Тандем масс спектрометрийг (HPLC-MSMS) эмнэлзүйн оношлогоонд ашиглах. HPLC MS-ийн эмнэлзүйн оношлогоонд тандем масс спектрометрийг (HPLC-MSMS) ашиглах нь юу вэ?

Эмнэлзүйн лабораториудад өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн хэрэглээ (HPLC-MS/MS) болон тандем масс спектрометрийн хэрэглээ сүүлийн 10-12 жилийн хугацаанд асар их нэмэгдсэн гэж Clinical Biochemist Reviews сэтгүүлд нийтэлсэн байна. Зохиогчид HPLC-MS/MS шинжилгээний өвөрмөц чанар нь бага молекул жинтэй молекулын шинжилгээ хийх дархлаа судлалын аргууд болон сонгодог өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматографиас (HPLC) хамаагүй давуу бөгөөд хийн хроматографи-масс спектрометрээс (GC) хамаагүй өндөр дамжуулалттай болохыг тэмдэглэжээ. -MS). Энэ аргын ердийн эмнэлзүйн шинжилгээнд түгээмэл болсон нь одоогоор аргын өвөрмөц чадвараар тайлбарлагддаг.

HPLC-MS/MS аргын гол давуу талууд нь:
• Жижиг молекулын тоон шинжилгээг үнэн зөв хийх боломж;
• Олон тооны зорилтот нэгдлүүдийн нэгэн зэрэг дүн шинжилгээ хийх;
• Өвөрмөц онцлог;
• Шинжилгээний өндөр хурд.

Сүүлийн жилүүдэд шинжилгээний цаг, үр дүнд нь лабораторийн бүтээмжийг нэмэгдүүлэхэд ихээхэн анхаарал хандуулж байна. HPLC/MS/MS-ийн богино аналитик баганыг ашигласнаар шинжилгээний хугацааг эрс багасгахын зэрэгцээ шинжилгээний онцлогийг эрс нэмэгдүүлдэг. Агаар мандлын даралтын иончлол (API), тандем гурвалсан квадруполь масс спектрометр ба дэвшилтэт өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматограф, түүнчлэн холбогдох дээж бэлтгэх арга техникийг ашиглах нь HPLC-MS/MS-ийг эмнэлзүйн судалгааны орчин үеийн аналитик аргуудын тэргүүн эгнээнд авчирсан.

Эмнэлзүйн анагаах ухаанд HPLC/MS/MS-ийн хэрэглээний үндсэн чиглэлүүд:
• Стероид хавтан, пурин, пиримидин болон бусад нэгдлүүдийн бодисын солилцооны бүрэн дүр төрхийг олж авах;
  шинэ төрсөн хүүхдэд бодисын солилцооны төрөлхийн алдааг илрүүлэх шинжилгээ (нэг шинжилгээнд хэдэн арван өвчнийг илрүүлэх);
• Дархлаа дарангуйлагч, перотиконвульсант, ретровирусын эсрэг эм, антикоагулянт болон бусад эмийн эмчилгээний хяналтыг үйлдвэрлэгчийн иж бүрдэлээс үл хамааран хийдэг. Бодис бүрт үнэтэй иж бүрдэл худалдаж авах шаардлагагүй - та өөрийн аргыг боловсруулж болно;
• Эмнэлзүйн хор судлал - 500 гаруй мансууруулах бодисын нэгдэл, тэдгээрийн метаболитыг нэг шинжилгээгээр баталгаажуулах шинжилгээгүйгээр хийх.
  протеомик ба метаболомик.

Нэмж дурдахад HPLC-MSMS нь шээсний олигосахарид, сульфатид, урт гинжин өөхний хүчил, урт гинжин цөсний хүчил, метилмалоны хүчил, порфирийн судалгаа, пурин, пиримидины солилцооны эмгэг бүхий өвчтөнүүдийг илрүүлэхэд ашиглагддаг.

Шингэн хроматографийн хэрэглээний жишээ
эмнэлзүйн шинжилгээнд тандем масс спектрометртэй хослуулан.

