진균증 진단 및 현미경 검사를 위한 병리학적 물질의 수집. 진균증의 실험실 진단 진균증의 미생물 진단 및 예방 방법

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곰팡이가 첫 단계에 감염되면 병변을 식별하고 병원체를 결정하는 것은 극히 어렵습니다. 병리가 즉시 나타나지 않거나 다양한 증상이 나타나기 때문에 진단이 복잡합니다. 병원체를 확인하기 위해 병원성 미생물의 영향을받는 부위, 즉 가래, 피부 일부, 감염된 손톱, 혈액, 림프절 생검 또는 내부 장기에서 생체 물질을 채취합니다.

곰팡이 질병이란 무엇입니까?

그것은 어떻게 생겼나요?

피부과 의사에게 연락하는 이유는 일반적으로 질병의 첫 번째 병리학 적 증상입니다. 임상 징후는 감염 부위와 곰팡이 질병의 원인 물질에 따라 다릅니다. 다음과 같은 유형의 병원성 미생물이 구별됩니다.

• 칸디다 곰팡이 - 칸디다증 감염을 유발합니다.
• Trichophyton (Trichophyton) – 손톱, 피부, 점막의 감염성 병리를 유발합니다.
• 크립토코쿠스증 - 내부 장기, 폐를 공격합니다.
• 아스페르길루스증은 면역력 저하로 인해 발생하는 곰팡이 질병입니다.

진단 중에 국소화를 통해 두 가지 감염 그룹 중 하나를 결정할 수 있습니다.

병원성 미생물은 표피 표면의 상처, 미세 외상을 통해 침투하며 질병의 원인은 매끄러운 피부의 진균증을 유발하는 긁힘일 수 있습니다. 신체의 보호 기능이 저하되면 신체는 병원체의 공격에 대처할 수 없습니다. 진단 중에 Trichophyton 또는 Candida 속의 감염이 결정되는 경우가 많습니다. 후자는 다음과 같은 질병을 유발합니다.

• 아구창;
• 남성의 칸디다증;
• 구강 칸디다증.

수십 가지 이상의 병원균이 있으며 조직 손상 방법에 따라 분류됩니다. 진단 중에 다음과 같은 유형의 곰팡이 미생물을 식별할 수 있습니다.

• 심부 전신 진균증은 Histoplasma capsulatum에 의해 유발됩니다.
• 피하 피하 진균증은 Sportrichum schenckii에 의해 유발됩니다.
• 표피균증은 Epidermophyton floccosum으로 인해 발생합니다.
• 어루러기 비강증, 표재성 진균증 - Malassezia furfur;
• 기회 곰팡이 질병 - Candida albicans.

진균증의 분류

이 유형의 모든 질병의 일반적인 이름은 곰팡이에 의한 인체에 대한 다양한 유형의 손상을 숨깁니다. 진단 시 의사는 피부병을 4개 그룹으로 나눕니다.

1. 각화균증. 국소화 부위는 표피의 각질층이 되며, 피부의 다른 층에는 염증 현상(피에드라, 어루러기 비강증, 딱지, 포자충증)이 없습니다. 다음 곰팡이는 이러한 유형의 병리를 유발합니다: Sporotrichium, Trichosporon, Piedraia, Exophiala, Pityrosporum.
2. 피부진균증. 그들은 피부, 두피 및 손톱에 국한된 뚜렷한 염증 과정 (faus, trichophytosis, epidermophytosis, microsporia)이 특징입니다. 다음과 같은 곰팡이 균주가 병리를 유발합니다: Epidermophyton, Microsporum, Trichophyton.
3. 칸디다 증. 이러한 유형의 곰팡이는 점막, 피부 및 그 부속기에 영향을 미칩니다. 내부 장기는 종종 칸디다 속의 진균에 의해 공격 대상이 됩니다.
4. 깊은 진균증. 그들은 피부, 내부 장기, 점막, 뼈, 근육 (점액증, 페니실로스증, 아스 페르 길 루스 증)의 모든 층에 심각한 감염을 유발합니다.

진균성 질환은 아닌 별도의 가성진균증(방선균증, 적혈구증)이 있으나 증상은 진균증과 유사합니다. 이런 경우에는 감별 진단이 필요합니다. 이러한 경우 진단은 곰팡이 감염의 유형을 결정하거나 배제하는 데 도움이 되기 때문에 매우 중요합니다. 치료 요법의 목적, 기간 및 효과는 이에 따라 다릅니다.

피부진균증

피부 사상균은 피부 깊숙이 침투하여 피부진균증을 유발합니다. 예를 들어 다음과 같은 알려진 병리가 있습니다.

• 미포자증;
• 삼엽충증;
• 운동 선수의 발;
• 홍반증;
• favus.

이러한 유형의 병리학은 흉터, 손 변형, 발톱, 구조 변화 및 탈모를 유발하는 다양한 질병으로 분류됩니다. 병원균은 피부의 상부 깊은 층에 영향을 미쳐 종기와 같은 결절, 농포성 발진 및 광범위한 염증 부위가 나타납니다. 발달에 유리한 조건은 발 위생이 좋지 않다는 것입니다. 먼저, 곰팡이는 발의 피부, 발가락 사이의 공간에서 자란 다음 손톱으로 퍼집니다.

칸디다 증

병원성 미생물은 피부의 깊고 표층에 영향을 미치며 손톱, 머리카락, 내장 기관으로 퍼집니다. 질병은 칸디다 속의 곰팡이에 의해 발생하며 질병은 칸디다증 그룹에 속합니다. 이러한 질병에는 다음과 같은 유형이 구별됩니다.

• 일반화;
• 피상적인;
• 내장.

칸디다균은 기회감염균으로 분류됩니다. 효모 유사 병원체는 장, 구강 및 건강한 사람의 진단 중에 발견될 수 있습니다. 강한 면역력은 병원성 미생물의 확산을 억제하고, 약화되면 칸디다균의 활발한 번식이 시작되어 몸통, 발, 머리, 손의 피부가 손상됩니다. 모든 유형의 칸디다증에서 임상 변화가 관찰됩니다. 치료는 질병의 중증도와 병변의 유형에 따라 다릅니다.

