Ifa je pozitívna na HIV. Analýza HIV pomocou ELISA: presnosť, spoľahlivosť

Vírus ľudskej imunodeficiencie je nebezpečné ochorenie, ktoré sa napriek úsiliu lekárskych špecialistov šíri vysokou rýchlosťou. Boju proti tejto chorobe sa na celom svete venuje veľká pozornosť. Ale zázračná vakcína proti AIDS sa ešte nenašla. V modernej medicíne existuje niekoľko metód na diagnostikovanie vírusu imunodeficiencie, ale najbežnejšou z nich je enzýmová imunoanalýza. HIV ELISA sa začala používať pred niekoľkými desaťročiami. Všetky tieto roky sa táto diagnostická metóda zdokonaľovala. A dnes je tiež považovaný za jeden z najpresnejších. Spoľahlivosť testu ELISA na HIV je vysoká. Je to deväťdesiatšesť až deväťdesiatosem percent. Medzera chyby pre falošne pozitívny alebo falošne negatívny výsledok je malá. Vďaka tomu je popularita takejto diagnostiky jasná. Ako sa HIV zisťuje testom ELISA, kde sa dá tento test urobiť a ako sa naň pripraviť?

Popis testu HIV ELISA

Test ELISA na HIV je zameraný na zistenie protilátok proti tomuto ochoreniu v krvi človeka. Akonáhle tento vírus vstúpi do ľudského tela, nezačne okamžite svoju aktívnu činnosť. V súlade s tým môže byť do určitého bodu nemožné ho identifikovať. Lekárski odborníci odporúčajú testovanie na vírus imunodeficiencie najskôr niekoľko týždňov po podozrení na infekciu.

ELISA zisťuje protilátky proti HIV s vysokou mierou pravdepodobnosti. Stojí za zmienku, že tento test dokáže odhaliť protilátky v krvnom sére. To určuje nielen ich prítomnosť. HIV krvný test ELISA tiež pomáha identifikovať celkové spektrum protilátok. Do určitej miery takéto informácie pomáhajú určiť čas, kedy došlo k infekcii, do týždňa. Je to potrebné nielen preto, aby infikovaná osoba mohla hádať, za akých okolností k infekcii došlo. Počet protilátok proti HIV v teste ELISA je informácia, ktorú potrebujú aj lekári. S jeho pomocou môžu následne monitorovať stav pacienta a s veľkou presnosťou určiť, ako sa bude vírus správať v nasledujúcich týždňoch či mesiacoch. Pacientovi, ktorý už bol diagnostikovaný, možno ponúknuť darovanie krvi pomocou testu ELISA na HIV. Tento postup je potrebný na stanovenie kvantitatívneho zloženia protilátok a predpísanie správneho režimu antiretrovírusovej terapie.

V modernej medicíne, najmä u nás, sa dnes na HIV používa ELISA 4. generácie. Táto analýza bola v priebehu rokov zdokonaľovaná a dnes je jej spoľahlivosť deväťdesiatšesť až deväťdesiatosem percent. Chyba je malá, ale je tam. Preto sú pre istotu aj pacienti s diagnózou stanovenou enzýmovou imunoanalýzou testovaní pomocou imunoblotu. Inými slovami, testovacie systémy ELISA 4. generácie na HIV zvyšujú pravdepodobnosť identifikácie ľudí bez diagnózy vírusu imunodeficiencie. V tomto prípade sa opätovná kontrola nevykoná. Ak enzýmový imunotest preukáže prítomnosť protilátok proti vírusu imunodeficiencie, pacienti sú odoslaní na iné typy testov.

Ako prebieha testovanie na HIV pomocou ELISA?

Krvný test ELISA na AIDS sa odoberá zo žily. Ako pri iných známych metódach výskumu na identifikáciu vírusu imunodeficiencie, krvné sérum sa používa ako biologický materiál pri testovaní enzýmovou imunodeficienciou. Pacient prichádza na rozbor nalačno. V tomto smere neexistujú žiadne špeciálne obmedzenia z hľadiska príjmu potravy a abstinencie od alkoholu. Avšak nadmerná konzumácia alkoholických nápojov pred testom môže nepriaznivo ovplyvniť výsledky. Každý by o tom mal vedieť.

Protilátky proti HIV sa detegujú pomocou ELISA v niekoľkých fázach. Okrem biologického materiálu pacienta, v tomto prípade je to venózna krv, takýto postup vyžaduje umelé sérum s proteínom vírusu imunodeficiencie a pevný základ. Ten používa špeciálnu tabletu, ktorá môže byť vyrobená z polystyrénu alebo iných stredne poréznych materiálov. Štúdium vzoriek krvi v teste ELISA na HIV/AIDS začína spojením krvi pacienta s proteínom, ktorý obsahuje vírus. Potom laborant pozoruje reakciu medzi krvným sérom pacienta a bunkami choroby. Testovaný materiál sa niekoľkokrát premyje špeciálnymi enzýmami. Ak je reakcia pretrvávajúca a začína sa tvorba protilátok, znamená to, že telo pacienta má vírus imunodeficiencie. Na základe enzýmového imunotestu na HIV však lekári nerobia konečné závery. Na tento účel sa používajú ďalšie diagnostické metódy.

Stojí za zmienku, že HIV ELISA 3. generácie sa používa dodnes. Od testovacích systémov štvrtej generácie sa mierne líši účinnejšími enzýmami. Táto analýza je však lacnejšia, takže sa najčastejšie používa na verejných klinikách.

Test HIV ELISA: načasovanie testovania

Špecializované diagnostické laboratóriá HIV ELISA sú dnes dostupné vo všetkých veľkých mestách. Veľké laboratóriá špecializujúce sa na rôzne testy vykonávajú aj testovanie pomocou enzýmového imunotestovania. Stojí za zmienku, že dnes ľudia žijúci v malých mestách majú možnosť absolvovať test ELISA na HIV za mesiac (spoľahlivosť výsledku do značnej miery závisí od obdobia testovania) alebo dlhšie po podozrení na infekciu. A kvôli tomu nemusia dochádzať do regionálnych centier. Testy na vírus imunodeficiencie sa vykonávajú vo všetkých ambulanciách a dokonca aj v niektorých vidieckych a mestských ambulanciách. Pracovníci malých zdravotníckych zariadení však následne posielajú vzorky krvného séra do špecializovaných laboratórií. Test ELISA na HIV sa v oboch prípadoch nebude líšiť vo výsledkoch. Jedinou nevýhodou „štartových“ testov je dlhšia doba ich pripravenosti. Inými slovami, obyvatelia megacities sa dozvedia výsledky testu nasledujúci deň alebo dokonca v ten istý deň. Tí, ktorí sa testujú v malých mestách, niekedy čakajú na výsledky ELISA jeden až niekoľko týždňov.