Нярайн скрининг: HPLC-MS/MS-ийг эмнэлзүйн оношлогоонд өргөнөөр ашигласны анхны жишээ бол нярайн бодисын солилцооны төрөлхийн алдааг илрүүлэх шинжилгээ юм. Одоогийн байдлаар хөгжингүй орнуудад энэ нь ердийн арга бөгөөд ацедеми, аминоацидопати, өөх тосны хүчлийн исэлдэлтийн гажиг зэрэг 30 гаруй өвчнийг хамардаг. Хэрэв цаг алдалгүй арилгахгүй бол ноцтой асуудалд хүргэдэг төрөлхийн гажигтай холбоотой судалгааг онцгой анхаарах хэрэгтэй (жишээлбэл, зүрх, элэг томрох, тархины хаван). Нярайн скрининг хийхэд HPLC-MS/MS ашиглахын давуу тал нь бүх амин хүчлүүд болон ацилкарнитиныг нэгэн зэрэг хурдан, хямд, өндөр өвөрмөц байдлаар шинжлэх чадвар юм.

Эмчилгээний эмийн хяналт:Шилжүүлэн суулгасны дараа эрхтэн татгалзахаас сэргийлэх дархлаа дарангуйлагч сиролимус (рапамицин) эмийг боловсруулж нэвтрүүлсэн нь HPLC-MS/MS-ийг эмнэлзүйн лабораторид нэвтрүүлэх гол хөшүүрэг болсон. Орчин үеийн HPLC-MS/MS арга нь такролимус, сиролимус, циклоспорин, эверолимус, микофеной хүчлийг нэгэн зэрэг тодорхойлох боломжийг олгодог.

HPLC-MS/MS нь мөн цитотоксик, ретровирусын эсрэг эм, трициклик антидепрессант, таталтын эсрэг эм болон хувь хүний ​​тунг шаарддаг бусад эмийн шинжилгээнд ашиглагддаг.

HPLC-MSMS арга нь 0.1-500 нг/мл концентрацийн мужид варфарины R- ба S-энантиомеруудыг салгаж, тоо хэмжээг тодорхойлох боломжийг олгодог.

Мансууруулах бодис, өвдөлт намдаах эмүүд: HPLC-MS/MS нь дээж бэлтгэхэд хялбар, шинжилгээний хугацаа богино байдаг тул эдгээр нэгдлүүдийн шинжилгээнд өргөн хэрэглэгддэг. Энэ аргыг одоогоор эмнэлзүйн лабораторид өргөн хүрээний эм байгаа эсэхийг шалгах зорилгоор ашиглаж байна. Аргын өвөрмөц онцлог, мэдрэмж нь дээжийг хамгийн бага бэлтгэлтэйгээр нэг дээжинд янз бүрийн ангиллын 500 гаруй нэгдлүүдийг нэгэн зэрэг шинжлэх боломжийг олгодог. Тиймээс шээсний шинжилгээний хувьд дээжийг 50-100 дахин шингэлэх нь хангалттай. Үсийг шинжлэхэд 100-200 ширхэг үсний оронд нэг үс нь хар тамхины хэрэглээний баримтыг найдвартай тогтооход хангалттай.

Эндокринологи ба стероидын шинжилгээ: HPLC-MS/MS нь тестостерон, кортизол, альдестерон, прогестерон, эстриол болон бусад олон төрлийн стероидын шинжилгээнд олон дотоод шүүрлийн лабораторид өргөн хэрэглэгддэг.

Цусан дахь витамин D3, D2-ийн түвшинг тодорхойлохын тулд HPLC-MS/MS-ийг ашиглах лабораториуд нэмэгдэж байна.

I. Стероидыг тодорхойлох (стероид профайл).

Эмнэлэг, клиникийн лабораториуд HPLC/MS/MS ашиглан олон стероидыг нэгэн зэрэг тодорхойлох боломжтой болсон. Энэ тохиолдолд том хэмжээний дээж авах шаардлагагүй бөгөөд энэ нь хүүхдийн дээжийг шинжлэхэд онцгой ач холбогдолтой юм.

