niz funkcija u jezgri koje su potrebne za normalno funkcioniranje stanice. Takvi kompleksi, posebno, uključuju spliceosome, koji provode post-transkripcijsku reorganizaciju mRNA potrebne za sintezu proteina na ribosomima. Sastav sadrži mnogo različitih nukleoproteina, što određuje raznolikost antigenskih ciljeva pri otkrivanju granularnog tipa luminiscencije. Glavni autoantigeni, antitijela na koja dovode do vizualizacije granularnog tipa luminiscencije, uključuju Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B antigene i PCNA. Tijekom procesa stanične diobe stanice gube većinu formiranih nukleoproteinskih kompleksa, stoga mitotičke figure u staničnoj liniji s granularnim tipom luminiscencije nisu obojene. Zrnati tip nuklearne luminiscencije opažen je u bolesnika sa SLE, SS, SS, DM/PM, RA i nizom drugih autoimunih bolesti. U krvnim serumima klinički zdravih osoba s ANF-om bez znakova sistemske bolesti prevladavaju niski titri ANF-a granularnog tipa.

Detekcija vrlo visokih titara ANF (1:2560-1:10000) s grubo zrnasti tip nuklearna luminiscencija obično ukazuje na dijagnozu mješovite bolesti vezivnog tkiva i zahtijeva daljnje pretrage kako bi se identificirao RNP antigen, koji je glavni serološki marker ove bolesti.

Nukleolarni antigeni mogu djelovati kao mete ANA, što dovodi do otkrivanja nukleolarni tip fluorescencija. Identifikacija nukleolarnog tipa sjaja karakteristična je za sklerodermu i njezine sorte. Nukleolarni tip fluorescencija utvrđeno u bolesnika s protutijelima na komponente nukleolusa, kao što su RNA polimeraza 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

Centromerni tip fluorescencija se primjećuje kada se protutijela pojave na centromerama kromosoma, a nalazi se samo u stanicama koje se dijele. Njegova prisutnost karakteristična je za CREST varijantu sklerodermije.

Citoplazmatski tip sjaj ukazuje na antitijela na tRNA sintetaze, posebno Jo-1, koja se opažaju kod polimiozitisa. Osim toga, otkriva se u bolesnika s ANA usmjerenim protiv drugih komponenti stanične citoplazme: antitijela na aktin u autoimunom hepatitisu, antitijela na mitohondrije u primarnoj bilijarnoj cirozi.

Brojne druge vrste luminiscencije mogu se karakterizirati, a ove vrste bojenja stanične jezgre mogu biti karakteristične za određeni tip ANA. Dakle, antitijela na Scl-70 u imunofluorescentnom testu na stanicama HEp-20 daju fino zrnato bojenje jezgre i nukleola, anti-p80 - svjetleće točkice u jezgri, kojih nema u mitotičkim stanicama. No, potrebno je ukazati na rijetkost i raznolikost ovakvih fenomena, zbog čega je njihovo prepoznavanje tijekom rutinskih istraživanja nepotrebno.

Često se može pojaviti kombinacija nekoliko vrsta luminiscencije, na primjer, fino zrnata i nukleolarna, što je tipično za antitijela na Scl-70. Štoviše, često u niskim razrjeđenjima prevladava jedna vrsta fluorescencije, na primjer granularna, a daljnjim razrjeđenjima otkrivaju se homogeni ili centromerni tipovi fluorescencije, što ukazuje na prisutnost različitih tipova ANA u serumu bolesnika. Iako tip sjaja daje liječniku određene podatke u prilog pojedine dijagnoze, potrebno je uzeti u obzir njegovu relativno nisku specifičnost i raznolikost fenomena koji se susreću, što zahtijeva daljnje laboratorijske pretrage.

Detekcija ANA temelj je za korištenje drugih laboratorijskih testova koji pojašnjavaju spektar ANA u krvi bolesnika. S obzirom na iznimnu informativnost ovog testa, daljnje testiranje i analizu rezultata naknadne pretrage treba tumačiti ovisno o rezultatima procjene vrste luminiscencije i titra ANF.

Iako izostanak značajnih titara ANA gotovo uvijek isključuje dijagnozu aktivne sistemske reumatske bolesti, pri korištenju stanične linije HEp-2, u 2-4% bolesnika koji zadovoljavaju kriterije za dijagnozu SLE, ANA se ne detektira ili se titri su niske. Ovi pacijenti se ponekad klasificiraju kao " ANF-negativni SLE“Za razjašnjenje dijagnoze kod takvih bolesnika potrebna su dodatna ispitivanja, prije svega identifikacija protutijela na SS-A antigene. Ti su antigeni visoko topljivi i mogu se izgubiti iz staničnih jezgri. Da bi se smanjila ova kategorija pacijenata, koristi se složeno testiranje, uključujući određivanje protutijela na ekstrahirane nuklearne antigene, tzv. probir na bolesti vezivnog tkiva», test 000723. Negativan rezultat takvog pregleda omogućuje, s vrlo velikom vjerojatnošću, isključivanje dijagnoze SLE i drugih sustavnih reumatskih bolesti.