심부진균증

이것은 피부와 내부 장기의 깊은 층에 영향을 미치는 일종의 질병입니다. 질병은 신체 방어력의 급격한 감소, 호르몬 수준의 변화 및 대사 장애로 인해 발생합니다. 다음 병리는 심부 진균증으로 분류됩니다.

• 콕시디오이데스증;
• 색소균증;
• 코뿔소증;
• 히스토플라스마증;
• 스포로트리증증;
• 분아균증;
• 점막증;
• 두족포증;
• 균종;
• 클라도스포라증;
• 마두라 발;
• 아스페르길루스증.

각막균증

이것은 모발 큐티클, 각질층 및 피부 표면층에만 국한된 병리 그룹입니다. 각화균증의 특징적인 징후는 염증 현상이 없다는 것입니다. 질병의 원인 물질은 곰팡이, 효모 유사 곰팡이, 피부사상균(약 70종의 병원균)입니다. 그들은 다음과 같은 질병을 유발합니다.

• 심베리;
• 알바 비강증;
• 이끼 검정;
• 진균증을 겹침;
• 열대성 흰색과 노란색 이끼류;
• 결절성 트리코스포리아;
• 피에드라;
• pityriasis versicolor (pityriasis versicolor).

곰팡이를 진단하는 방법

다음으로 육안 검사가 시작되는데, 이는 손상 정도와 곰팡이의 영향을 받은 부위를 파악하는 데 도움이 됩니다. 의사는 환자의 면역결핍 상태에 주의를 기울여야 합니다. 병원체의 유형을 결정하려면 실험실 테스트를 위해 보낸 물질을 수집해야 합니다. 경험이 풍부한 의사가 초기 검사에서 진단을 내릴 수 있지만 치료법을 세우려면 여전히 생체 물질을 연구해야합니다. 곰팡이 질병을 진단하는 데는 다음 방법이 사용됩니다.

• 현미경 검사 - 일반적이고 간단한 진단 방법인 현미경으로 생체 물질을 검사합니다.
• 우드 램프 아래에서 검사 - 특수한 자외선 스펙트럼(발광)이 곰팡이 병변을 발견하는 데 도움이 됩니다.
• 세균배양은 정확한 진단방법이나 영양배지에서 콜로니가 자랄 때까지 2~3주 정도 소요된다.
• PCR 진단은 병원성 미생물의 유형을 결정하는 가장 정확한 방법이지만, 정확한 진단을 위해서는 여러 가지 검사가 필요할 수 있으며 여기에는 비용이 소요됩니다.

실험실 방법

시기 적절하고 정확한 진단만이 효과적인 치료 요법을 처방하고 과정 기간을 줄이는 데 도움이 될 것입니다. 곰팡이 질병의 실험실 진단은 병원체 유형을 결정하는 가장 효과적인 방법입니다. 식별을 위해 다음 연구 옵션이 사용됩니다.

• 세균 배양;
• 조직학적 분석;
• PCR 진단;
• 면역학 연구;
• 미생물학 연구;
• 문화 연구.

진균증의 감별진단

진균증은 유형에 따라 증상이 다르기 때문에 정확한 진단을 내리는 것이 어렵습니다. 이러한 경우 감별 ​​진단 방법이 사용되며 진균증은 다른 피부과 병리와 비교됩니다. 종종 진균증의 징후가 건선과 혼동되지만 비늘을 긁어 내면 곰팡이 병리에서 출혈이 발생하지 않습니다. 유사한 증상이 parapsoriasis에서도 관찰됩니다.

의사는 화폐상 습진이 발생할 가능성을 배제해야 합니다. 이는 실험실 진단을 통해서만 발견할 수 있는 특별한 유형의 병리학입니다. 종종 곰팡이의 징후는 다형성 광피부병으로 오인되는데, 이는 성인에서만 발생할 수 있고 어린이에게는 전혀 발생하지 않습니다. 정확한 진단을 내리고 유능한 치료를 처방하려면 실험실 및 감별 진단이 필요합니다.

진균증의 미생물학적 진단

이는 피부와 혈액에서 진균증을 검출하는 가장 간단하고 일반적인 방법입니다. 정확한 진단을 위해서는 연구자료 수집이 필요하다. 두피에 문제가 있는 경우 핀셋을 사용하여 해당 모발을 모아 피부에서 손상된 부위를 긁어내야 합니다. 미생물학적 방법을 사용하는 곰팡이 질병에 대한 실험실 연구는 생체재료를 30% 수산화칼륨 용액에 넣은 다음 유리 슬라이드 위에 놓아 수행됩니다.

분석은 곰팡이의 위치(피부, 머리카락의 외부 또는 내부)와 크기를 결정하는 데 도움이 됩니다. 자료를 잘못 수집하면 분석 결과가 잘못될 수 있습니다. 진단에는 다음과 같은 미생물학적 진단 방법이 사용됩니다.

• 기본 및 염색되지 않은 준비를 갖춘 현미경 검사;
• 염색된 제제를 사용한 현미경 검사.

연구방법

진단 시 전문가는 균사체의 구조(균사의 구조, 격벽, 색상), 포자, 포자의 구조적 특징, 색상, 모양 및 크기, 세포벽의 구조 등을 고려해야 합니다. .이 고려됩니다. 연구를 위해 기본 색상의 준비물이 준비됩니다. 후자는 다양한 방법으로 재료를 처리해야 합니다.

1. PAS 염색. 이러한 유형의 염색은 미생물 벽의 중성 다당류를 식별하는 데 도움이 됩니다. 여기에는 많은 진균류의 세포벽에서 발견되는 글루칸-만난 복합체가 포함됩니다. 그것은 착색 과정을 유발합니다.
2. PAS 반응. 조직 형태의 곰팡이 감염을 진단하는 데 사용됩니다. 실험실에서는 Gridley 염색 또는 Bauer 반응과 같은 다양한 변형이 이 연구에 사용됩니다.
3. 그램 방법. 이러한 방식으로 염색하면 동반 미생물의 존재를 확인하는 데 도움이 됩니다.
4. Ziehl-Nielson 염색. 항산성 미생물을 식별하는 데 도움이 됩니다. 생체 적합 물질이 액체인 경우 현미경 검사를 위해 액체를 깨끗하게 하는 특수 얼룩이 없는 도말을 준비합니다. 글리세린과 알코올을 같은 비율로 혼합합니다.