Хэд хэдэн (профиль) стероидуудыг тодорхойлохыг зөвлөж буй тохиолдлууд:
• Төрөлхийн бөөрний дээд булчирхайн гиперплази (CAH) нь стероидын биосинтезийн төрөлхийн гажиг юм. Энэ бол бөөрний дээд булчирхайн бор гадаргын ферментийн зохисгүй үйл ажиллагаанаас үүдэлтэй удамшлын бүлэг өвчин бөгөөд энэ нь кортизолын үйлдвэрлэл буурахад хүргэдэг. NAS-ийг найдвартай оношлохын тулд кортизол, андростендион, 17-гидроксипрогестероныг хэмжихийг зөвлөж байна. HPLC/MS/MS нь 100% итгэлтэйгээр нэг шинжилгээгээр бүх гурван стероидын хэмжээг үнэн зөв тодорхойлох боломжийг олгодог.
• Дархлалын шинжилгээг ашиглан нярайн ердийн скрининг нь эерэг ба хуурамч сөрөг үр дүнгийн өндөр хувьтай байдаг. Зөвхөн кортизол төдийгүй альдостерон ба 11-дезоксикортизолыг HPLC/MS/MS-ээр тодорхойлох нь бөөрний дээд булчирхайн дутагдлыг анхдагч, хоёрдогчоос ялгах боломжийг олгодог.
• HPLC/MS/MS нь түрүү булчирхайн үрэвсэл, аарцагны архаг өвдөлтийн хам шинжийн үед стероидыг тодорхойлох боломжийг олгодог.
• HPLC-MS/MS нь стероидын профайлыг тодорхойлж, бага насны хүүхдүүдэд бөөрний дээд булчирхайн кортекстэй холбоотой эрт бэлгийн бойжилтын шалтгааныг тодорхойлох боломжтой. Эдгээр хүүхдүүдэд тестостерон, андростендион, дегидроэпиандростерон (DHEA) болон түүний сульфатын агууламж өндөр настай хүүхдүүдийнхээс арай өндөр байсан нь тогтоогджээ.
• Идэвхтэй тамхичид, идэвхгүй тамхичид, тамхи татдаггүй хүмүүсийн ийлдэст 15 стероид даавар, бамбай булчирхайн даавар байгаа эсэхийг шинжилж, өвчтөний утааны хордлого болон дааврын концентраци хоорондын хамаарлыг судлах болно.
• HPLC/MS/MS нь шээс дэх зарим эмэгтэй стероид дааврын профайлыг тодорхойлоход хэрэглэгддэг.
• HPLC/MS/MS-ийг чихрийн шижингийн мэдрэлийн эмгэгээс урьдчилан сэргийлэх мэдрэлийн идэвхт дааврын концентрацийг үнэлэхэд ашигласан.

II. Бамбай булчирхайн дааврын хэмжээг тодорхойлох

Бамбай булчирхайн дааврыг тодорхойлох ердийн аргууд нь ихэвчлэн радиоиммун шинжилгээнд тулгуурладаг бөгөөд энэ нь өндөр өртөгтэй бөгөөд зөвхөн T3 ба T4-ийг илрүүлдэг бөгөөд энэ нь бамбай булчирхайн үйл ажиллагааг тодорхойлох, бүрэн зохицуулах чадварыг хязгаарлаж болзошгүй юм.

• Одоогийн байдлаар HPLC-MSMS ашиглан ийлдэс дэх бамбай булчирхайн таван дааврын шинжилгээг нэгэн зэрэг хийж байна, үүнд тироксин (T4), 3,3′,5-трийодтиронин (T3), 3,3′,5′- (rT3) орно. , 3 ,3'-diiodothyronine (3,3'-T2) ба 3,5-diiodothyronine (3,5-T2) 1 -500 нг/мл концентрацийн мужид.
• HPLC/MS/MS аргыг мөн бамбай булчирхайн хагалгаа хийлгэсэн өвчтөнүүдийн дааврын найрлагад дүн шинжилгээ хийхэд ашигладаг. Хагалгааны дараа тироксин (T4), триодотиронин (T3), чөлөөт T4, бамбай булчирхайг өдөөдөг даавар (TSH) -ийн концентрацийн түвшинг тодорхойлно. HPLC/MS/MS нь TSH болон бамбай булчирхайн дааврын концентраци хоорондын хамаарлыг тогтоох маш сайн арга болох нь тогтоогдсон.
• Хүний шүлс болон ийлдэс дэх тироксиныг (T4) тодорхойлоход HPLC/MS/MS аргыг ашигласан. Энэ арга нь өндөр давтагдах чадвар, нарийвчлал, илрүүлэх хязгаар нь 25 pg / мл-ээр тодорхойлогддог. Судалгаанаас үзэхэд эутиреоид өвчтөнүүд болон Грейвсийн өвчтэй өвчтөнүүдийн шүлсний T4 концентраци нь оношлогооны хамаарал байгааг харуулж байна.

HPLC/MS/MS арга нь биологийн шингэн дэх бүх стероидуудыг найдвартай тодорхойлоход шаардлагатай мэдрэмж, өвөрмөц чанар, нарийвчлалтай болсон тул оношилгооны чадварыг, ялангуяа стероидын багцыг тодорхойлоход сайжруулдаг.