Sistemske reumatske bolesti
Antinuklearni faktor (ANF) i vrsta luminiscencije

Određivanje antinuklearnog faktora (ANF) glavna je metoda za otkrivanje antinuklearnih protutijela, koja omogućuje otkrivanje većine vrsta antinuklearnih protutijela, uključujući autoprotutijela na nukleinske kiseline (dsDNA, ssDNA, RNA), konformacijske i netopljive antigene. Rezultat određivanja ANF je prisutnost autoantitijela u dijagnostičkom titru, konačni titar razrjeđenja seruma, koji odražava afinitet i koncentraciju autoantitijela, kao i tip luminiscencije stanične jezgre. (test 01.02.15.005). Karakteristike pojedine tehnike ovise prvenstveno o izboru supstrata, koji može varirati od kriosekcija (jetra ili bubreg štakora) do kultiviranih proliferirajućih staničnih linija (Hep2, Kb, HeLa), kao i metodi fiksacije tkiva koja može utjecati na očuvanje niza nuklearnih antigena ANA.

Povijest razvoja testova za otkrivanje antinuklearnih protutijela:

Početak dvadesetog stoljeća - "hijalinska tjelešca" u citoplazmi leukocita

1948. Hargraves, Richmond, Morton - metoda in vitro detekcije LE stanica tijekom dugotrajne inkubacije leukemije kod SLE pacijenata

1951. Lee, Michael, Vural - otkrili serumski faktor koji stimulira fagocitozu jezgri limfocita leukocitima periferne krvi

1957. Holoborow, Weir, Johnson upotrijebili su metodu neizravne imunofluorescencije koju je razvio Coons 1950. za otkrivanje ANF-a u kriosekcijama ljudske jetre

1961 Beck - korišteno tkivo laboratorijskih životinja

1982 Tan - koristio ljudsku kontinuiranu staničnu liniju HEp-2, ovaj test je postao zlatni standard za otkrivanje ANA

1958. Jones - otkrio je u krvi pacijenata sa Sjögrenovim sindromom faktor sposoban za precipitaciju ekstrakata staničnih jezgri, što je poslužilo kao poticaj za opis većine vrsta antinuklearnih protutijela

Indirektna imunofluorescencija na kontinuiranoj staničnoj liniji Hep2

Metodu za otkrivanje ANF-a razvio je Tan (1982), koji je koristio ljudsku kontinuiranu epiteloidnu staničnu liniju HEp-2 (ATCC ref. br. CCL-23) kao supstrat. Ova stanična linija, izvedena iz ljudskog laringealnog adenokarcinoma, velika je poliploidna pločasta epitelna stanica bez keratinizacije koja tvori jednoslojni sloj na plastici i staklu.

Slika: stanice HEp-2 stanične linije, obojene hematološkom bojom.

Usporedna nepretencioznost ove linije, velike jezgre i prisutnost svih ljudskih antigena učinili su metodu neizravne imunofluorescencije kontinuiranom staničnom linijom HEp-2 glavnom metodom za otkrivanje ANF-a. U literaturi na engleskom jeziku ne postoji jedinstven naziv za ovu metodu, ponekad se ova metoda skraćeno naziva FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Nedostatak jedinstva u nomenklaturi doveo je do zbrke u nazivima laboratorijskih testova. Ponekad se termin "antinuklearna protutijela" koristi u imunološkim laboratorijima za označavanje testova koji se temelje na metodama enzimske imunoeseja i imunokemijske analize, kao i metode imunofluorescencije. U literaturi na ruskom jeziku smatramo potrebnim sačuvati domaći naziv za ovaj pokazatelj - "antinuklearni faktor" (ANF) kako bismo razlikovali imunofluorescentnu metodu od drugih testova za otkrivanje ANA.

Potrebno je identificirati ANF klase IgG, budući da otkrivanje ANF predstavljenog drugim klasama imunoglobulina nema neovisnu dijagnostičku vrijednost. Standardna razrjeđenja seruma pacijenta inkubiraju se s tkivnim supstratom, omogućujući antinuklearnim antitijelima iz seruma pacijenta da se vežu na odgovarajuće nuklearne mete. Mjesta vezanja autoantitijela zatim se otkrivaju korištenjem fluoresceinom obilježenog antihumanog antiseruma.

Iako se kao supstrati mogu koristiti i druge ljudske stanične linije, Hep-2 je zbog svoje dobre morfologije i lakoće uzgoja postao općeprihvaćen supstrat za neizravnu imunofluorescenciju. Njegova uporaba poboljšava osjetljivost testa zbog svijetle fluorescencije čak i uz značajna razrjeđenja seruma pacijenta, a velika jezgra bogata eukromatinom omogućuje točan opis vrste fluorescencije. Osim toga, korištenje Hep-2 stanične linije olakšava detekciju Ro/SS-A protutijela, kao i protutijela na nukleolarne antigene, koji su loši pri korištenju krioreza tkiva laboratorijskih životinja. Ostale prednosti HEp-2 uključuju visoku učestalost stanične diobe, što omogućuje otkrivanje antitijela na antigene izražene samo tijekom stanične diobe, i odsutnost stanične matrice tkiva, što otežava vizualizaciju specifične luminiscencije u usporedbi s histološkim odjeljci.

Titar antinuklearnog faktora

Titar ANF definiran je kao posljednje razrjeđenje seruma pacijenta, koje ima jasnu fluorescenciju staničnih jezgri. Pri korištenju tkiva laboratorijskih životinja dijagnostički titar ANF je 1:8-1:10, dok se pri korištenju stanične linije HEp-2 preporuča koristiti početni titar 1:80. U ovom slučaju, normalni titri ANF su manji od 1:160.

Kada se koriste titri manji od 1:160, učestalost slabo pozitivnih rezultata u klinički zdravih osoba neće biti veća od 5%, au isto vrijeme neće dopustiti da se značajni titri ANA propuste u bolesnika s difuznim bolestima vezivnog tkiva.