HIV ELISA za mesiac, dva alebo niekoľko týždňov: kedy sa testovať?

Hlavnou chybou, ktorú ľudia robia, keď chcú byť testovaní na prítomnosť vírusu imunodeficiencie v krvi, je, že sa testujú príliš skoro po podozrení na infekciu. Lekárski odborníci odporúčajú tento typ kontroly vykonať najmenej o tri týždne neskôr. Ukáže ELISA na HIV vždy výsledky za 4-6 týždňov alebo nie? Táto otázka je často kladená na lekárov. Nikto nemá právo odpovedať kladne a vyhlásiť, že ELISA na HIV za 5 týždňov, 6 alebo za mesiac ukáže sto percent. Všetko závisí od individuálnych charakteristík tela. Faktom je, že akonáhle sa bunky vírusu dostanú do krvi alebo iného prostredia, nezačnú okamžite aktívne konať. Trvá im určitý čas, kým sa začnú množiť v ľudskom tele, ako aj začnú ničiť leukocyty. ELISA na infekciu HIV počas obdobia, keď sa vírusové bunky nerozšírili v krvi v dostatočnom množstve, je neúčinná. Preto je zbytočné vykonávať takúto analýzu deň alebo dokonca týždeň po údajnej infekcii. Toto obdobie lekári nazývajú séronegatívne okno. Za zmienku stojí jedna z jeho charakteristických vlastností. Počas tohto obdobia je nemožné určiť prítomnosť vírusu imunodeficiencie v tele. Ale osoba, ktorej choroba je stále nezistená, je už potenciálne nebezpečná pre ostatných, pretože môže šíriť vírus.

Krvný test ELISA na HIV odhalí prítomnosť tohto ochorenia za 3-4 mesiace. V niektorých prípadoch sa človek v tomto období prvýkrát dozvie o hroznej diagnóze. Závisí to od niektorých charakteristík tela. To, či IFA určí HIV po 2 mesiacoch, mesiaci alebo niekoľkých týždňoch, je do značnej miery ovplyvnené koncentráciou vírusu, ktorý sa dostal do tela. Ak hovoríme o transfúzii krvi alebo nechránenom kontakte, potom bude jeho koncentrácia zjavne vysoká. Preto pomocou ELISA bude možné stanoviť protilátky proti HIV nie za 5 mesiacov, ale oveľa skôr. V zriedkavých prípadoch sa ľudia môžu dozvedieť o hroznej diagnóze oveľa neskôr. Vyskytli sa prípady, keď test HIV ELISA ukázal pozitívny výsledok až po roku. To by sa dalo určiť koncentráciou vírusových buniek. Našťastie sú takéto prípady veľmi zriedkavé. Tvoria len 0,5 % všetkých infikovaných ľudí.

Kde môžem získať test ELISA na HIV 1, 2?

Otázka, kde vykonať test ELISA na HIV 3 alebo 8-10 týždňov po údajnej infekcii, je pre mnohých zaujímavá. U nás sa to dá urobiť v ambulancii v mieste vášho bydliska alebo prechodného bydliska. Postup je bezplatný. Ak si chcete urobiť test HIV ELISA po 12 týždňoch alebo skôr, nemusíte absolvovať odporúčanie od praktického lekára alebo virológa. Ak si želáte test na túto chorobu, mali by ste o tom informovať recepčnú. Mali by ste mať pri sebe pas a povinné zdravotné poistenie. Mimochodom, nedávno môžete overenie podstúpiť anonymne. Takéto testovanie na vírus imunodeficiencie je tiež bezplatné. Pacientovi je pridelené individuálne číslo, podľa ktorého môže zistiť výsledky po ich pripravenosti.

Vďaka rozvoju modernej medicíny sa už lekár pri určovaní diagnózy nemusí zameriavať na nepriame prejavy chorôb ani robiť viacstupňové laboratórne vyšetrenia. Stačí vykonať jednu analýzu, ktorá potvrdí alebo vyvráti údajnú počiatočnú diagnózu.

Táto metóda je enzýmová imunoanalýza (ELISA) - táto štúdia vám umožňuje zistiť špecifické protilátky a antigény charakteristické pre rôzne patológie, čo výrazne urýchľuje diagnostiku.

Analýza ELISA je laboratórny test (metóda), ktorý pomáha určiť prítomnosť alebo neprítomnosť určitých protilátok v tele na boj proti vírusu a ich množstvo.

Základom štúdie je prirodzený reakčný antigén (predmet škodlivý pre telo) - protilátka (bielkovina, ktorá ničí škodlivé predmety), vďaka čomu je možné zistiť prítomnosť rôznych vírusov a baktérií.

ELISA je prirodzená imunitná odpoveď organizmu – interakcia protilátky s príslušným antigénom. Takže počas ELISA sa antigény alebo protilátky pridávajú jeden po druhom do skúmavky s materiálom, potom sa stanoví koncentrácia výsledných komplexov antigén-protilátka.

Ak sa vytvoria zápalky, potom vzniknú imunitné komplexy, potom dôjde k enzymatickej reakcii farbiva s kombinovanou molekulou. Práve vďaka zmene farby pri enzymatickej indikácii sa ochorenie identifikuje po vyšetrení hladiny stanovovanej zlúčeniny.

Typy imunoglobulínov

Ľudské imunoglobulíny sa rozlišujú do niekoľkých tried, ktoré sa navzájom líšia vlastnosťami, štruktúrou a antigénnymi charakteristikami ťažkých reťazcov (H reťazec). Všetky cicavce, vrátane ľudí, majú päť H-reťazcov, ktoré určujú príslušnosť imunoglobulínov do zodpovedajúcej triedy: G, M, A, D, E.