III. HPLC/MS/MS-ээр 25-гидроксивитамин D-ийг тодорхойлох

25-гидрокси витамин D (25OD) нь Д аминдэмийн эргэлтийн гол хэлбэр бөгөөд түүний идэвхтэй хэлбэрийн урьдал хэлбэр юм. (1,25-дигидроксивитамин D). Хагас задралын хугацаа урт байдаг тул 25OD-ийг тодорхойлох нь өвчтөний бие дэх Д аминдэмийн төлөв байдлыг тодорхойлоход чухал ач холбогдолтой. Витамин D нь хоёр хэлбэрээр байдаг: витамин D3 (холекальциферол) ба витамин D2 (ergocalciferol). Энэ хоёр хэлбэр нь тус тусын 25OD хэлбэрт метаболизмд ордог. Оношлогоонд чухал ач холбогдолтой зүйл бол витамины хоёр хэлбэрийг өндөр нарийвчлалтай тодорхойлж, Д аминдэмийн дутагдалтай өвчтөнүүдийг хянах боломжийг олгодог аналитик аргуудын хүртээмжтэй байх явдал юм. Үүнээс гадна D2 витамины өндөр концентрацитай үед D3-ийн илрэх хэмжээг дутуу үнэлдэг. Өөр нэг сул тал бол цацраг идэвхт изотопыг ашиглах явдал юм. HPLC/MS/MS аргыг хэрэглэснээр цацраг идэвхт изотопыг ашиглахаас зайлсхийх төдийгүй витамины идэвхтэй хэлбэрийг тусад нь тодорхойлох боломжтой болсон.

Энэ аргыг дараахь өвчтөнүүдэд хэрэглэнэ.
1. Хэрэв та биед Д витамин бага байгааг сэжиглэж байгаа бол;
2. Хэрэв тодорхойгүй хордлого гэж сэжиглэж байгаа бол;
3. Д аминдэмийн түвшин бага байгаа эмчилгээ хийлгэж буй өвчтөнүүдийг шалгахдаа;
4. HPLC/MS/MS-ийн хэрэглээ нь өвчтөнүүдийг хянахдаа хоёр хэлбэрийг тусад нь тодорхойлох боломжийг олгосон.

IV. Дархлаа дарангуйлагчийг HPLC/MS/MS-ээр тодорхойлох

Эрхтэн шилжүүлэн суулгасны дараа татгалзахаас зайлсхийхийн тулд дархлаа дарангуйлах эмийг насан туршдаа уух ёстой. Эмчилгээний маш нарийн хүрээтэй, өндөр хоруу чанар бүхий дархлаа дарангуйлагч нь хамгийн их үр дүнд хүрэхийн тулд хувь хүний ​​тунг шаарддаг. Тиймээс дархлаа дарангуйлах гол эмүүд: циклоспорин А, такролимус, сиролимус, эверолимус зэргийг хянах нь цусан дахь эмийн концентрациас хамааран өвчтөн бүрийн эмийн тунг тохируулахад чухал ач холбогдолтой юм.

Эдгээр эмийг хянахын тулд дархлааны шинжилгээг ашигладаг хэвээр байгаа боловч эдгээр аргууд нь өндөр өртөгтэй бөгөөд өвөрмөц чанар, нарийвчлал, давтагдах чадвар нь хязгаарлагдмал байдаг. Дархлаа судлалын аргуудыг ашиглан олж авсан үр дүнд үндэслэн дархлаа дарангуйлагчийн буруу тунгаар өвчтөнүүд нас барсан тохиолдол байдаг. Одоогоор эмнэлзүйн лабораторид дархлаа судлалын шинжилгээг HPLC/MS/MS-ээр сольж байна. Тиймээс Мюнхений их сургуулийн клиникт HPLC/MS/MS систем ашиглан сиролимус болон циклоспорин А-ийн агууламжийг өдөрт 70 орчим дээжийг шинжилдэг. Бүх дээж бэлтгэх, багаж хэрэгслийн хяналтыг нэг ажилтан гүйцэтгэдэг. Мөн лаборатори энэ аргыг ашиглан такролимусыг турших аргад шилжиж байна.