Za određivanje konačnog titra obično se koristi titracija u x2 koracima (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120, itd. Može se koristiti i grublja titracija. U odnosu na pozadinu egzacerbacije reumatskih bolesti obično se opažaju titri ANF-a veći od 1: 640, a tijekom remisije titri se smanjuju na 1: 160-1: 320.

Postoje preporuke za bodovanje rezultata identifikacije ANF-a, s naznakom sadržaja "u križićima". To omogućuje laboratorijima da uštede reagense i smanje troškove rada za istraživanje. U tom slučaju određivanje konačnog titra nije moguće. Mora se uzeti u obzir da je konačni titar važniji od količine autoantitijela vezanih na supstrat, budući da je izravno povezan s afinitetom njihove interakcije s antigenom. Preporučljivo je odrediti konačni titar kod svih pozitivnih bolesnika, što omogućuje razjašnjenje prisutnosti u serumu autoantitijela visokog afiniteta, koja su u većoj mjeri povezana s aktivnošću procesa.

Tip luminiscencije jezgre antinuklearnog faktora

Već u prvim iskustvima kliničke primjene neizravne imunofluorescencije za detekciju ANF pomoću kriosekcija laboratorijskih tkiva uočeno je da je serum bolesnika s autoimunim bolestima različito “bojio” stanične jezgre, što je dovelo do selektivne luminiscencije nekih nuklearnih struktura. Pojašnjenje ovog fenomena dovelo je do opisa takozvanih "vrsta luminescencije" jezgre u testu imunofluorescencije. To je zbog činjenice da svaka vrsta ANA ima specifične stanične mete, zbog čega vrsta luminiscencije jezgre, nukleolusa i citoplazme stanice odražava interakciju ANA u serumu pacijenta sa strukturama koje sadrže antigen unutar stanica. Vrsta luminiscencije ovisi o prisutnosti specifičnih autoantitijela u krvnom serumu bolesnika, na temelju čega se može donijeti preliminarni zaključak o tipovima ANA koje su prisutne u ovom serumu. Međutim, korištenje histoloških presjeka tkiva laboratorijskih životinja ne dopušta pouzdano utvrđivanje vrste luminiscencije. Istodobno, korištenje kontinuiranih staničnih linija, poput Hep-2, omogućuje opisivanje značajnog broja varijanti nuklearnog i citoplazmatskog bojenja. Postoje tri glavne skupine antigena, čija prisutnost antitijela određuje različite vrste luminiscencije:

Vrsta luminiscencije stanične jezgre značajno povećava informacijski sadržaj identificiranja ANF-a, pa se stoga treba rutinski odrediti pri određivanju ovog pokazatelja. Korištenje HEp-2 stanica omogućuje karakterizaciju više od 20 različitih varijanti bojenja jezgre, koje ovise o spektru ANA prisutnih u serumu koji se proučava. Međutim, za praktični laboratorij dovoljno je razlikovati 6 glavnih opcija za vezanje autoantitijela na stanične strukture koje sadrže antigen.

Postoje homogeni, periferni, granularni (mali/veliki), nukleolarni, centromerni i citoplazmatski tipovi nuklearne luminiscencije. Svaka vrsta luminiscencije ima vrlo karakteristične značajke koje omogućuju razlikovanje jedne opcije od druge, kao i skup antigena s kojima reagiraju autoantitijela u serumima pacijenata. Opis tipova luminiscencije sam po sebi pruža vrijedne kliničke informacije, osim toga, vrsta luminiscencije može ukazivati ​​na potrebu za određenim laboratorijskim testovima u budućnosti.

Na homogeni tip sjaj autoantitijela reagiraju s onim antigenima koji su difuzno raspoređeni u jezgri, tj. dio su kromatina. Tipično, kada se otkrije homogena vrsta luminiscencije, kondenzirani kromosomi su jarko obojeni u stanicama koje se dijele. Glavne strukturne jedinice kromatina su nukleosomi - kompleksi DNA i histona. Dakle, homogeni tip luminescencije sugerira prisutnost antitijela protiv nukleosoma, dsDNA i antitijela na histone. Javlja se u bolesnika sa SLE i lupusom izazvanim lijekovima, kao i u bolesnika sa sklerodermijom. Tipično, otkrivanje visokog titra ANF s homogenim tipom luminiscencije ukazuje na dijagnozu SLE.

Periferni tip sjaj se često izdvaja odvojeno, iako je to vrsta homogenog sjaja. Njegovo otkrivanje je artefakt fiksacije stanica, što dovodi do preraspodjele kromatina u jezgri na periferiju. Važno je razlikovati periferni tip luminiscencije od bojenja nuklearne membrane, koja se opaža kod autoimunih bolesti jetre. Periferni tip luminiscencije nalazi se u bolesnika s protutijelima na dvolančanu DNA i otkriva se uglavnom u bolesnika sa SLE.