Každá trieda sa od seba líši biologickými vlastnosťami a schopnosťou viazať antigény a rýchlosťou a silou spojenia s molekulou.

Funkcie každého imunoglobulínu (Ig) sú rôzne:

Množstvo v tele Funkcie Polčas rozpadu (dni) Význam
G70% Vytvorte pasívnu imunitu u novorodenca;

nevyhnutné pre imunitnú odpoveď

zlepšenie fagocytózy,

21-24 poskytujú dlhodobú humorálnu imunitu proti infekčným chorobám
M5-10% potrebné na aktiváciu fagocytózy,

schopný viazať 5 molekúl antigénu,

5 Poskytuje primárnu imunitnú odpoveď
A10-15 Neutralizuje toxíny a vírusy

potrebné na vytvorenie včasnej imunity

K vzniku imunoglobulínov dochádza pozdĺž zvláštneho „reťazca“ - lgM lgG, takto telo reaguje na objavenie sa antigénu v tele. Pri laboratórnej diagnostike sa hodnotí koncentrácia troch hlavných imunoglobulínov – G, M, A.

Indikácie pre testovanie imunoglobulínov

Analýza ELISA sa každým rokom stáva čoraz populárnejšou.

Takáto štúdia urýchľuje diagnostiku, čo je veľmi dôležité pri liečbe patológií, ako sú:

  • vírusová hepatitída;
  • infekcia HIV;
  • cytomegalovírus,
  • vírus Epstein-Barr,
  • herpes vírus,
  • rubeola,
  • tuberkulóza,
  • salmonelóza,
  • úplavica,
  • kliešťová encefalitída,
  • baktérie helicobacter,
  • borelióza,
  • tetanus,
  • syfilis,
  • záškrt,
  • leptospiróza,
  • chlamýdie,
  • ureaplazmóza,
  • mykoplazmóza,
  • čierny kašeľ.
  • plochých červov
  • škrkavky
  • histolické améby,
  • pečeňové tremády,
  • Giardia,
  • toxoplazma,
  • trichinella,
  • náhoda,
  • cestodózy.

ELISA je jedinečný marker autoimunitných patológií a malígnych novotvarov.

Príprava na test

Pri príprave na štúdium by ste mali dodržiavať nasledujúce pravidlá:

Lekári tiež odporúčajú dodržiavať špeciálnu diétu - vylúčiť mastné a vyprážané jedlá a ak sa test robí na hepatitídu, potom je potrebné nejesť žiadnu oranžovú zeleninu a najmä citrusové plody. Krv by ste mali darovať ráno nalačno.

Falošne pozitívna analýza sa vyskytuje v dôsledku nesplnených odporúčaní, najmä konzumácie tučných jedál, čo vedie k príliš vysokej koncentrácii triglyceridov v plazme, čo spôsobuje zníženie vodivosti ELISA.

Postup odberu vzoriek

Ako testovací materiál možno použiť plnú krv, sérum alebo plazmu z venóznej krvi. Materiál sa odoberá, zvyčajne z ulnárnej žily, pomocou jednorazovej ihly a vákuovej trubice je potrebných 5-10 ml krvi.

Na zabezpečenie presnosti výsledku je dôležité dodržať správnu techniku ​​odberu – punkciu samotnej cievy a okolitých tkanív je potrebné vykonať jednou manipuláciou, preto sa používa krátka ihla s veľkým priemerom, aby protiľahlá stena žily nie je poranená a červené krvinky nie sú poškodené.

Na udržanie integrity červených krviniek je tiež potrebné, aby krv stekala po stenách skúmavky.

Počas skladovania materiálu sa treba vyhnúť prípadnej ionizácii, materiál by sa nemal dostať do kontaktu so zvyškovými dezinfekčnými prostriedkami, preto sa používa iba jednorazová plastová tuba, označená menom pacienta, dátumom a časom dodania materiálu.

Ak je potrebné krátkodobé skladovanie testovaného materiálu, potom sa používa chladiaca komora s teplotou 2-4 o C, ak je potrebné dlhšie skladovanie, potom sa materiál zmrazuje pri teplote -20 o C.

Ako prebieha analýza

Po príprave študovaného materiálu začne laboratórny asistent potrebné manipulácie. Na tento účel sa používa množstvo špeciálnych sád antigénov, ktoré majú schopnosť vyvolať reakciu tela na dráždivú látku, sú to rôzne infekcie, hormóny a alergény.

Očakávaná reakcia antigén-protilátka vyzerá asi takto:

  • Primárnou reakciou je detegovaný Ig (Ab) a purifikovaný antigén patogénu (Ag).
  • Na detekciu výsledných imunitných komplexov nasleduje nová imunologická reakcia, kde antigénom je naviazaný špecifický Ig a protilátkou proti nemu je konjugát Ig (Ab).
  • Posledným stupňom je enzymatická reakcia spolu s molekulou katalyzátora konjugátu. Substrátom je chromogén (nezafarbený), ktorý sa počas reakcie zafarbí a intenzita zafarbenia je určená kvantitatívnym indikátorom imunoglobulínu vo vzorke.

V súčasnosti bolo vyvinutých veľa rôznych možností ELISA, ale neexistuje ich jasná klasifikácia. Metódy sa zvyčajne zvažujú na základe ich rozdelenia na hetero- a homogénne - všetky fázy analýzy prebiehajú s použitím pevnej fázy alebo iba s použitím roztoku.

Moderné klinické diagnostické laboratóriá zvyčajne používajú heterogénnu (tuhú fázu) ELISA, pri ktorej tuhá fáza znamená absorpciu antigénov alebo protilátok na pevnom povrchu špeciálnych jamiek umiestnených na polystyrénovej mikroplatničke metóda sa delí na priamu a nepriamu ELISA;

Pri priamom teste ELISA sa zavedený antigén fixuje počas inkubačného procesu na povrchu prázdnych jamiek, na tento účel sa testovaný materiál umiestni do čistých jamiek na 20-25 minút, čo je potrebné, aby sa antigén prichytil na ich povrch. Potom sa pridá požadovaná protilátka. Ďalej materiál zostáva určitý čas na vytvorenie väzieb.