• Цусан дахь такролимус, сиролимус, аскомицин, деметиксиролимус, циклоспорин А, циклоспорин G-ийг нэгэн зэрэг тодорхойлоход HPLC/MS/MS-ийн хэрэглээг тайлбарласан болно. Концентрациар тодорхойлсон хязгаар нь 1.0 - 80.0 нг/мл байна. Циклоспорины хувьд 25 - 2000 нг/мл. Жилийн хугацаанд лаборатори 50 мянга гаруй дээжинд шинжилгээ хийсэн байна.
• Такролимус ба сиролимусыг нэгэн зэрэг хэрэглэх нь эмчилгээний эерэг үр дүнтэй болох нь тогтоогдсон тул эмнэлзүйн шинжилгээнд зориулж цусан дахь HPLC/MS/MS-ийг тусад нь тодорхойлох энгийн бөгөөд үр дүнтэй аргыг боловсруулсан. Нэг сорьцын шинжилгээг бүхэлд нь аналитик муруйд такролимус 2.46% - 7.04%, сиролимусын хувьд 5.22% - 8.30% хооронд нарийвчлалтайгаар 2.5 минут зарцуулдаг. Такролимусын илрүүлэх доод хязгаар нь 0.52 нг/мл, сиролимусын хувьд 0.47 нг/мл байна.

V. HPLC/MS/MS-ээр гомоцистеиныг тодорхойлох

Гомоцистеин нь зүрх судасны өвчин (тромбоэмболизм, зүрхний өвчин, атеросклероз) болон бусад эмнэлзүйн нөхцөл байдалд (сэтгэлийн хямрал, Альцгеймерийн өвчин, ясны сийрэгжилт, жирэмсний хүндрэл гэх мэт) сонирхолтой байдаг. Гомоцистеины шинжилгээний одоогийн аргууд, түүний дотор дархлааны шинжилгээ нь үнэтэй байдаг. Гомоцистеины шинжилгээ хийх хурдан HPLC/MS/MS аргыг олон тооны дээжийн шинжилгээнд эмнэлзүйн байнгын хэрэглээнд зориулан боловсруулсан. Ионжуулалтыг цахилгаан шүрших аргаар хийсэн. Арга нь дахин давтагдах боломжтой, өндөр өвөрмөц, үнэн зөв юм. Аргын давуу тал нь урвалжийн хямд өртөг, дээж бэлтгэхэд хялбар байдаг. Өдөрт 500 ба түүнээс дээш дээжийг шинжлэх боломжтой.

Дүгнэлт

Техникийн үндсэн хязгаарлалтын улмаас мэдэгдэхүйц сайжруулсан дархлаа судлалын аргуудыг одоо ашиглаж байгаа ч энэ арга нь HPLC-MSMS-тэй харьцуулахуйц зорилтот бодисын нарийвчлал, өвөрмөц чанар, ялангуяа метаболит байгаа тохиолдолд хэзээ ч байхгүй гэдгийг тэмдэглэх нь зүйтэй. Энэ нь ELISA аргын нарийвчлал бага, хуурамч эерэг, худал-сөрөг үр дүнгийн өндөр хувийг эзэлдэг төдийгүй ELISA аргыг ашиглан өөр өөр эмнэлзүйн хэлтэст олж авсан үр дүнг харьцуулах боломжийг олгодоггүй. HPLC-MS/MS-ийн хэрэглээ нь энэ дутагдлыг арилгаж, метаболит, цусны сийвэн болон цусанд агуулагдах дагалдах болон эндоген бодисуудын хөндлөнгийн оролцоогүй өндөр найдвартай, өндөр найдвартай олон тооны дээжийг өндөр нарийвчлалтай, хурдан шинжлэх боломжийг олгодог. өвчтөнүүдийн.

Багажны цогцолборын өртөг өндөр байгаа хэдий ч дэлхийн практикээс харахад энэ цогцолбор нь зохих ёсоор ажилласнаар 1-2 жилийн дотор өөрийгөө нөхдөг. Энэ нь юуны түрүүнд хэдэн арван, хэдэн зуун нэгдлүүдийг нэгэн зэрэг шинжлэх, үнэтэй оношлогооны иж бүрдэл худалдаж авах шаардлагагүйгээс болж нэг шинжилгээний өртөг багатай холбоотой юм. Нэмж дурдахад лаборатори нь шаардлагатай шинжилгээний аргыг бие даан боловсруулах боломжтой бөгөөд иж бүрдэл үйлдвэрлэгчээс хамаарахгүй.

Төхөөрөмжийн зөв тохиргоог сонгох

Олон зуун мянган Далтон жинтэй уургийн макромолекулуудын бүтцийг тодорхойлохоос эхлээд жижиг молекулуудын ердийн өндөр хүчин чадалтай тоон шинжилгээ хүртэл олон төрлийн асуудлыг шийдвэрлэхэд зориулагдсан олон төрлийн масс спектрометрийн арга, масс спектрометрийн төрөл байдаг.