Granularni tip je najčešći i ujedno najnespecifičniji. Ponekad se ova vrsta sjaja u ruskoj literaturi naziva "pjegavim" ili "mrežastim". Naziv "granularno" točnije odražava ovaj fenomen, budući da u ovom slučaju autoantitijela reagiraju s granulama u jezgri, koje su supramolekularni nukleoproteinski kompleksi. Takvi kompleksi proteina i nukleinskih kiselina obavljaju niz funkcija u jezgri koje su potrebne za normalno funkcioniranje stanice. Takvi kompleksi, posebno, uključuju spliceosome, koji provode post-transkripcijsku reorganizaciju mRNA potrebne za sintezu proteina na ribosomima. Sastav sadrži mnogo različitih nukleoproteina, što određuje raznolikost antigenskih ciljeva pri otkrivanju granularnog tipa luminiscencije. Glavni autoantigeni, antitijela na koja dovode do vizualizacije granularnog tipa luminiscencije, uključuju Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B antigene i PCNA. Tijekom procesa stanične diobe stanice gube većinu formiranih nukleoproteinskih kompleksa, stoga mitotičke figure u staničnoj liniji s granularnim tipom luminiscencije nisu obojene. Zrnati tip nuklearne luminiscencije opažen je u bolesnika sa SLE, SS, SS, DM/PM, RA i nizom drugih autoimunih bolesti. U krvnim serumima klinički zdravih osoba s ANF-om bez znakova sistemske bolesti prevladavaju niski titri ANF-a granularnog tipa.

Detekcija vrlo visokih titara ANF (1:2560-1:10000) s grubo zrnasti tip nuklearna luminiscencija obično ukazuje na dijagnozu mješovite bolesti vezivnog tkiva i zahtijeva daljnje pretrage kako bi se identificirao RNP antigen, koji je glavni serološki marker ove bolesti.

Nukleolarni antigeni mogu djelovati kao mete ANA, što dovodi do otkrivanja nukleolarni tip fluorescencija. Identifikacija nukleolarnog tipa sjaja karakteristična je za sklerodermu i njezine sorte. Nukleolarni tip fluorescencija utvrđeno u bolesnika s protutijelima na komponente nukleolusa, kao što su RNA polimeraza 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

Centromerni tip fluorescencija se primjećuje kada se protutijela pojave na centromerama kromosoma, a nalazi se samo u stanicama koje se dijele. Njegova prisutnost karakteristična je za CREST varijantu sklerodermije.

Citoplazmatski tip sjaj ukazuje na antitijela na tRNA sintetaze, posebno Jo-1, koja se opažaju kod polimiozitisa. Osim toga, otkriva se u bolesnika s ANA usmjerenim protiv drugih komponenti stanične citoplazme: antitijela na aktin u autoimunom hepatitisu, antitijela na mitohondrije u primarnoj bilijarnoj cirozi.

Brojne druge vrste luminiscencije mogu se karakterizirati, a ove vrste bojenja stanične jezgre mogu biti karakteristične za određeni tip ANA. Dakle, antitijela na Scl-70 u imunofluorescentnom testu na stanicama HEp-20 daju fino zrnato bojenje jezgre i nukleola, anti-p80 - svjetleće točkice u jezgri, kojih nema u mitotičkim stanicama. No, potrebno je ukazati na rijetkost i raznolikost ovakvih fenomena, zbog čega je njihovo prepoznavanje tijekom rutinskih istraživanja nepotrebno.

Često se može pojaviti kombinacija nekoliko vrsta luminiscencije, na primjer, fino zrnata i nukleolarna, što je tipično za antitijela na Scl-70. Štoviše, često u niskim razrjeđenjima prevladava jedna vrsta fluorescencije, na primjer granularna, a daljnjim razrjeđenjima otkrivaju se homogeni ili centromerni tipovi fluorescencije, što ukazuje na prisutnost različitih tipova ANA u serumu bolesnika. Iako tip sjaja daje liječniku određene podatke u prilog pojedine dijagnoze, potrebno je uzeti u obzir njegovu relativno nisku specifičnost i raznolikost fenomena koji se susreću, što zahtijeva daljnje laboratorijske pretrage.

Detekcija ANA temelj je za korištenje drugih laboratorijskih testova koji pojašnjavaju spektar ANA u krvi bolesnika. S obzirom na iznimnu informativnost ovog testa, daljnje testiranje i analizu rezultata naknadne pretrage treba tumačiti ovisno o rezultatima procjene vrste luminiscencije i titra ANF.

Iako izostanak značajnih titara ANA gotovo uvijek isključuje dijagnozu aktivne sistemske reumatske bolesti, pri korištenju stanične linije HEp-2, u 2-4% bolesnika koji zadovoljavaju kriterije za dijagnozu SLE, ANA se ne detektira ili se titri su niske. Ovi pacijenti se ponekad klasificiraju kao " ANF-negativni SLE“Za razjašnjenje dijagnoze kod takvih bolesnika potrebna su dodatna ispitivanja, prije svega identifikacija protutijela na SS-A antigene. Ti su antigeni visoko topljivi i mogu se izgubiti iz staničnih jezgri. Da bi se smanjila ova kategorija pacijenata, koristi se složeno testiranje, uključujući određivanje protutijela na ekstrahirane nuklearne antigene, tzv. probir na bolesti vezivnog tkiva», test 000723. Negativan rezultat takvog pregleda omogućuje, s vrlo velikom vjerojatnošću, isključivanje dijagnoze SLE i drugih sustavnih reumatskih bolesti.

Dugo sam htjela pisati o antinuklearnom faktoru, ali uvijek me nešto sprječavalo. Zašto? Pa, zato što pisanje o ovome pokušava shvatiti neizmjernost, a kratkoća očito nije sestra mog talenta)))

Određivanje antinuklearnog faktora (ANF) glavna je metoda za otkrivanje antinuklearnih protutijela, koja omogućuje identifikaciju većine vrsta antinuklearnih protutijela. Rezultat određivanja ANF je sama činjenica prisutnosti autoantitijela, konačni titar razrjeđenja seruma i vrsta luminiscencije stanične jezgre.