Protilátky sa vždy pridávajú v nadbytku, takže aj keď sú prítomné, vo vzorke zostávajú nenaviazané antigény, a ak tam nie sú žiadne antigény, potom nebudú žiadne spojenia. Na odstránenie „extra“ protilátok sa vykoná dekantácia, po ktorej zostanú len tie protilátky, ktoré vytvorili väzbu s antigénom.

Nasleduje enzymatická reakcia – pridanie roztoku s enzýmom do jamiek, po ktorom sa výsledné väzby zafarbia.

Pri nepriamej metóde ELISA sa používajú protilátky, ktoré sú vopred kombinované so substrátom enzymatickej reakcie; v tomto prípade dochádza k spojeniu protilátok s antigénom počas inkubačného procesu, po ktorom dochádza k mobilizácii väzieb na povrchu jamiek a následne pridaný konjugát a substrát-chromogénne činidlo zafarbia reakciu.

Hlavným rozdielom medzi nepriamou a priamou metódou teda nie je adhézia materiálu k povrchu čistých jamiek, ale väzba na antigén imobilizovaný na platni.

Reakcia sa zastaví pomocou špecializovaných zariadení, potom sa každá jamka podrobí fotometrickému procesu, po ktorom nasleduje porovnávací opis výsledku získaného s predtým vykonanými kontrolnými vzorkami.

Ak sa vo vzorke zistí zvýšenie optickej hustoty, potom je vo výsledku testu nadhodnotená aj koncentrácia špecifických protilátok.

Kedy bude analýza hotová?

Štúdia netrvá veľa času od odberu krvi po získanie výsledku, v závislosti od diagnostických opatrení trvá 1 až 10 dní.

Výsledky testov a ich interpretácia

Vo formulári diagnostického výsledku, ktorý pacient dostane, je uvedený negatívny alebo pozitívny výsledok pre určité triedy imunoglobulínov a je tiež uvedený kvantitatívny indikátor rôznych tried protilátok.

Možné sú rôzne interpretácie výsledkov:

  1. IgM (+) (IgA, IgG neboli stanovené) – proces hojenia;
  2. IgM (-);IgG (+), IgA (+) – chronická infekčná patológia;
  3. IgM, IgG, IgA (všetky s významom) – nedostatok ochranných mechanizmov voči infekciám;
  4. IgG (+/-) a IgA (+/-), IgM (+) – akútny proces;
  5. IgM (-), IgA (-), IgG (+) – postinfekčná imunita;
  6. IgM, IgG, IgA (+) – chronická patológia v akútnom štádiu.

Napríklad, ak sa zistili IgG a IgM, pacient môže mať jednu z nasledujúcich chorôb:

  • vírusová hepatitída;
  • cytomegalovírus;
  • herpes;
  • kiahne;
  • chlamýdie;
  • stafylokoková alebo streptokoková infekcia.

Na hormonálne štúdie sa často predpisuje enzýmová imunoanalýza, normy sú uvedené v tabuľke:

Názov hormónu Poschodie Norm
1 tyreoglobulínm/fAž 70 IU/ml
2 tyroxínum/f64-146 nmol/l
3 trijódtyronínm/f1,8-2,8 nmol/l
4 Voľný tyroxínm/f11-25 pmol/l
5 Voľný trijódritonínm/f4,49-9,3 pmol/l
6 Testosterón, dehydrotestosterónA0,5-10 mU/l

Analýza ELISA je diagnostický test, ktorý vám umožňuje posúdiť pravdepodobnosť vzniku onkologických patológií. Interpretáciu výsledkov však vykonáva iba ošetrujúci lekár.

Význam výsledkov testov

ELISA je vhodná na detekciu rôznych foriem pohlavne prenosných infekcií vrátane syfilisu a často sa používa na skríning tehotných žien.

Vďaka tejto štúdii môžete zistiť, ako dlho sa infekcia vyskytla a v akom štádiu bola choroba v čase štúdie:

  • imunoglobulíny M indikujú trvanie ochorenia;
  • IgA - pacient sa nakazil pred viac ako 30 dňami;
  • IgG sa deteguje na „vrchole“ chorôb alebo v momente, keď sa liečba nedávno skončila.

Počas štúdie zostávajú jamky na doštičke s negatívnym indikátorom bezfarebné a pozitívne sú jasne žlté. Ak sa farba pozitívnych jamiek nezhoduje s farbou kontroly, potom sa výsledok považuje za sporný a je potrebný opakovaný test.

Enzýmová imunoanalýza je prvým krokom v diagnostike HIV. Analýza nemôže byť vykonaná ihneď po podozrení na infekciu, je potrebné počkať do konca inkubačnej doby (od 14 dní do 6 mesiacov).

Počas rozboru sa stanovujú protilátky proti HIV-1 a HIV-2, hľadajú sa protilátky triedy G, ktoré sa zvyčajne objavia v neskoršom štádiu a protilátky triedy A a M sa zisťujú v skorých štádiách (počas inkubačnej doby).

  • ak prvý test poskytne pozitívny výsledok, potom krv znova skontroluje iný laboratórny technik;
  • opakovaný pozitívny výsledok predpokladá opätovné získanie materiálu,
  • Ak sa výsledok opakuje, pacientovi je predpísaný imunoblot.

Konečný záver o prítomnosti infekcie HIV sa vydáva až po výsledku imunoblotovania.

ELISA sa tiež používa ako diagnostický test na tuberkulózu, ale aj keď má pacient protilátky proti tejto patológii, nie vždy to potvrdí prítomnosť tuberkulózy, takže ELISA sa často používa ako objasňujúca technika alebo na diagnostiku latentnej extrapulmonálnej formy.

IgG - chronické štádium invázie

IgA – infekcia sa vyskytla pred viac ako 30 dňami
IgG – invázia je v akútnej fáze
IgG – potvrdzuje diagnózu a ukazuje účinnosť terapie

Výhody a nevýhody analýzy

ELISA má mnoho výhod, čo vysvetľuje jej popularitu medzi lekármi a pacientmi, sú to:

  • vysoká presnosť výsledkov,
  • priaznivá cena,
  • rýchly výsledok,
  • identifikácia štádia ochorenia,
  • kontrola choroby v priebehu času.