곰팡이 배양시험

생체재료를 영양배지(배양)에 놓아 실온에서 순수한 배양물을 분리합니다. 이러한 조건에서 이형 곰팡이는 균사체를 형성하고 37도까지 자라면 효모와 같은 세포가 형성되기 시작합니다. Sabouraud 배지는 피부사상균과 칸디다 진균에 사용되며 곰팡이가 있는(균사) 진균에는 Czapek 배지가 필요합니다. 항생제가 종종 조성물에 첨가됩니다. 심부 진균증은 전염성이 높기 때문에 임상 실험실 센터에서만 확인할 수 있습니다.

곰팡이 질병의 발광 진단

Microsporum 속의 병원성 미생물로 영향을받는 피부 부위를 확인하기 위해 자외선 램프가 사용됩니다. 이는 피부 감염의 유무 또는 이끼류 질환의 증상을 확인하는 데 필요한 경우 사용되는 빠른 진단 옵션입니다. 자외선은 곰팡이를 판별하는 주요 방법이 아니며 보조적인 방법이므로 반드시 필요하지는 않습니다.

환자를 검사하기 위해 Wood 램프가 사용되며 UV 방사선을 방출하고 그 영향으로 곰팡이의 노폐물이 밝은 빛으로 빛납니다. 색상은 환자에게 영향을 미치는 병원체의 유형에 따라 다릅니다.

• 녹색 – 두피 이끼;
• 파란색 – 입술의 홍반성 루푸스;
• 황색 – 편평한 이끼 형성.

곰팡이에 대한 면역효소 혈액검사

피부와 내부 장기에 영향을 미치는 진균증(히스토플라스마증, 콕시디오이데스증)을 검출하기 위해 곰팡이 질환에 대한 면역 효소 혈액 검사가 사용됩니다. 이 기술은 특정 이유로 연구용 조직 생검을 실시할 수 없는 경우에 자주 사용됩니다. 이 기술은 특정 유형의 곰팡이 질병에 대한 항체 역가를 검색하는 데 기반을 두고 있습니다.

이러한 목적을 위해 아스페르길루스증과 칸디다증에 대한 IgG 측정이 사용됩니다. 분석 정확도는 약 80%이며, 드물게 깊은 진균증이 없어도 위양성 결과를 얻을 수 있습니다. 이는 환자의 구강 점막에 곰팡이가 있거나 진행된 형태의 아구창이 있을 때 발생합니다. ELISA에는 아침 일찍 또는 마지막 식사 후 4시간 후에 정맥혈 샘플이 필요합니다. 분석을 위해 다른 준비가 필요하지 않습니다.

분석에 대한 답변은 생체재료를 수집한 후 며칠 후에 나올 것입니다. 대기 기간이 5일을 초과하는 경우는 거의 없습니다. 혈액 샘플에 대한 추가 연구를 수행해야 하는 이유가 있는 경우 실험실 장비의 품질은 연구 속도에 영향을 미칩니다. 절차가 완료되면 환자에게 다음 값 중 하나를 나타내는 결론이 제공됩니다.

• 곰팡이가 있는 것으로 확인되면 “양성 결과”라고 기재됩니다.
• 혈액에서 곰팡이가 발견되었다는 완전한 확실성이 없으면 "의심스러운 결과"라고 적습니다.
• 생체 재료 샘플에 병원성 미생물이 없으면 "음성 결과"가 기록됩니다.
• 좋은 장비가 있으면 혈액 검사를 통해 균증 세포의 농도를 확인하고 결론적으로 지표를 나타낼 수 있습니다.

곰팡이 질병의 PCR 진단

곰팡이 및 기타 전염병을 진단하는 가장 정확하고 신뢰할 수 있는 방법은 다크기 연쇄반응입니다. 진단 방법에는 다음과 같은 장점이 있습니다.

• 저렴한 분석 비용;
• 높은 명중률;
• 생체재료에 대한 연구가 신속하게 진행됩니다.
• 분석을 위해 모든 조직 샘플(피부 조각, 점막, 발바닥 긁기, 손가락, 손톱 표면, 머리카락, 혈액)을 수집할 수 있습니다.

본 연구의 가장 큰 한계는 초점이 좁다는 점이다. 진균증을 진단하려면 인체에 어떤 영향을 미쳤는지 정확히 알아야 합니다. PCR은 병원체의 유형과 환자 신체의 농도를 결정합니다. 결과는 하루 안에 알려지며, 경우에 따라(불리한 조건이 없는 경우) 배송 당일(5~6시간 내) 답변이 제공됩니다. 연구 속도는 검체 채취의 정확성, 의료진의 경험, 실험실의 업무량에 따라 달라집니다.

집에서 곰팡이를 식별하는 방법

진균성 병리의 증상을 인식하는 능력과 가정 진단 방법을 사용하면 병원체의 유형을 결정할 수 있습니다. 환자는 질병의 경과를 정확하게 평가해야 하며, 초기 단계에서는 곰팡이 질병이 건선이나 이끼류와 혼동될 수 있습니다. 이를 피하려면 다른 질병과 구별되는 진균증의 주요 징후를 알아야 합니다. 곰팡이 감염의 증상:

• 손톱이 노랗게 변하고 벗겨지기 시작합니다.
• 네일 플레이트의 모양 변화;
• 완화 및 악화 기간이 없으며 판의 완전한 분리가 시작되며 피부 병리 및 건선에서는 발생하지 않습니다.
• 영향을받는 부위에는 불쾌한 냄새가 나고 만지면 아프고 가려움증, 벗겨짐 및 피부 표면에 플라크가 형성 될 수 있습니다.
• 곰팡이는 일반적으로 한쪽 또는 양쪽 발의 발가락 사이 공간에 영향을 미치며, 이후 손톱과 발의 나머지 부분으로 질병이 퍼집니다.