ANF ​​nije samo jedno antitijelo!

Metodu za otkrivanje ANF-a razvio je Tan (1982), koji je koristio ljudsku kontinuiranu epiteloidnu staničnu liniju HEp-2 (možda ste vidjeli ovo ime na obrascu za analizu) kao supstrat. Ova stanična linija potječe iz ljudskog laringealnog tumora (adenokarcinoma). Komparativna nepretencioznost ove linije, velike jezgre i prisutnost svih humanih antigena učinili su metodu neizravne imunofluorescencije (inDIF) pomoću kontinuirane stanične linije HEp-2 glavnom metodom za detekciju ANF.

Kao supstrati se mogu koristiti i druge stanične linije (vidi vrtuljak), no zbog dobre morfologije i lakoće uzgoja upravo je Hep-2 linija postala općeprihvaćen supstrat za neizravnu imunofluorescenciju. U literaturi na engleskom jeziku ova se metoda ponekad naziva FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).

Ponekad se termin "antinuklearna protutijela" koristi u imunološkim laboratorijima za označavanje testova koji se temelje na metodama enzimske imunoeseja i imunokemijske analize, kao i metode imunofluorescencije.
Antinuklearni faktor (ANF) je antitijelo detektirano imunofluorescencijom.
Potrebno je identificirati ANF klase IgG, budući da otkrivanje ANF-a predstavljenog drugim klasama imunoglobulina nema neovisno značenje.

Titar ANF definiran je kao posljednje razrjeđenje seruma pacijenta, koje ima jasnu fluorescenciju (sjaj) staničnih jezgri. Pri korištenju stanične linije HEp-2 preporučuje se korištenje početnog titra od 1:80; u ovom slučaju normalni titri ANF manji su od 1:160. Za određivanje konačnog titra obično se koristi titracija u koracima od x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120, itd.).

Tijekom egzacerbacije bolesti obično se opažaju titri ANF-a veći od 1: 640, a tijekom remisije titri se mogu smanjiti na 1: 160-1: 320.

Bodovanje rezultata detekcije ("u križićima" +++) omogućuje laboratorijima uštedu reagensa i smanjenje troškova rada za izvođenje istraživanja. U ovom slučaju određivanje krajnjeg titra nije moguće❌

Preporučljivo je kod svih pozitivnih bolesnika odrediti konačni titar, čime se može razjasniti prisutnost autoantitijela u serumu, koja su u većoj vezi s aktivnošću procesa.

VRSTE CORE GLOW

Vrsta nuklearnog sjaja jedna je od ključnih karakteristika u identificiranju ANF-a. Svaka vrsta antinuklearnih protutijela (ANA) ima specifične mete u stanici i odražava interakciju seruma pacijenta sa strukturama unutar stanice. Vrsta sjaja ovisi o prisutnosti specifičnih autoantitijela u krvi, na temelju čega se može donijeti preliminarni zaključak o vrsti antitijela koja su prisutna u pojedinom serumu. Tip luminiscencije stanične jezgre značajno povećava informacijski sadržaj detekcije ANF-a.

Korištenje HEp-2 stanica omogućuje karakterizaciju više od 20 različitih varijanti nuklearnog bojenja, ali za kliničku praksu dovoljno je istaknuti glavne. Svaka vrsta sjaja ima vrlo karakteristične značajke koje omogućuju razlikovanje jedne opcije od druge.

Na homogena vrsta sjaja autoantitijela reagiraju s onim antigenima koji su difuzno raspoređeni u jezgri, tj. dio su kromatina.

Zbog čega? Antitijela protiv nukleosoma, DNA, histona.

Kada? U bolesnika sa SLE i lupusom izazvanim lijekovima, kao i u bolesnika sa sklerodermijom.

Često otkrivanje visokog titra ANF s homogenim tipom luminiscencije ukazuje na dijagnozu SLE.

Periferni tip sjaja može se izolirati zasebno, iako je vrsta homogena. Periferni tip sjaja nalazi se u bolesnika s protutijelima na dvolančanu DNA i otkriva se uglavnom kod SLE i bolesti jetre.

Zrnasti tip (šarasti, mrežasti) je najčešći i, ujedno, najviše nespecifičan.

Zbog čega? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B antigeni i PCNA.

Kada? SLE, Sjogrenova bolest/sindrom, sklerodermija, dermatomiozitis/polimiozitis, RA i niz drugih bolesti. Niski titri (1:160-1:320) ANF sa granularnim tipom luminiscencije mogu biti prisutni u krvnom serumu klinički zdravih osoba BEZ znakova sistemske bolesti.

Detekcija vrlo visokih titara ANP (1:2560-1:10000) s grubo-zrnatim tipom nuklearne luminiscencije obično ukazuje na dijagnozu i zahtijeva daljnje ispitivanje za identifikaciju RNP antigena.

Nukleolarni antigeni mogu djelovati kao mete ANA, što dovodi do otkrivanja nukleolarni tip fluorescencije.

Zbog čega? RNA polimeraza 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.

Kada? Sklerodermija i njezine vrste.

Centromerni tip primjećuje se kada se protutijela pojave na centromerama kromosoma, a nalazi se samo u stanicama koje se dijele. Njegova prisutnost karakteristična je za CREST sindrom (varijanta sklerodermije).

Citoplazmatski tip luminiscencije.