Spolu s výhodami však existuje aj nevýhoda - v zriedkavých prípadoch môže byť analýza falošne pozitívna alebo falošne negatívna.

Prečo môže byť výsledok nespoľahlivý

V dôsledku toho sa môžu vyskytnúť chyby v dôsledku technických priestupkov; analýza môže byť tiež nespoľahlivá u ľudí s určitými chronickými ochoreniami (reumatoidný faktor), ktoré sa vyznačujú tvorbou špecifických protilátok.

Na konečný výsledok má vplyv aj užívanie liekov a metabolické poruchy pacienta. Z týchto dôvodov si pozitívny výsledok na HIV a onkopatológiu vyžaduje opakované odbery.

Náklady na štúdiu

Cena ELISA sa líši v závislosti od smeru diagnózy (RUB):

  • hepatitída 250 - 900;
  • vírusy – 250 -1000;
  • HIV – 250-350;
  • helmintické napadnutia – 280 – 900;
  • syfilis -150-250;
  • plesňové infekcie 400-500.

Formát článku: Ložinský Oleg

Video o analýze ELISA

Ako sa vykonáva analýza ELISA:

V modernom svete sa veľa pozornosti venuje diagnostike vírusu imunodeficiencie. Koniec koncov, čím skôr sa človek dozvie o hroznej diagnóze, tým skôr sa môže obrátiť na špecialistov o odbornú pomoc. V súlade s tým možno liečbu tohto ochorenia začať skôr. Včasné použitie špeciálnej antiretrovírusovej liečby môže výrazne predĺžiť životnosť infikovaných vírusom imunodeficiencie. Je dôležité poznamenať, že v modernej diagnostike existuje rozdelenie na primárne a sekundárne. Primárne zahŕňa testovanie pacienta pomocou enzýmového imunotestu. V prípade potreby sa znova skontroluje výsledok testu HIV ELISA. Ako a prečo sa to deje a čo môže byť výsledkom primárneho výskumu?

HIV ELISA negatívny, pozitívny alebo pochybný: podmienky pre diagnostiku a ďalšie kroky pacienta

Pozitívna HIV ELISA nemusí vždy znamenať, že je osoba infikovaná. Ale skôr ako odpoviete na otázku, prečo sa to deje, mali by ste zistiť, aký môže byť výsledok enzýmového imunotestu. Spoľahlivosť HIV ELISA je približne deväťdesiatosem až deväťdesiatdeväť percent. Táto štúdia má malú chybovosť. Počas analýzy sa pacientovi odoberie krv zo žily. Štúdia sa uskutočňuje na prázdny žalúdok. Ďalej sa biologický materiál testuje v laboratóriu pomocou špeciálnych činidiel a enzýmov, aby sa zistilo, či jeho zložky reagujú s umelými protilátkami vírusu imunodeficiencie. Napriek tomu, že presnosť HIV ELISA je vysoká, lekári a vedci, ktorí sa podieľajú na výskume najstrašnejšej choroby dvadsiateho prvého storočia, veria, že s jej pomocou je možné odstrániť burinu iba zdravých ľudí. Teda tých, ktorým HIV ELISA neukázala pozitívny výsledok.

Aké by teda mohli byť výsledky enzýmového imunotestu a čo by mal pacient urobiť, keď ich dostane:

HIV ELISA je pozitívny, imunoblot je pozitívny alebo negatívny: čo naznačujú výsledky testovania dvoma metódami?

Spoľahlivosť HIV ELISA 4. generácie je vysoká. Pred stanovením diagnózy je však pacient poslaný aj na imunoblotting. Je to potrebné, aby sa zistilo, či protilátky, ktoré boli identifikované enzýmovou imunoanalýzou, vstupujú do stabilnej reakcie s antigénmi.

Ak je HIV ELISA pozitívny a imunoblot negatívny, infekcia nebola potvrdená. V tomto prípade je pacient odoslaný na ďalšiu diagnostiku, aby sa zistilo, prečo sa v tele vytvárajú protilátky a či sa vôbec tvoria.

Ak je imunoblotting pozitívny a rovnaký je aj enzýmový imunotest, potom je pacientovi diagnostikovaný vírus imunodeficiencie. Potom je odoslaný k terapeutovi alebo imunológovi.

Ak je test HIV ELISA negatívny po 6 týždňoch, ale stále existujú pochybnosti, pacient bude odoslaný na imunobloting. Presnosť týchto štúdií je rovnaká. Ako enzýmová imunoanalýza, tak imunoblotting majú chyby.

Ak sa test ELISA na HIV, ktorého presnosť je vysoká, ukáže ako negatívny a imunoblotovací test je pozitívny, potom bude pacientovi tiež stanovená hrozná diagnóza.

Včasná diagnostika infekcie HIV sa stáva mimoriadne dôležitým opatrením, pretože včasné začatie liečby môže do značnej miery určiť ďalší vývoj ochorenia a predĺžiť život pacienta. V posledných rokoch došlo k výraznému pokroku v identifikácii tohto hrozného ochorenia: staršie testovacie systémy sa nahrádzajú vyspelejšími, vyšetrovacie metódy sú dostupnejšie a ich presnosť sa výrazne zvyšuje.

V tomto článku budeme hovoriť o moderných metódach diagnostiky infekcie HIV, ktorých znalosť je užitočná na včasnú liečbu tohto problému a udržanie normálnej kvality života pacienta.

Metódy diagnostiky HIV

V Rusku sa na diagnostiku infekcie HIV vykonáva štandardný postup, ktorý zahŕňa dve úrovne:

  • testovací systém ELISA (skríningová analýza);
  • imunoblotovanie (IB).

Na diagnostiku možno použiť aj iné metódy:

  • rýchle testy.