과망간산칼륨을 이용한 발톱무좀 진단

손가락과 발가락의 손톱에 변화가 생기기 시작하거나 불쾌한 냄새가 난다면 집에서 바로 감염 여부를 확인할 수 있습니다. 분석을 위해서는 망간, 따뜻한 물, 용기가 필요합니다. 절차는 다음과 같이 수행됩니다.

• 피부병의 징후가 있으면 해당 부위에 얇은 요오드 층을 바르십시오.
• 2분 정도 기다리세요.
• 문제가 있으면 병변이 풍부한 색을 띠게 됩니다.
• 피부의 건강한 부위는 강조 표시되지 않습니다.

모스크바 클리닉에서 곰팡이 질병을 진단하는 데 비용이 얼마나 드나요?

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주목!기사에 제시된 정보는 정보 제공의 목적으로만 제공됩니다. 기사의 자료는 자기 치료를 권장하지 않습니다. 자격을 갖춘 의사만이 특정 환자의 개별적인 특성에 따라 진단을 내리고 치료 권장 사항을 제시할 수 있습니다.

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불행하게도 오늘날에도 곰팡이 질병의 진단은 시기상조인 경우가 많습니다(모발이 가늘어지고 벗겨지는 부위는 종종 "비듬", "건조함"으로 오인됨). 동시에 병변에는 주관적인 감각 (가려움증, 통증 등)이 발생하지 않는 경우가 많으므로 환자는 오랫동안 전문의와 상담하지 않습니다.

타박상, 동상 등이 발생한 후 손톱의 변화(못생김, 부서짐, 얇아짐)는 “손톱 이영양증”으로 간주됩니다. 동시에(손톱을 포함한 고립된 병변이라도) 신체에 알레르기 변화가 형성되어 신체에 영향을 미칠 수 있습니다. 순환계 및 림프계 혈관 등 환자는 곰팡이 감염의 원인으로 무기한 남아 있습니다. 위와 관련하여 진균증에 대한 시기적절한 실험실 진단과 가능한 조기 치료가 항상 관련됩니다.

인간에서 주로 발견되는 다양한 임상적 변종뿐만 아니라 다양한 곰팡이 종(및 속)의 미생물학, 형태구조, 면역학적 및 기타 매개변수의 특성으로 인해 진균증을 진단하는 수많은 방법의 가용성이 결정되었습니다. ; 이용 가능한 방법은 지속적으로 개선되고 있으며 (비교적 최근에는) 면역학적 및 분자 유전학 검사에 대한 독특한 편견이 있다는 점에 유의해야 합니다.

반면에 문화 연구는 여전히 “최적 표준에 가깝고” 다른 연구의 모호한 결과를 확인하는 데 사용됩니다. 진단적으로 "의심스러운" 형태의 진균증(특히 전파된 진균증, 모든 기원의 면역 억제 배경, 내부 장기 손상 등)에 대한 문화 및 분자 유전적 방법의 조합이 가장 신뢰할 수 있는 방법 중 하나라는 의견이 있습니다. 프로세스의 진균성 특성을 등록하는 방법.

그러나 "오래된"방법, 특히 세균 내시경 검사 (특히 초기 검사 중)를 무시해서는 안됩니다. 특히 일상적인 실습에서 많은 피부과 기관의 진균증에 대한 현미경 "검증"이 다른 검사와 비교하여 가장 널리 사용되기 때문입니다.

피부 (때로는 내장)의 알레르기 발현 수가 크게 증가한 것을 고려하여 장기간, 만성, 주기적으로 악화되는 진균증 (피부, 손톱 등)의 경우 알레르기 치료를 수행하는 것이 좋습니다 진균-박테리아 복합 감염을 포함하여 신체의 감작 정도를 확인하는 테스트; 이 사실은 특정 환자의 치료 특성에 영향을 미칠 수 있습니다. 예를 들어 항진균제 및 탈감작제의 합리적인 처방 결정 등이 있습니다.

전통적으로 곰팡이 질병의 추정 진단은 임상 증상을 토대로 이루어지며 실험실 테스트를 통해 확인됩니다.

책의 이 섹션에서는 "연구 유형 및 사용된 자료"를 고려하여 진균증을 기록하는 기본 방법(위치에 관계없이)을 간략하게 제공합니다. 진균증의 임상적 발현(알레르기 성분 포함)의 다형성이 검사할 병리학적 물질의 다양성을 결정한다는 점에 유의해야 합니다. 동시에 버섯 요소 검색의 성공 여부는 올바른 선택에 달려 있습니다.

따라서 홍반편평형, 흔히 모양이 있는 발진의 주변 영역에는 균사체, 곰팡이 포자가 더 풍부합니다. 병변의 털이 많은 부위, 말려 있고 희끄무레하고 표백되고 둔한 모발 또는 그 파편 - "그루터기"가 채취됩니다 (우드 램프를 사용하여 모발 수집을 제어하는 ​​것이 좋습니다). 소위 말하는 것에서 재료를 수집하려면 (바늘을 사용하여) 특정 기술이 필요합니다. "검은 점" - 모낭 입구에 있는 어두운 각질의 원뿔입니다.

일상적인 실습에서는 일반적으로 피부 조각 (스크래핑, 번짐, 접착 테이프 사용으로 수집), 변색 된 손톱 긁기, 조갑하 각화증 부위 및 점막 분비물을 검사합니다. 적응증에 따라 가래, 세척액 및 소변을 검사합니다(카테터를 삽입하지 않은 방광 환자의 경우). 소변기 및 변기의 소변은 연구용으로 수집할 수 없습니다.

혈액(문화 검사, ELISA, PCR용), 뇌척수액 및 기타 체액(흉막, 관절 내, 복강 내 - 흡인 또는 배액을 통해 수집된 체액 포함)도 진단 가치가 있습니다. 어떤 경우에는(국소 진단에 따라) 담즙, 대변, 피하 농양의 점상 및 누공으로부터의 분비물이 중요합니다(특히 심부 진균증의 경우). 간단한 진단 테스트라도 여러 가지 조건을 엄격하게 준수해야 합니다.