Zbog čega? Protutijela na tRNA sintetaze, posebno Jo-1, koja se opažaju kod polimiozitisa. Osim toga, otkriva se u bolesnika s ANA usmjerenom protiv drugih komponenti stanične citoplazme: kod autoimunog hepatitisa, kod primarne bilijarne ciroze.

Može se okarakterizirati niz drugih vrsta sjaja. Antitijela na Scl-70 daju fino zrnast bojenje jezgre i nukleola, anti-p80 - svjetleće mrlje u jezgri kojih nema u mitotičkim stanicama.

Često se može pojaviti kombinacija nekoliko vrsta luminiscencije, na primjer, fino zrnata i nukleolarna, što je tipično za antitijela na Scl-70.

Ponekad u niskim razrjeđenjima prevladava jedan tip fluorescencije, na primjer granularna, a daljnjim razrjeđenjima otkrivaju se homogeni ili centromerni tipovi fluorescencije, što ukazuje na prisutnost različitih tipova ANA u serumu bolesnika.

Metoda istraživanja pomoću ljudskih epitelnih stanica HEp-2, koja omogućuje otkrivanje antinuklearnih protutijela - jednog od markera sistemskih bolesti vezivnog tkiva.

Sinonimi ruski

ANF, antinuklearna antitijela, antinuklearna antitijela (ANA).

engleski sinonimi

Antinuklearna antitijela (ANA), Hep-2 supstrat, ANA-Hep2, otkrivanje fluorescentnih antinuklearnih antitijela (FANA).

Način istraživanja

Reakcija neizravne imunofluorescencije.

Koji se biomaterijal može koristiti za istraživanje?

Venska krv.

Kako se pravilno pripremiti za istraživanje?

Nemojte pušiti 30 minuta prije davanja krvi.

Opće informacije o studiju

Određivanje antinuklearnog faktora (ANF) je “zlatni standard” za otkrivanje antinuklearnih protutijela (ANA) i dijagnostiku autoimunih bolesti.

Patogeneza sistemskih bolesti vezivnog tkiva (SKB) usko je povezana s poremećajima u imunološkom sustavu i pojačanim stvaranjem protutijela na strukture vlastitih stanica. Autoprotutijela na komponente stanične jezgre – antinuklearna antitijela – stupaju u interakciju s nukleinskim kiselinama i jezgrinim proteinima, citoplazmatskim antigenima, što se očituje upalnim promjenama u tkivima i organima, bolovima u zglobovima i mišićima, jakim umorom, gubitkom tjelesne težine i promjenama na koži. ANA se nalaze u mnogim autoimunim bolestima, ali su najčešći u sistemskom eritemskom lupusu (SLE). ANA se javljaju u više od 90% bolesnika sa sustavnim bolestima vezivnog tkiva, trenutno je opisano oko 200 varijanti koje objedinjuje jedno ime - antinuklearni faktor.

Pri određivanju ANF-a neizravnom fluorescencijom najčešće se koristi kontinuirana linija epitelnih stanica humanog laringealnog adenokarcinoma HEp-2. Stanice HEp-2 vrlo su pogodan supstrat za laboratorijska istraživanja, budući da imaju velike jezgre i rastu u jednom sloju na stakalcima. ANA se otkrivaju vezanjem na intracelularne antigene HEp-2 stanica.

Tijekom studije, epitelne stanice HEp-2 uzgajaju se na stakalcima, fiksiraju se i inkubiraju s razrijeđenim serumom pacijenta. Nakon uklanjanja viška seruma, stanice se inkubiraju s antitijelima obilježenim fluoresceinom, zatim se ponovno isperu i pregledaju pomoću fluorescentnog mikroskopa. U tom slučaju se određuje titar antitijela i vrsta sjaja. Titar veći od 1:160 smatra se dijagnostički značajnim. Tijekom pogoršanja reumatskih bolesti prelazi 1:640, a tijekom remisije smanjuje se na 1:160-1:320. Što je više antitijela, to je veći titar. Na temelju vrste sjaja moguće je identificirati mete antinuklearnih protutijela, što je od velike kliničke važnosti i određuje taktiku za daljnje ispitivanje pacijenta. Glavni su periferni, granularni (mali/veliki), nukleolarni, centromerni i citoplazmatski tipovi bojenja jezgre. Svaka vrsta sjaja ima vrlo karakteristične značajke koje omogućuju razlikovanje jedne opcije od druge.

Homogeno (difuzno) bojenje povezano je s prisutnošću protutijela na dvolančanu DNA, histona i karakteristično je za SLE i lupus izazvan lijekovima.

Periferna luminiscencija uzrokovana je perifernom raspodjelom kromatina u jezgri, povezana je s protutijelima na DNA i specifična je za SLE. Važno je razlikovati ovu vrstu luminiscencije od bojenja jezgrene membrane, koja se javlja kod autoimunih bolesti jetre.

Zrnasto (mrljasto, mrežasto) bojenje je najčešće i najmanje specifično; otkriva se kod mnogih autoimunih bolesti. Autoantigeni su u ovom slučaju nukleoproteinski kompleksi u jezgri (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B antigeni i PCNA).

Vrlo visoki titri ANF s grubo-zrnatim tipom luminiscencije često ukazuju na mješovitu bolest vezivnog tkiva.

Nuklearno (nukleolarno) bojenje nastaje stvaranjem protutijela na komponente nukleolusa (RNA polimeraza-1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl), otkrivenih kod sklerodermije, Sjögrenove bolesti. ANA se ponekad povećava kod endokrinih bolesti (šećerna bolest tipa 1, tiroiditis, tireotoksikoza, poliendokrini sindrom), kožnih bolesti (psorijaza, pemfigus), tijekom trudnoće, nakon transplantacije organa i tkiva, kod bolesnika na hemodijalizi.