Асуудлыг амжилттай шийдвэрлэхийн тулд гол нөхцлүүдийн нэг бол зөв төрлийн тоног төхөөрөмжийг сонгох явдал юм. Аналитик асуудлыг бүхэлд нь шийдвэрлэх боломжийг олгодог бүх нийтийн төхөөрөмж байдаггүй. Тиймээс бичил биетнийг тодорхойлох асуудлыг шийдвэрлэхэд зориулагдсан төхөөрөмж нь жижиг молекулуудын тоон шинжилгээ хийх чадваргүй байдаг. Мөн эсрэгээр. Баримт нь нийтлэг нэртэй хэдий ч эдгээр нь өөр өөр физик зарчмаар ажилладаг огт өөр төхөөрөмж юм. Эхний тохиолдолд энэ нь лазер иончлолын эх үүсвэр - MALDI-TOF, хоёр дахь нь - цахилгаан шүршигч ионжуулалт бүхий гурвалсан квадруполь - HPLC-MSMS бүхий нислэгийн цагийн масс спектрометр юм.

Хоёрдахь чухал параметр бол системийн зөв тохиргоог сонгох явдал юм. Масс спектрометрийн тоног төхөөрөмжийн хэд хэдэн томоохон үйлдвэрлэгчид байдаг. Үйлдвэрлэгч бүр өөрийн гэсэн давуу талтай төдийгүй сул талуудтай байдаг тул ихэнхдээ дуугүй байхыг илүүд үздэг. Үйлдвэрлэгч бүр өөрийн гэсэн төхөөрөмж үйлдвэрлэдэг. Нэг аналитик цогцолборын өртөг нь 100,000-аас 1,000,000 доллар ба түүнээс дээш байдаг. Хамгийн оновчтой үйлдвэрлэгч, тоног төхөөрөмжийн зөв тохиргоог сонгох нь санхүүгийн ихээхэн нөөцийг хэмнэхээс гадна даалгаврыг илүү үр дүнтэй шийдвэрлэх болно. Харамсалтай нь эдгээр хүчин зүйлсийг харгалзахгүйгээр лабораторийн тоног төхөөрөмжийг хийсэн олон жишээ бий. Үүний үр дүнд тоног төхөөрөмж сул зогсонги байдалд орж, мөнгө үрэгдэж байна.

Лабораторийн амжилттай үйл ажиллагааг тодорхойлдог гурав дахь хүчин зүйл бол боловсон хүчин юм. Масс спектрометрийг ажиллуулахад өндөр мэргэшсэн боловсон хүчин шаардлагатай. Харамсалтай нь ОХУ-д нэг ч их сургууль орчин үеийн практик масс спектрометрийн курсгүй, ялангуяа эмнэлзүйн хэрэглээтэй холбоотой тул лаборатори бүрт боловсон хүчин бэлтгэх ажлыг бие даан шийдвэрлэх шаардлагатай болдог. Мэдээжийн хэрэг, төхөөрөмжийг ажиллуулсны дараа үйлдвэрлэгчээс 2-3 хоногийн танилцуулах сургалт нь аргын үндсийг ойлгох, төхөөрөмжийг ажиллуулах ур чадвар эзэмшихэд хангалтгүй юм.

Дөрөв дэх хүчин зүйл бол шинжилгээний бэлэн арга байхгүй. Лаборатори бүр өөрийн гэсэн тэргүүлэх зорилтуудтай байдаг бөгөөд үүний тулд өөрийн аргыг боловсруулах шаардлагатай байдаг. Энэ төхөөрөмжийг дор хаяж 2-3 жил ажилласан туршлагатай хүн хийж болно. Үйлдвэрлэгчид заримдаа зөвлөмжийн шинж чанартай нэг эсвэл хоёр ерөнхий аргыг нийлүүлдэг боловч тэдгээрийг лабораторийн тусгай даалгаварт тохируулдаггүй.

IN БиофармЭксперт ХХКБид янз бүрийн төрлийн масс спектрометр дээр ажиллаж, аргуудыг боловсруулж, өндөр хүчин чадалтай шинжилгээ хийдэг олон жилийн туршлагатай мэргэжилтнүүдийг ажиллуулдаг. Тиймээс бид дараах үйлчилгээг үзүүлж байна.