Testovacie systémy ELISA

V prvej fáze diagnostiky sa na zistenie infekcie HIV používa skríningový test (ELISA), ktorý je založený na proteínoch HIV vytvorených v laboratóriách, ktoré zachytávajú špecifické protilátky produkované v tele ako odpoveď na infekciu. Po ich interakcii s činidlami (enzýmami) testovacieho systému sa farba indikátora zmení. Ďalej sú tieto farebné zmeny spracované pomocou špeciálneho zariadenia, ktoré určuje výsledok vykonanej analýzy.

Takéto testy ELISA môžu ukázať výsledky v priebehu niekoľkých týždňov po zavedení infekcie HIV. Tento test neurčuje prítomnosť vírusu, ale zisťuje tvorbu protilátok proti nemu. Niekedy sa v ľudskom tele produkcia protilátok proti HIV začína po 2 týždňoch po infekcii, ale u väčšiny ľudí sa vytvárajú neskôr, po 3-6 týždňoch.

Existujú štyri generácie testov ELISA s rôznou citlivosťou. V posledných rokoch sa čoraz viac používajú testovacie systémy tretej a štvrtej generácie, ktoré sú založené na syntetických peptidoch alebo rekombinantných proteínoch a majú väčšiu špecifickosť a presnosť. Môžu sa použiť na diagnostiku infekcie HIV, sledovanie prevalencie HIV a zaistenie bezpečnosti pri testovaní darovanej krvi. Presnosť testovacích systémov ELISA generácie III a IV je 93-99% (testy vyrobené v západnej Európe sú citlivejšie - 99%).

Na vykonanie testu ELISA sa pacientovi odoberie 5 ml krvi zo žily. Medzi posledným jedlom a rozborom musí uplynúť aspoň 8 hodín (zvyčajne sa robí ráno nalačno). Takýto test sa odporúča urobiť najskôr 3 týždne po podozrení na infekciu (napríklad po nechránenom pohlavnom styku s novým sexuálnym partnerom).

Výsledky testu ELISA sa získajú za 2-10 dní:

  • negatívny výsledok: naznačuje neprítomnosť infekcie HIV a nevyžaduje kontaktovanie špecialistu;
  • falošne negatívny výsledok: možno pozorovať v počiatočných štádiách infekcie (do 3 týždňov), v neskorších štádiách AIDS so silným potlačením imunitného systému a pri nesprávnej príprave krvi;
  • falošne pozitívny výsledok: možno pozorovať pri niektorých ochoreniach a pri nesprávnej príprave krvi;
  • pozitívny výsledok: indikuje infekciu HIV, vyžaduje vykonanie IB a kontaktovanie pacienta s odborníkom v centre AIDS.

Prečo môže test ELISA poskytnúť falošne pozitívne výsledky?

Falošne pozitívne výsledky testu HIV ELISA sa môžu vyskytnúť v dôsledku nesprávneho spracovania krvi alebo u pacientov s nasledujúcimi stavmi a chorobami:

  • mnohopočetný myelóm;
  • infekčné choroby spôsobené vírusom Epstein-Barrovej;
  • stav po ;
  • autoimunitné ochorenia;
  • na pozadí tehotenstva;
  • stav po očkovaní.

Z vyššie opísaných dôvodov môžu byť v krvi prítomné nešpecifické skrížene reagujúce protilátky, ktorých tvorba nebola vyvolaná infekciou HIV.

V posledných rokoch sa frekvencia falošne pozitívnych výsledkov výrazne znížila v dôsledku používania testovacích systémov generácie III a IV, ktoré obsahujú citlivejšie peptidové a rekombinantné proteíny (syntetizujú sa pomocou genetického inžinierstva in vitro). Po zavedení takýchto testov ELISA sa frekvencia falošne pozitívnych výsledkov výrazne znížila a je asi 0,02-0,5%.

Falošne pozitívny výsledok neznamená, že osoba je infikovaná vírusom HIV. V takýchto prípadoch WHO odporúča vykonať ďalší test ELISA (nevyhnutne IV generácie).

Krv pacienta je odoslaná do referenčného alebo arbitrážneho laboratória s označením „opakovať“ a testovaná pomocou testovacieho systému IV generácie ELISA. Ak je výsledok novej analýzy negatívny, potom sa prvý výsledok považuje za chybný (falošne pozitívny) a IS sa nevykoná. Ak je výsledok počas druhého testu pozitívny alebo pochybný, pacient musí po 4-6 týždňoch podstúpiť IB na potvrdenie alebo vyvrátenie infekcie HIV.

Imunitný blotting

Definitívnu diagnózu infekcie HIV možno urobiť až po získaní pozitívneho výsledku imunoblotovania (IB). Na jeho uskutočnenie sa používa nitrocelulózový pásik, na ktorý sú aplikované vírusové proteíny.

Odber krvi na IB sa vykonáva zo žily. Ďalej prechádza špeciálnym spracovaním a proteíny obsiahnuté v jeho sére sú oddelené v špeciálnom géli podľa ich náboja a molekulovej hmotnosti (manipulácia sa vykonáva pomocou špeciálneho zariadenia pod vplyvom elektrického poľa). Na gél z krvného séra sa nanesie nitrocelulózový pásik a v špeciálnej komore sa vykoná blotovanie („blotovanie“). Prúžok sa spracuje a ak použité materiály obsahujú protilátky proti HIV, naviažu sa na antigénne pásy na IB a objavia sa ako čiary.

IB sa považuje za pozitívny, ak:

  • podľa amerických kritérií CDC - na pásiku sú dva alebo tri riadky gp41, p24, gp120/gp160;
  • podľa kritérií americkej FDA má prúžok dve línie p24, p31 a líniu gp41 alebo gp120/gp160.

V 99,9% prípadov pozitívny výsledok IB naznačuje infekciu HIV.

Ak nie sú žiadne čiary, IB je záporná.

Pri identifikácii línií s gr160, gr120 a gr41 je IB pochybná. Tento výsledok sa môže vyskytnúť, keď:

  • onkologické ochorenia;
  • tehotenstvo;
  • časté transfúzie krvi.

V takýchto prípadoch sa odporúča zopakovať test pomocou súpravy od inej spoločnosti. Ak po ďalšej IB zostane výsledok pochybný, potom je potrebné pozorovanie počas šiestich mesiacov (IB sa vykonáva každé 3 mesiace).