Svjetljenje centromere pojavljuje se u prisutnosti protutijela na centromere kromosoma i karakteristično je za oblik sklerodermije - CREST sindrom.

Citoplazmatski tip luminiscencije povezan je s protutijelima na tRNA sintetazu, posebice na Jo-1, što je karakteristično za dermatomiozitis i polimiozitis. Ova vrsta bojenja također se određuje u prisutnosti protutijela na druge komponente citoplazme u autoimunom hepatitisu i primarnoj bilijarnoj cirozi.

Istodobna detekcija različitih vrsta luminiscencije ukazuje na prisutnost različitih vrsta protutijela.

U zdravih osoba može se detektirati sitnozrnata luminiscencija pri niskim, umjerenim ili visokim titrima ANA, ali normalno grubo zrnate ili homogene vrste luminiscencije ne bi se trebale otkriti.

Ovisno o rezultatima procjene vrste sjaja, razvijaju se daljnje taktike liječenja pacijenta i propisuju se dodatne studije za razjašnjavanje spektra ANA.

Za što se koristi istraživanje?

• Za dijagnostiku sistemskih bolesti vezivnog tkiva.
• Za diferencijalnu dijagnozu reumatskih bolesti.
• Procijeniti učinkovitost terapije autoimunih bolesti.
• Za praćenje tijeka sistemskih bolesti vezivnog tkiva.

Kada je studija zakazana?

• Za simptome autoimune bolesti (dugotrajna vrućica, bolovi u zglobovima, umor, gubitak težine, promjene na koži).
• Pri identificiranju promjena karakterističnih za sistemske bolesti vezivnog tkiva (povećani ESR, razina C-reaktivnog proteina, cirkulirajući imunološki kompleksi).

Što znače rezultati?

Referentne vrijednosti

Rezultat: negativno.

Naslov: 1:160.

Razlozi povećanja titra ANF na HEp-2 stanicama:

• sistemski eritematozni lupus (u 95% slučajeva),
• dermatomiozitis/polimiozitis,
• sustavna sklerodermija (u 60-90% slučajeva),
• Sjögrenov sindrom (u 40-70% slučajeva)
• miješana bolest vezivnog tkiva (Sharpeov sindrom),
• Raynaudov sindrom,
• diskoidni lupus,
• lupus izazvan lijekovima,
• reumatoidni artritis,
• nekrotizirajući vaskulitis,
• Infektivna mononukleoza,
• leukemija,
• maligne neoplazme (uglavnom limfomi),
• miastenija gravis,
• infektivni endokarditis,
• kronični autoimuni hepatitis,
• primarna bilijarna ciroza jetre,
• tuberkuloza,
• pneumokonioza,
• intersticijska fibroza pluća.

Vrste sjaja

Što može utjecati na rezultat?

• Lažno pozitivan rezultat uzrokovan je:

• • dob iznad 60-65 godina (u 10-37% slučajeva);
  • primjena lijekova koji mogu dovesti do lupusa izazvanog lijekovima (acetazolamid, karbidopa, klorotiazid, klorpromazin, klofibrat, etosuksimid, soli zlata, griseofulvin, hidralazin, izoniazid, litijeve soli, metildopa, oralni kontraceptivi, penicilin, fenilbutazon, fenitoin, primidon, prokainamid , propiluracil, kinidin, rezerpin, streptomicin, sulfonamid, tetraciklin, tiazidni diuretici).

• Uzimanje glukokortikosteroida (prednizolon, deksametazon, metipred) ponekad dovodi do lažno negativnog rezultata.

Važne bilješke

• U 5% slučajeva SLE-a moguć je negativan rezultat ovog testa (ANF-negativan SLE). U takvim situacijama, za razjašnjenje dijagnoze, potrebno je odrediti antitijela na SS antigene (Ro).
• Pozitivan rezultat testa nije apsolutni dokaz autoimune bolesti. U zdravih osoba u 3-13% slučajeva titar ANF je povećan i doseže 1:320.
• Rezultati testa moraju se procijeniti zajedno s kliničkim podacima i drugim laboratorijskim parametrima.
• Ako je rezultat testa pozitivan, preporuča se odrediti specifičnost ANA imunoblotingom.

• Probir protiv dvolančane DNA (anti-dsDNA).
• Protutijela na nuklearne antigene (ANA), probir
• Protutijela na nuklearni antigen koji se može ekstrahirati (ENA pregled)
• Antitijela na kardiolipin, IgG i IgM
• Antinuklearna antitijela (anti-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, Jo-1, histoni, nukleosomi, Ribo P, AMA-M2), imunoblot

Spada u skupinu velikih kolagenoza, koju karakterizira difuzno oštećenje vezivnog tkiva i krvnih žila. Rana dijagnoza ove patologije je ozbiljan problem, jer SLE može započeti pod "maskom" drugih bolesti. Budući da je SLE autoimuna bolest, mehanizam njegove kliničke manifestacije, prema suvremenim konceptima, objašnjava se sa sljedećih pozicija:

• cirkulirajući imuni kompleksi (CIC), koji uključuju antinuklearna protutijela, taložena u mikrocirkulatornoj vezi, dovode do razvoja vaskulopatija i oštećenja tkiva;
• autoantitijela na krvne stanice dovode do leuko-, limfotrombopenije i anemije;
• antifosfolipidna protutijela dovode do razvoja antifosfolipidnog sindroma (APS).