현재 곰팡이 질병을 진단하는 데 다음 방법이 사용됩니다.
- 현미경; 테스트 물질에서 병원체의 검출을 기반으로합니다. 인간 조직에서;
- 배양 검사에 이어 곰팡이 배양에 대한 현미경 검사가 이루어집니다.
- 조직학적 검사(심부 진균증의 경우)
- 면역 및 분자 방법.

현미경 진단

현미경 진단에는 염색되지 않은(기본) 준비와 염색된 준비에 대한 연구가 포함됩니다. 언급한 바와 같이 이 방법은 상대적으로 단순하고 비용이 저렴하기 때문에 피부과 진료에서 가장 일반적이지만, 민감도가 낮고 경우에 따라 반복적인 테스트와 다른 방법을 통한 확인이 필요합니다.

따라서 염색되지 않은 제제를 검사할 경우 진균성분 외에 상피세포, 혈액세포, 외부환경의 각종 오염물질 등을 검출할 수 있어 진균증의 원인균을 찾기 어렵고 추가적인 물질의 “조제”가 필요하다. -소위. 그것을 "깨달음"(침용), 집중, 희석 등.

그럼에도 불구하고, 천연 제제의 직접 현미경 검사를 통해 진균증을 신속하게 진단하고 (필요한 경우) 물질을 접종해야 하는 영양 배지를 결정할 수 있습니다. 양성 결과는 음성 반응이 있는 진균증의 유일한 실험실 확인으로 남을 수 있다는 의견이 있습니다. 문화 (A.Yu. Sergeev, Yu.V.Sergeev, 2003).

약물을 "제거"하는 다양한 옵션 중에서 가장 일반적인 것은 시험 물질에 KOH 또는 NaOH를 첨가하는 것입니다(피부 비늘, 모발의 진균뿐만 아니라 가래 및 생검 샘플).

분쇄하여 유리 슬라이드에 놓는 경우 가성 소다 (또는 칼륨)의 10-20 % 용액이 사용됩니다-1-3 방울, 10-20 분; 커버 글래스로 프렙을 가볍게 누르고, 더 빠르게 침용하기 위해 증기가 나타날 때까지 화염 위에서 가열합니다. 관찰은 먼저 낮은 배율에서 수행된 다음 높은 배율(건식 시스템)에서 수행됩니다.

가혹한 기계적, 열적, 화학적 영향을 받지 않은 적절하게 준비된 제제는 상피 세포, 곰팡이 요소의 세포 부패 생성물(균사체 실 및 포자)로 구성된 균질한 덩어리의 그림을 제공합니다.

변화된 모발을 알칼리 10-30% 유리슬라이드 위에 놓고 같은 방법으로 처리하되 20분에서 3-4시간 정도 더 오랜 시간 동안 처리합니다.색소 함량이 풍부할 경우 먼저 탈색하는 것이 좋습니다 5% 과산화수소 용액으로 모발을 헹구세요. 그들은 곰팡이 요소의 탐지와 머리카락과 관련된 위치를 중요하게 생각합니다.

병리학적으로 변화된 손톱(바람직하게는 병변의 깊이에서 긁어서 얻은 미세한 분말)에서 재료를 준비하는 것은 비슷한 방식으로 수행되지만 30% 가성소다를 사용하고 가벼운 증기에 불꽃을 조심스럽게 가열하고 노출시켜야 합니다. 약 1시간(경우에 따라 최대 몇 시간). 알칼리로 처리된 제제는 "부패"(시약의 결정화, 현미경 사진으로 결정되는 진단 신뢰성 감소)로 인해 1.5-2시간 이상 보관해서는 안 됩니다.

KOH 또는 NaOH 대신 다음을 사용할 수 있습니다. a) KOH와 15% DMSO의 혼합물 용액; b) 페놀(2부)과 클로랄 수화물(2부) 및 젖산(1부)의 혼합물; c) 히아긴 및 셀룰로오스에 친화성을 갖는 칼코플루어 화이트; 연구를 위해서는 형광 현미경이 필요합니다(사용된 필터에 따라 파란색 또는 녹색 빛이 관찰됩니다). 뇌척수액을 검사할 때(크립토코쿠스증이 의심되는 경우) 잉크 염색이 자주 사용되었습니다.

Kulaga V.V., Romanenko I.M., Afonin S.L., Kulaga S.M.

침습성 진균증의 정밀진단쉬운 일이 아닙니다. 이는 곰팡이 배양을 얻는 데 어려움이 있을 뿐만 아니라 연구 결과를 해석하는 데에도 어려움이 있기 때문에 설명됩니다. 효모와 사상균 모두 점막에 군집을 형성하고 연구 대상 시료를 오염시킬 수 있기 때문입니다. 이에 침습성 진균증의 진단은 균류학적(문화적) 및 혈청학적(진균항원 측정) 연구 결과뿐만 아니라 진균 감염의 임상 증상, 보조 연구 방법(컴퓨터)의 데이터를 포함한 통합적 접근법을 기반으로 합니다. 또는 자기공명영상, 초음파).

유럽-미국 협력 그룹 침습성 진균증 연구를 위해침습성 진균증을 진단하는 기준은 면역 저하 환자에서 개발되었습니다. 이는 2001년 항생제 및 화학요법에 관한 국제 회의(ICAAC, 시카고)에서 발표되었고 2002년에는 인쇄물로 발표되었습니다. 입증되고, 가능성 있고, 가능한 침습성 진균증에 대한 기준이 정의되었으며, 이는 임상 및 역학 연구에 사용하도록 권장됩니다.

사상균에 의한 입증된 침습성 진균증: 조직학 또는 세포학 검사 중 생검 또는 흡인물에서 진균 균사체의 검출 또는 무균 상태에서 무균 상태에서 얻은 샘플로부터 배양물을 분리하는 동안 임상 및 방사선 연구 결과에 따라 감염과 관련이 있는 무균 병변의 검출 소변과 점막에 대한 연구는 제외됩니다.