1. Үйлчлүүлэгчийн тодорхой ажлуудад тохирох төхөөрөмжийн оновчтой тохиргоог сонгох.
2. Тандем масс спектрометрийн тэргүүлэгч үйлдвэрлэгчдээс тоног төхөөрөмж худалдан авах, нийлүүлэх, ашиглалтад оруулах, тоног төхөөрөмжийг ашиглалтад оруулсан өдрөөс хойш нэг жилийн хугацаанд боловсон хүчнийг үе шаттайгаар сургах.
3. Эмнэлзүйн үндсэн асуудлыг шийдвэрлэх бэлэн арга, мэдээллийн сангийн багц.
4. Шинжилгээний аргыг боловсруулах, үйлчлүүлэгчийн тодорхой асуудлыг лабораторид нь ажилтнуудаа оролцуулан шийдвэрлэх.
5. Ажлын бүх үе шатанд арга зүйн дэмжлэг үзүүлэх.

Өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографи (HPLC) нь хөдөлгөөнгүй фаз (сорбент) -ээр дүүрсэн хроматографийн баганаар дамждаг шингэнийг хөдөлгөөнт фаз (MP) гэж үздэг баганын хроматографийн арга юм. HPLC баганууд нь баганын оролтын өндөр гидравлик даралтаар тодорхойлогддог тул HPLC-ийг заримдаа "өндөр даралтын шингэний хроматографи" гэж нэрлэдэг.

Бодисыг ялгах механизмаас хамааран HPLC-ийн дараахь хувилбаруудыг ялгадаг: шингээх, хуваах, ион солилцох, хэмжээг хасах, хирал гэх мэт.

Адсорбцийн хроматографийн хувьд бодисыг салгах нь боловсруулсан гадаргуутай шингээгчийн гадаргуугаас, жишээлбэл, цахиурлаг гелийг шингээх, шингээх чадвараас шалтгаалан үүсдэг.

HPLC хуваалтын үед салалт нь суурин фаз (ихэвчлэн суурин зөөгчийн гадаргуу дээр химийн аргаар залгагдсан) ба хөдөлгөөнт фазын хооронд тусгаарлагдсан бодисын тархалтын коэффициентүүдийн зөрүүгээс шалтгаалан үүсдэг.

Туйлшралаас хамааран PF ба NP HPLC нь хэвийн фазын болон урвуу фазын гэж хуваагддаг.

Хэвийн үе шат нь туйлын сорбент (жишээлбэл, NH 2 эсвэл CN бүлгүүдтэй цахиурлаг гель эсвэл силикагель) ба туйлт бус PF (жишээлбэл, янз бүрийн нэмэлтүүдтэй гексан) ашигладаг хроматографийн хувилбар юм. Хроматографийн урвуу фазын хувилбарт химийн хувьд туйлшралгүй өөрчлөгдсөн сорбент (жишээлбэл, туйлт бус алкил радикал C 18) ба туйл хөдөлгөөнт фаз (жишээлбэл, метанол, ацетонитрил) ашигладаг.

Ион солилцооны хроматографийн хувьд уусмал дахь катион ба анион болгон задарсан бодисын хольцын молекулууд нь сорбентын ионы бүлгүүдтэй харилцан адилгүй солилцооны хурдтай байдаг тул сорбентоор (катион солилцогч эсвэл анион солилцуур) шилжих үед тусгаарлагддаг.

Хэмжээг хасах (шигшүүр, гель нэвчүүлэх, гель шүүх) хроматографийн хувьд бодисын молекулууд нь суурин фазын нүх сүвийг нэвчих чадвараараа ялгаатай байдаг тул хэмжээгээр нь ялгадаг. Энэ тохиолдолд суурин фазын хамгийн бага тооны нүхэнд нэвтрэх чадвартай хамгийн том молекулууд (хамгийн их молекул жинтэй) баганыг хамгийн түрүүнд орхиж, жижиг молекулын хэмжээтэй бодисууд хамгийн сүүлд гардаг.

Ихэнхдээ салалт нь нэгээр биш, хэд хэдэн механизмаар нэгэн зэрэг явагддаг.

HPLC аргыг хийн бус аливаа аналитын чанарыг хянахад ашиглаж болно. Шинжилгээ хийхийн тулд зохих багаж хэрэгслийг ашигладаг - шингэн хроматограф.

Шингэн хроматограф нь ихэвчлэн дараах үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулдаг.

– ХӨБ бэлтгэх хэсэг, үүнд хөдөлгөөнт фаз бүхий сав (эсвэл хөдөлгөөнт үе шатанд орсон бие даасан уусгагчтай сав) болон ХФ-ийн хий тайлах систем;

- шахах систем;

– хөдөлгөөнт фазын холигч (шаардлагатай бол);

– дээжийг нэвтрүүлэх систем (инжектор);

– хроматографийн багана (термостатад суулгаж болно);

- илрүүлэгч;

– мэдээлэл цуглуулах, боловсруулах систем.