Suvremene metode imunološke laboratorijske dijagnostike omogućuju identificiranje svih komponenti patogeneze SLE-a i time provjeru dijagnoze bolesti s izvanrednom, gotovo stopostotnom točnošću. Međutim, prisutnost bilo kakvih promjena u analizama omogućuje njihovo tumačenje samo uzimajući u obzir pojedinačnu kliničku sliku.

Valja napomenuti da dosadašnja metoda dijagnosticiranja SLE-a prisutnošću LE stanica u krvi nije izdržala test vremena, pokazujući izrazito nisku osjetljivost i specifičnost, te je stoga napuštena. LE stanice nisu niti uključene u sustav SLE kriterija.

Glavni markeri SLE su:

Indikacije za propisivanje krvnog testa za markere sistemskog eritemskog lupusa

• kožni lupus;
• lupus izazvan lijekovima;
• trombocitopenična purpura;
• eritrodermija;
• teško oštećenje jetre;
• CREST sindrom;
• polimiozitis;
• dermatomiozitis;
• kronični juvenilni artritis;
• autoimuni hepatitis;
• sklerozirajući kolangitis;
• polineuropatija;
• mijelitis;

Kako se izvodi postupak?

Krv se vadi iz ulne vene natašte ujutro.

Priprema za analizu

Lupus antikoagulans

Lupus antikoagulansi (LA) jedan su od važnih testova probira i potvrde za dijagnosticiranje APS-a. VA nastaju u tijelu kao rezultat razvoja autoimunih procesa nakon infektivnih utjecaja i potiskuju reakciju pretvorbe protrombina u trombin u krvi. Kada se ta protutijela otkriju u krvi produljenjem koagulacijskih testova, definiraju se kao "lupus antikoagulans".

Pozitivan rezultat:

• tumori;

Antinuklearni faktor

Antinuklearni faktor na HEp-2 staničnoj liniji (ANF HEp-2, titri; ANA IF, titri). Pozitivan rezultat ANF-a opažen je u više od 90% bolesnika sa SLE i kožnim oblicima ove bolesti, sklerodermijom, mješovitom bolešću vezivnog tkiva, Sjogrenovim sindromom. Rezultat određivanja ANF je titar, što je vrijednost konačnog razrjeđenja seruma pri kojoj ostaje značajna nuklearna fluorescencija. Što je veći nazivnik frakcije, to je veće razrjeđenje seruma, to je više antitijela u serumu pacijenta. Osjetljivost ovog testa za SLE je 95%.

Visoki titri ANF (1/640 i više):

• velika vjerojatnost sistemske reumatske bolesti;
• velika vjerojatnost autoimune bolesti jetre;
• porast titra ANF tijekom vremena ukazuje na egzacerbaciju sistemske bolesti;
• kod SLE titar je u korelaciji s težinom bolesti i smanjuje se s učinkovitom terapijom.

Niski titri ANF (do 1/160):

• u 1-2% zdravih osoba;
• u rodbine bolesnika sa sustavnim bolestima;
• mnoge autoimune, zarazne i onkološke bolesti.

Antitijela na nukleosome

Nukleosomska protutijela (NCA) jedna su od prvih protutijela koja se stvaraju u tijelu tijekom razvoja SLE-a. NCA titri koreliraju s aktivnošću bolesti. Specifičnost određivanja ovih autoantitijela za dijagnosticiranje SLE je više od 95%.

Dekodiranje rezultata analize

Visoke razine antitijela na nukleosome (pozitivno):

• lupus izazvan lijekovima;
• aktivni SLE praćen nefritisom.

• mala vjerojatnost SLE;
• nizak rizik od oštećenja bubrega kod SLE.

IgG protutijela na dvolančanu DNA

Prisutnost IgG protutijela na dvolančanu DNA (anti-dsDNA IgG; anti-dsDNA IgG) visoko je specifična za SLE, au manjoj mjeri za druge difuzne bolesti vezivnog tkiva ili SLE izazvan lijekovima. Osjetljivost testa za SLE je 85%. Kvantitativno određivanje anti-dsDNA IgG protutijela najprikladnije je za praćenje stanja, prognozu i kontrolu terapije u bolesnika sa SLE-om jer korelira s njegovom aktivnošću i težinom glomerulonefritisa.

Dekodiranje rezultata analize

Viša razina:

• infekcija virusom Epstein-Barr;

Unazaditi:

• norma.

Anti-kardiolipinska IgG antitijela

Antikardiolipinska IgG protutijela (aCL IgG) jedna su od vrsta autoimunih antifosfolipidnih protutijela uključenih u patogenezu antifosfolipidnog sindroma. Njihova prisutnost u krvi očituje se produljenjem fosfolipidno ovisnih koagulogramskih testova (protrombin, aPTT), koji se nazivaju "lupus antikoagulans".

Dekodiranje rezultata analize

• lupus izazvan lijekovima;
• hepatitis C;
• borelioza;
• HIV infekcija.

Protutijela na kardiolipin IgM

Antitijela na kardiolipin IgM (aCL IgM), kada se otkriju, ukazuju na visok rizik od razvoja SLE; aCL IgM otkrivaju se u 20-50% bolesnika sa sistemskim eritemskim lupusom i 3-20% bolesnika s drugim sistemskim reumatskim bolestima.

Tumačenje

Pozitivan (otkrivena antitijela):

• hepatitis C;
• borelioza;
• HIV infekcija;
• sistemske bolesti vezivnog tkiva.

Norme