효모균에 의한 입증된 침습성 진균증: 점막 검체를 제외하고 생검이나 흡인액에서 효모 세포(칸디다 속의 진균은 가성균사체 또는 진균사체를 형성할 수 있음)를 검출하거나 일반적으로 무균 병변에서 무균 조건에서 얻은 검체로부터 배양물을 분리하는 경우 소변, 부비동 및 점막 샘플을 제외한 감염과 관련된 임상 및 방사선 검사 결과 또는 현미경 검사 및 효모 세포의 특정 염색(인도 잉크 한 방울, 뮤시카민 염색)에 의한 검출 또는 Cryptococcus spp.의 양성 항원. 뇌척수액에서.

사상균에 의한 진균증: Aspergillus spp.를 제외한 진균의 혈액배양 분리. 및 Penicillium marneffei를 포함한 Penicillium spp.가 분리된 병원체와 호환되는 감염 과정의 임상 증상과 함께 발생합니다.

효모균으로 인한 진균증: 이 병원체와 관련된 감염의 임상 징후가 있는 환자로부터 칸디다 또는 기타 효모균의 혈액 배양 분리.

침습성 진균증에 대한 복잡한 진단 연구

침습성 진균증 가능성다음 기준을 조합하여 진단합니다.
미생물학적 기준 범주의 하나의 기호;
감염 과정의 "중요한" 범주에서 하나의 징후 또는 "덜 중요한" 임상 증상 그룹에서 두 개의 징후.

침습성 진균증 가능성다음 기준을 조합하여 진단합니다.
침습성 진균증 발병을 유도하는 적어도 하나의 위험 인자의 존재;
미생물학적 기준 범주의 한 가지 징후 또는 감염 과정의 "중요한" 범주("덜 중요한" 그룹의 두 개) 임상 증상 범주의 한 가지 징후.

개념 " 침습성 진균증 가능성» 항진균제의 효과를 연구하는 임상 시험에는 사용하지 않는 것이 좋습니다. 경험적 항진균 치료, 역학 연구, 약물경제학 연구 등을 분석할 때 이 용어를 사용할 수 있습니다.

~에 균학 연구무균 흡인 또는 생검에서는 곰팡이 배양의 분리뿐만 아니라 현미경으로 균사체 또는 가성균사체를 검출하는 것도 고려합니다. 조직학적 준비에서 Aspergillus는 Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum 및 기타 사상균과 구별하기 어렵습니다. 감별진단을 위해서는 Aspergillus에 대한 항체를 이용한 면역조직화학적 검사를 실시해야 합니다.

효모균의 분리적어도 한 연구에서 혈액에서 채취한 항진균제는 "입증된" 침습성 진균증 범주에 속하며 호중구감소증 환자의 전신 항진균제 처방에 대한 절대적인 적응증입니다. 혈액에서 효모균을 검출하는 빈도는 낮으며, 파종성 칸디다증이 있는 경우에도 35-50%입니다.
수행 반복적인 혈액배양긍정적인 결과를 얻을 가능성이 높아집니다.

다른 해석혈액에서 사상균이 검출된 경우 결과입니다. 사상균의 높은 분리 빈도는 Fusarium spp.의 특징입니다. 40~60%에 달합니다. Aspergillus는 극히 드물게 검출되며 Aspergillus terreus를 제외하고 대부분의 경우 오염으로 간주됩니다.

선택 아스퍼질러스 테레우스혈모세포증 환자의 혈액에서 채취한 혈액 검사는 진정한 아스페르길루스혈증을 나타낼 수 있으며 감염의 임상 증상이 있는 경우 항진균제 처방의 기초가 됩니다.

침습성 진균증의 기준

~에 혈액 내 검출또는 효모 진균의 기타 무균 생체 기질의 경우 종에 대한 식별을 수행하고 항진균제에 대한 민감성을 결정하는 것이 필요합니다. 사상균을 분리하는 경우 종에 대한 식별만 가능하며 민감도는 결정되지 않습니다.

임상에서는 관행사상균의 감수성은 항진균제에 대한 곰팡이의 감수성을 결정하는 기준이 불완전하기 때문에 연구되지 않았습니다. 더욱이 Aspergillus spp.의 감수성 사이의 상관관계를 입증한 연구는 단 하나뿐입니다. 및 혈액학적 악성종양 환자의 침습성 아스페르길루스증 치료 결과. 후속 연구에서는 유사한 결과를 발견하지 못했습니다.

최근 이트라코나졸과 보리코나졸에 대한 A. fumigatus 곰팡이의 후천적 저항성이 형성된다는 별개의 보고가 나타나기 시작했습니다.

종별 버섯 식별특히 무균 유전자좌에서 얻은 것들은 주로 항진균제를 선택하고 적절한 항진균 치료를 수행하는 데 필요합니다. 따라서 칸디다 크루세이(Candida krusei)는 플루코나졸에 내성이 있고 다른 효모 종에 비해 암포테리신 B에 덜 민감합니다. Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum(Pseudallescheria boydii), Trichosporon Beigelii, Scopulariopsis spp. 암포테리신 B에 내성; Mucorales는 itraconazole, voriconazole에 내성이 있으며 Candida glabrata는 fluconazole에 용량 의존적 민감성을 나타내며 이러한 유형의 곰팡이가 분리되면 민감한 균주라도 fluconazole의 용량을 늘려야합니다 (성인의 경우 400mg 대신 800mg 처방). Candida lusitaniae는 amphotericin B에 내성이 있습니다.

종별 버섯 식별병원에서 역학 분석을 수행하는 데에도 중요합니다. 즉, 감염 발병의 원인 물질과 가능하다면 감염 원인을 식별하는 것입니다. C. lusitaniae, C. krusei, C. lipilytica와 같은 희귀 진균에 의한 감염의 발생이 보고되었습니다.