Polymerická reťazová reakcia

Test PCR dokáže odhaliť RNA vírusu. Jeho citlivosť je pomerne vysoká a umožňuje odhaliť infekciu HIV do 10 dní po infekcii. V niektorých prípadoch môže PCR poskytnúť falošne pozitívne výsledky, pretože jej vysoká citlivosť môže reagovať aj na protilátky proti iným infekciám.

Táto diagnostická technika je drahá a vyžaduje špeciálne vybavenie a vysokokvalifikovaných odborníkov. Tieto dôvody neumožňujú vykonávať hromadné testovanie populácie.

PCR sa používa v nasledujúcich prípadoch:

  • na detekciu HIV u novorodencov narodených matkám infikovaným HIV;
  • na zistenie HIV v „období okna“ alebo v prípade pochybnej IB;
  • kontrolovať koncentráciu HIV v krvi;
  • na štúdium darcovskej krvi.

Samotný test PCR nestanovuje diagnózu HIV, ale vykonáva sa ako dodatočná diagnostická metóda na riešenie kontroverzných situácií.


Expresné metódy

Jednou z noviniek v diagnostike HIV sú rýchle testy, ktorých výsledky je možné posúdiť do 10-15 minút. Najefektívnejšie a najpresnejšie výsledky sa získajú pomocou imunochromatografických testov založených na princípe kapilárneho toku. Sú to špeciálne prúžky, na ktoré sa nanáša krv alebo iné testovacie tekutiny (sliny, moč). Ak sú prítomné protilátky proti HIV, po 10-15 minútach sa na teste objaví farebný a kontrolný prúžok - pozitívny výsledok. Ak je výsledok negatívny, zobrazí sa iba kontrolný prúžok.

Rovnako ako pri testoch ELISA, výsledky rýchlych testov musia byť potvrdené analýzou IB. Až potom je možné diagnostikovať infekciu HIV.

K dispozícii sú súpravy na rýchle domáce testovanie. Test OraSure Technologies1 (USA) je schválený FDA, je voľne predajný a možno ho použiť na detekciu HIV. Po teste, ak je výsledok pozitívny, sa pacientovi odporúča podstúpiť vyšetrenie v špecializovanom centre na potvrdenie diagnózy.

Ostatné testy na domáce použitie zatiaľ FDA neschválila a ich výsledky môžu byť veľmi otázne.

Napriek skutočnosti, že rýchle testy majú nižšiu presnosť ako testy ELISA IV generácie, sú široko používané na dodatočné testovanie populácie.

Testy na zistenie infekcie HIV možno vykonať na ktorejkoľvek klinike, centrálnej okresnej nemocnici alebo špecializovaných AIDS centrách. Na území Ruska sa vykonávajú úplne dôverne alebo anonymne. Každý pacient môže očakávať lekársku alebo psychologickú konzultáciu pred alebo po teste. Za testy na HIV budete musieť platiť iba v komerčných zdravotníckych zariadeniach, zatiaľ čo na verejných klinikách a v nemocniciach sa vykonávajú bezplatne.

Prečítajte si o spôsoboch, akými sa môžete nakaziť vírusom HIV a aké mýty o možnostiach nakazenia existujú.

Test HIV 4. generácie vám umožňuje určiť prítomnosť protilátok proti vírusu ľudskej imunodeficiencie. Bolo vyvinutých niekoľko typov testovacích systémov, ktoré sa používajú na poskytovanie vysokých výsledkov v skorých štádiách infekcie.

  1. Systémy 1. a 2. generácie majú obmedzené schopnosti a stanovujú iba prítomnosť protilátok proti HIV. Metóda ELISA sa vzťahuje na nepriame určenie choroby, pretože nezisťuje prítomnosť samotného vírusu AIDS.
  2. Druhá generácia testovacieho systému zisťuje protilátky proti HIV-1 a HIV-2. Hlavným bodom ELISA tretej generácie je schopnosť určiť Ig6 a IgM protilátky proti vírusu AIDS.
  3. HIV test 4. generácie sa vyznačuje schopnosťou detegovať nielen protilátky, ale aj antigén p24. Systémy ELISA využívajú pri svojej práci vírus ošetrený ultrazvukom.

Pacient, ktorý pravidelne absolvuje test na HIV, sa zaujíma o presnosť výsledkov testu. Test určuje prítomnosť antigénu a protilátky. Antigény sa detegujú 30 dní po stanovení RNA v krvi pomocou PCR.

Test HIV 4. generácie je informatívny pre lekára 60 dní po infekcii vírusom. Presnosť štúdie a špecifickosť diagnózy spočíva v počte negatívnych vzoriek určených testom.

Citlivosť testu je určená počtom pozitívnych vzoriek. U 100 ľudí infikovaných vírusom AIDS by pri rovnakom počte pozitívnych výsledkov bola citlivosť 100 %. Test 4. generácie je informatívny najmä vtedy, keď zistí negatívny výsledok a neminie ani jedného infikovaného pacienta.

Na skríning sa používa citlivý test a na stanovenie presnej diagnózy je potrebné použiť špecifické metódy. Test ELISA je klasifikovaný ako skríningová metóda: imunológ určuje infekciu HIV. Malo by sa pamätať na to, že žiadny test neposkytuje 100% záruku presnosti.

Rozdiely medzi štúdiami 3. a 4. generácie pre vírus ľudskej imunodeficiencie

Medzi týmito dvoma testovacími systémami sú určité rozdiely. Protilátky proti vírusu ľudskej imunodeficiencie sú detegované 3. systémom. Nemá vplyv na štúdium raného obdobia ochorenia, keď človek predstavuje potenciálne nebezpečenstvo pre partnera a môže infikovať iných ľudí. Testy 4. generácie sú pokročilejšie, pretože zisťujú antigény HIV v počiatočných štádiách infekcie vírusom. Existuje určitá súvislosť medzi testovaním PCR a testovaním 4. generácie: obe majú vysokú citlivosť na patogén v počiatočnom štádiu infekcie.