기반을 둔 버섯 종 식별침윤성 진균증이나 점막의 곰팡이 군집이 가정될 수 있습니다. 예를 들어, Aspergillus niger는 Aspergillus fumigatus보다 급성 백혈병 환자에게 침습성 아스페르길루스증을 일으킬 가능성이 훨씬 적습니다. 기관지 폐포 세척액에서 Aspergillus niger를 분리하는 것은 호흡기의 집락화로 가장 흔히 간주되며, 객담에서는 공기 오염으로 간주되며 침습성 아스페르길루스증 진단을 확정할 때 추가 연구가 필요합니다.

기반을 둔 사상균의 분비물객담, 기관지폐포액, 부비동 흡인물에서는 "입증된" 범주에 포함되지 않고 침습성 진균증만 추정할 수 있습니다. 그러나 동종이형 골수를 투여받은 호중구 감소증 환자의 가래에서 Aspergillus, 특히 Aspergillus fumigatus 또는 Aspergillus flavus가 검출되는 경우를 항상 고려해야 합니다. 이를 위해서는 반복적인 균학적 검사와 폐 컴퓨터 단층촬영이 필요합니다. 따라서 호중구감소증의 경우 Aspergillus spp.의 양성 배양의 경우 침습성 Aspergillosis를 검출할 가능성이 높습니다. 가래는 80%이다.

선택 크립토코커스 네오포르만스면역 저하 환자의 경우 호흡기관(세척, 세척)을 통한 감염은 진단적으로 중요합니다. 면역 저하 환자의 기도(기관, 기관지 세척액, 기관지 폐포 세척액)에서 얻은 체액에서 효모균을 식별하는 연구가 필요하지 않은 경우, 이러한 샘플에서 크립토코쿠스 네오포르만스를 식별하기 위한 스크리닝이 필요합니다.

소변에서 칸디다균 검출호중구 감소증과 발열이 있는 환자의 경우 일반적으로 파종성 칸디다 감염의 징후로 간주됩니다.

적시에 진단 Aspergillus spp.의 특정 항원 순환을 탐지하기 위해 상업적 테스트를 성공적으로 사용했습니다. 갈락토만(진균 세포벽의 다당류 수용성 성분).

갈락토만라텍스 응집법(Pastorex Aspergillus, BioRAD)과 효소면역분석법(Platelia Aspergillus, BioRAD)의 두 가지 방법으로 측정할 수 있습니다.

이점 효소면역분석법혈액 내 갈락토만 수준을 결정하기 위한 더 낮은 민감도 임계값은 1ng/ml 이하이고 라텍스 응집을 사용하는 경우는 15ng/ml입니다. 혈액(적어도 2개 샘플), 뇌척수액, 기관지 폐포 세척액 내 갈락토만 측정은 진단적 가치가 있습니다. 효소 면역분석 방법의 민감도는 약 90%, 특이도는 90-99%이며, 동종 골수 수혜자의 경우 이러한 지표는 예방으로 인해 각각 60-70% 및 80-90%와 동일합니다. 항진균제 사용(항진균제는 갈락토만 역치 수준을 감소시킵니다).

40%의 사례에서 탐지 갈락토만혈액에서는 폐의 컴퓨터 검사에 의해 결정되는 침습성 아스페르길루스증의 발현보다 앞서 있으며, 70%에서는 감염의 임상 증상보다 앞서 있습니다.

항원검출검사의 진단적 가치 아스퍼질러스연구가 반복적으로 수행되는 경우입니다. 혈액 내 아스퍼질러스 항원 측정은 호중구감소증 환자의 광범위한 항생제 치료 중 발열이 있는 동안 일주일에 2회 실시해야 합니다. 항균 요법 중에 발생하거나 지속되는 폐렴의 경우; 폐 조직에서 병변이 발견된 경우(컴퓨터 단층촬영).

곰팡이 피부 질환의 임상상은 매우 다형성이 높으므로 모든 경우에 실험실 연구 방법을 통해 진단을 확인해야 합니다. 진균증의 실험실 진단에는 동물 실험뿐만 아니라 현미경, 발광, 배양, 면역학 (알레르기 및 혈청학) 연구 방법이 사용됩니다.

진균증의 실험실 진단은 여러 단계로 구성됩니다. 일상적인 임상 실습은 일반적으로 오염된 물질에 대한 현미경 및 배양 검사로 제한됩니다. 필요한 경우 면역학적, 조직학적 연구 및 실험 동물의 감염을 통해 이러한 방법을 보완합니다. 일부 피부 진균증의 경우 발광 방법이 진단에 중요한 지원 역할을 합니다.

병리학적인 물질을 복용합니다.

진균증에 대한 실험실 연구의 성공은 주로 병리학적 물질의 올바른 수집에 달려 있습니다. 곰팡이는 사람의 다양한 장기를 감염시킬 수 있으므로 진균증이 의심된다면 다양한 병리학적 물질을 조사할 필요가 있다. 피부과 진료에서는 피부 비늘, 머리카락, 손톱에 대한 진균 검사를 받는 진균증을 가장 자주 다루어야 합니다. 심부 및 전신 진균증이 의심되는 경우, 가래, 세척수, 소변, 대변, 고름, 점막 분비물, 혈액, 장기 조각 및 생검 조직의 진균에 대한 실험실 진단이 필요할 수 있습니다.

병리학적 물질이 채취되어야 하는 피부 병변에서는 며칠 또는 몇 주 전에 모든 치료를 중단해야 합니다. 약한 소독액이나 심지어 무관심한 약제를 사용하면 연구에 방해가 될 수 있다는 점을 명심해야 합니다. 병리학적 물질을 수집하기 직전에 병변을 96% 알코올 또는 자일렌 용액으로 치료해야 합니다. 신선하지만 이미 완전히 발달한 병변에서 물질을 채취하는 것이 가장 좋습니다. 병변 주변의 피부 비늘을 긁어내야 하며, 곰팡이는 균사체와 포자의 형태로 가장 흔하게 발견됩니다. 메스로 피부 비늘을 제거하고 제모 핀셋으로 딱지를 제거합니다.

두피 진균증 환자의 경우 제모 핀셋을 사용하여 해당 모발을 제거합니다. 연구를 위해서는 긴 머리카락뿐만 아니라 호 또는 쉼표 형태의 짧고 꼬인 곡선 머리카락을 취해야하지만 밑 부분은 칼집으로 덮여 있습니다. 파부스를 의심한다면 털이 끊어지지 않고 칙칙해지고 생기가 없어지며 회색빛을 띤다는 사실을 기억하셔야 합니다.

영향을 받은 손발톱판의 표면 병변을 메스로 긁어내고, 두꺼운 손발톱판을 메스나 손톱깎이로 잘라냅니다.

액체 병리학적 물질은 무균 용기에 무균적으로 수집하고, 피부, 손톱 및 머리카락의 비늘은 일반 또는 부드러운 양피지 조각에 수집합니다.

접종을 위한 점막 분비물을 흡수성 면봉으로 채취한 후 건조하고 멸균된 시험관 또는 영양배지(Sabouraud's wort) 2ml가 들어 있는 시험관에 넣습니다. 질 물질은 후방 fornix에서 얻습니다. 음경의 머리에서 - 관상 동맥 고랑 부위에서.

시험관에 넣은 루프나 면봉을 사용하여 외이도의 물질을 채취합니다.

실험실에 접수된 물질은 실온에서 보관할 경우 수집 후 1시간 이내에 검사하고, 4°C 온도의 냉장고에 보관할 경우 3시간 이내에 검사합니다.

진균 검사용 혈액은 5~10ml 양의 정맥에서 채취하여 즉시 액체 영양배지 또는 동량의 구연산나트륨이 담긴 플라스크에 첨가됩니다.

진균에 대한 생검 재료를 검사해야 하는 경우 멸균 페트리 접시에 넣고 현미경 검사, 영양 배지 배양 및 조직학적 준비 준비에 사용됩니다.

현미경 검사.

곰팡이에 대한 병리학적 물질의 현미경 검사는 천연 및 염색된 제제에서 수행됩니다. 염색되지 않은 제제를 준비하려면 결과물을 메스나 해부 바늘을 사용하여 분쇄하고 유리 슬라이드 중앙에 놓습니다. 곰팡이의 성분을 보다 명확하게 식별하기 위해 물질을 정화(침연)합니다. 이를 위해 그들은 표피 비늘, 점액, 고름을 용해하고 모발 색소를 밝게 하여 버섯을 연구에 사용할 수 있게 만드는 다양한 물질, 가장 흔히 가성 알칼리(KOH, NaOH)의 도움을 받습니다.

일부 실험실에서는 15-30% KOH 용액을 사용하여 현미경 검사를 위한 준비물을 정화하고 여기에 Parker의 5-10% 상용 진한 파란색 잉크(Parker's SuperchromeBlue-BlackInk)를 첨가합니다. 이 염색을 통해 균사와 포자가 칠해집니다. 파란색.

진균증을 진단하기 위해 현미경, 균류학(문화적), 알레르기, 혈청학, 생물학적 및 조직학 연구 방법을 사용할 수 있습니다. 병인에 따라 연구 자료는 고름, 가래, 감염된 모발, 손톱, 피부 조각, 골수 천공, 림프절, 내장 기관, 혈액, 담즙, 대변, 조직 생검 등이 될 수 있습니다.

현미경 검사에는 천연(염색되지 않은) 도말과 염색된 도말의 현미경 검사가 포함됩니다. 천연 제제를 준비하려면 머리카락, 피부 긁힌 부분, 손톱을 10.30% KOH 또는 NaOH 용액에 넣어 정화합니다. 알칼리 처리된 물질을 글리세린 한 방울에 담긴 유리 슬라이드 위에 놓고 커버슬립으로 덮고 현미경으로 관찰하면(위상차 현미경 사용 가능) 곰팡이의 구조와 포자의 위치를 ​​연구할 수 있습니다. 그러나 곰팡이 종에 대한 최종 결론은 문화 연구 후에만 내려질 수 있습니다.

염색 도말에는 Gram, Ziehl, Nielsen 및 Romanovsky-Giemsa 방법이 가장 자주 사용됩니다. Sabouraud, Adamson 등의 방법은 피부사상균 염색에도 사용됩니다.

배양(균류학) 연구는 곰팡이의 순수한 배양물을 분리하고 식별하기 위해 수행됩니다. 고체 및 액체 영양 배지(Sabouraud, wort agar, Chapek 등)를 사용하십시오. 온도 조절기(22.28°С)에서의 배양은 길다(3.4주). 곰팡이의 순수 배양은 일련의 특성, 즉 집락의 모양, 색상, 농도, 현미경 사진(균사체의 특성, 포자의 위치, 분생포자경) 및 기타 특성으로 식별됩니다. 곰팡이 질병의 진단은 일반적으로 허용되는 방법에 따라 곰팡이 항원을 사용하여 수행되며 기타 전염병(RA, RP, RSK, RNGA, RIF 등)의 진단에도 사용됩니다.

알레르기 테스트는 적절한 알레르기 항원(세포 또는 세포막의 다당류 및 단백질 분획, 죽은 진균 세포 현탁액, 배양 여과액)을 피내 주사하여 일반적으로 허용되는 방법에 따라 수행할 수 있습니다. GNT를 확인하기 위해서는 조직 및 혈청 호염기구의 탈과립 테스트를 이용할 수 있으며, GNT를 확인하기 위해서는 식세포 이동 억제 및 림프구의 폭발 형질전환 반응을 이용할 수 있습니다.

생물학적 연구는 실험실 모델(생쥐, 쥐, 기니피그, 토끼, 개, 고양이)을 대상으로 수행됩니다. 진균증의 생물학적 모델은 병원체의 병원성을 식별하고, 순수 배양물을 분리하고, 새로운 항진균제를 연구하는 데 사용됩니다. 조직학적 검사를 통해 조직 내 곰팡이를 검출하고 곰팡이의 형태와 체내에서 발생하는 병리학적 과정의 특성을 연구할 수 있습니다.