Na legislatívnej úrovni je povolené používanie testov 4. generácie alebo AGAT. Účinnosť štúdií 3. a 4. generácie sa určuje pomocou sérokonverzných panelov. Testovací systém 4 určuje množstvo HIV RNA. V mnohých prípadoch sa odhalí vysoký stupeň výsledkov. Indikátory vírusovej infekcie zodpovedajú rozsahu testovacieho systému 4.

Test 3. generácie má užší rozsah skúmania koncentrácie vírusu ako test 4. Najnovšia generácia systému sa ľahko používa, nevyžaduje zložitý softvér a spracuje 250 vzoriek v jednej sade.

Indikátory určené ELISA pre infekciu HIV

Presný dátum infekcie vírusom AIDS sa určuje po mnohých mesiacoch a rokoch od okamihu infekcie. Štúdiom viacerých rizikových skupín je možné dosiahnuť skoršie určenie času nástupu ochorenia. Aby ste neohrozili svoje zdravie a život, mali by ste sa pred začatím kontaktu oboznámiť so stavom svojho partnera.

Pacienti sa zaujímajú o otázku presného načasovania stanoveného testom ELISA 4. generácie, ktorý vylučuje infekciu HIV. Najväčšie množstvo protilátok sa tvorí 3-4 týždne od začiatku ochorenia a prudko klesá do 48. dňa od okamihu infekcie. Test 4. generácie môže indikovať jednotlivé protilátky v krvi po 7 dňoch. Najpriaznivejšie obdobie pre výskumný systém je 30 dní, ale oficiálne obdobie je 6-12 týždňov od vzniku zdravotného rizika.

Pacienti, ktorí mali nebezpečný kontakt, sú testovaní v 6. týždni, aby sa vylúčila infekcia HIV.

Pre prenos patogénu je najnebezpečnejšie obdobie medzi 3. a 6. týždňom, hoci k infekcii dochádza v ktorejkoľvek fáze vývoja vírusu AIDS.

ELISA je spoľahlivá na diagnostiku niekoľko rokov po infekcii. Porucha systému sa pozoruje u pacientov v terminálnej fáze ochorenia, ktorí majú jasný obraz o AIDS.

Podtypy identifikované testom ELISA a ich distribúcia

Presnosť testu je taká vysoká, že nie je možné neodhaliť vzácne podtypy vírusu AIDS. Skríningový testovací systém 4. generácie identifikuje podtypy skupín O a M. Skupiny P a N sa nachádzajú v jednoduchých číslach a môžu byť detekované systémom ELISA 4.

Moderný systém zisťuje protilátky proti vírusom HIV-2 a HIV-1. Zriedkavé podtypy AIDS a skupina N predstavujú 9 kópií. Podtyp P, objavený testom ELISA 4, sa vyskytuje v jedinej kópii. Test bol opakovane pozitívny a vyznačoval sa slabou imunitou. Vírus HIV-2 nebude neskôr izolovaný testom ELISA, pretože protilátky sa objavia v zornom poli štúdie.

Použitý test je lepší ako laboratórny test na zistenie falošne pozitívneho výsledku. Test 4. generácie zisťuje antigén HIV, ktorý je súčasťou vírusu, ktorý spôsobuje ochorenie. Obdobie, počas ktorého nie je možné zistiť patogén, je zanedbateľné a antigén HIV p24 je v krvi detegovaný oveľa skôr ako protilátky. Neskôr je proteín p24 posilnený produkciou protilátok.

Test 4. generácie sa označuje ako „p24“ alebo „antigén-protilátka“. V niektorých prípadoch ELISA odhalí AIDS 7 dní po infekcii, ale všeobecné pokyny sú 14 dní - 1 mesiac.

Schéma testovania HIV

Na analýzu sa odoberie malé množstvo krvi z kubitálnej žily. Štúdia sa vykonáva 14 dní po dátume podozrenia na nebezpečný kontakt. Spoľahlivosť výsledkov nie je potvrdená analýzou ELISA 3 mesiace po infekcii.

Na vykonanie testu je potrebné sa vopred pripraviť. Pred odberom krvi by ste nemali jesť jedlo ani užívať lieky. Analýza sa vykonáva ráno a popoludní sa môžete dozvedieť o načasovaní výsledkov. Ak je test ELISA pozitívny, je potrebné vykonať test na PCR a infekciu HIV, pretože pravdepodobnosť nesprávnych výsledkov testu 4. generácie je 1%.

Lekár informuje pacienta, že spoľahlivý výsledok je stanovený šesť mesiacov po zavedení vírusu do tela. Ak sú údaje analýzy pochybné, je potrebné po 1-2 týždňoch znova odobrať krv zo žily.

Falošne pozitívny je, keď nie je prítomný žiadny vírus, hoci test ukazuje pozitívny výsledok. Falošne negatívny výsledok je dôsledkom skorého vykonania štúdie, 90 dní po nákaze HIV.

Rozhodnutie o vykonaní testu 4. generácie robí pacient dobrovoľne a štúdia je úplne anonymná a bezplatná. Nútený odber krvi nie je povolený.

Povinné prípady testovania AIDS pomocou testovacích systémov

Podľa dokumentov o ľudských právach nie je násilné darovanie krvi na infekciu HIV povolené. Testovanie je povinné pre osoby, ktoré sa podieľajú na darovaní biologických tekutín.

Krv sa testuje na vírusy HIV-1 a HIV-2, ako aj na vírusové častice DNA. Po 6-mesačnej karanténe sa krv opäť testuje na vírus AIDS. Po získaní negatívneho výsledku sa používa na transfúziu v zdravotníckych zariadeniach. Dodržiava sa testovací algoritmus v skríningovom laboratóriu. Po prvom pozitívnom výsledku sa vykoná dvojitá štúdia s rovnakým testom 4. generácie. Po dvoch pozitívnych testoch štúdia pokračuje v referenčnom laboratóriu.

Osoby bez štátnej príslušnosti a cudzinci vstupujúci do Ruska sú testovaní na HIV. Ľudia, ktorí si odpykávajú tresty vo väzniciach, sú povinní absolvovať test na HIV.

AIDS je hrozná choroba, ktorá poškodzuje zdravie mnohých ľudí. Včasná diagnostika ochorenia pomôže zachovať zdravie a život po mnoho rokov.