Ус шахах систем

Шахуургууд нь PF-ийг өгөгдсөн тогтмол хурдаар баганад нийлүүлдэг. Хөдөлгөөнт фазын найрлага нь шинжилгээний явцад тогтмол эсвэл өөр өөр байж болно. Эхний тохиолдолд процессыг изократ гэж нэрлэдэг, хоёрдугаарт - градиент. 0.45 микрон нүхний диаметртэй шүүлтүүрийг заримдаа шахуургын системийн урд суурилуулж, хөдөлгөөнт фазыг шүүдэг. Орчин үеийн шингэн хроматографийн шахуургын систем нь нэг буюу хэд хэдэн компьютерийн удирдлагатай насосуудаас бүрдэнэ. Энэ нь градиент элюцийн үед тодорхой хөтөлбөрийн дагуу PF-ийн найрлагыг өөрчлөх боломжийг танд олгоно. Холигч дахь PF бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг холих нь бага даралт (шахуургын өмнө) болон өндөр даралт (насосуудын дараа) хоёуланд нь тохиолдож болно. Холигчийг PF бэлтгэхэд ашиглаж болох ба изократик шүүрлийн үед ашиглаж болох боловч изократик процессын хувьд PF бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг урьдчилан холих замаар бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн илүү нарийвчлалтай харьцааг олж авдаг. Аналитик HPLC-ийн насосууд нь баганын оролтод 50 МПа хүртэлх даралттай үед 0.1-10 мл / мин хооронд багана руу PF-ийн тогтмол урсгалын хурдыг хадгалах боломжийг олгодог. Гэхдээ энэ утга нь 20 МПа-аас хэтрэхгүй байхыг зөвлөж байна. Шахуургын дизайнд багтсан тусгай сааруулагч системээр даралтын импульсийг багасгадаг. Шахуургын ажлын хэсгүүд нь зэврэлтэнд тэсвэртэй материалаар хийгдсэн бөгөөд энэ нь PF найрлага дахь түрэмгий бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг ашиглах боломжийг олгодог.

Шинэ 1,3,4-тиадиазолын амин хүчлийн LXT7-09 деривативыг тодорхойлж, тоон үзүүлэлтийг тодорхойлох баталгаажсан HPLC-MS/MS аргыг боловсруулсан. LHT7-09-ийн массын спектрометрийн илрүүлэлтийн хамгийн дээд мэдрэмж нь эерэг ион илрүүлэх горимд 5500 В-ийн цахилгаан шүршигч хүчдэл ба 36 В-ийн бөөгнөрөх боломжоор хангагдсан. Тодорхойлсон MRM шилжилтүүд нь 1-ийн шинэ амин хүчлийн деривативын химийн бүтцийг баталгаажуулсан. ,3,4-тиадиазол. LXT7-09-ийг тиадиазолиламидын олон бүрэлдэхүүн хэсэгтэй хольцоос үр дүнтэй тусгаарлахын тулд янз бүрийн харьцаатай ацетонитрил ба ионгүйжүүлсэн усны хольцыг уусгагч болгон ашиглан өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн градиент горимыг боловсруулсан. Эдгээр хроматографийн нөхцөлд LHT7-09 нэгдлийг хадгалах хугацааг 11 минут гэж тодорхойлсон. LHT7-09 нэгдлийн тоон хэмжээг тодорхойлохын тулд хроматографийн оргилын талбайг уусмалын концентрацаас хамааруулан тохируулгын уусмалыг боловсруулсан.

HPLC-ms/ms

хроматографи

масс спектрометр

тиадиазол

1. Казаишвили Ю.Г., Попов Н.С. Харханд формалинаар үүсгэгдсэн сарвууны хаван дахь тиадиазолын шинэ деривативуудын үрэвслийн эсрэг үйл ажиллагааны судалгаа / Ю.Г. Казаишвили, Н.С. Попов // Шинжлэх ухаан, боловсролын орчин үеийн асуудлууд. – 2013. – No3. www..

2. Мөөгөнцрийн эсрэг үйлчилгээтэй шинэ тиадиазолын деривативууд / A.S. Кошевенко [болон бусад] // Анагаах ухааны микологийн дэвшил. – 2015. – Т. 14. – С. 348-351.

3. Шинэ фурил-2-орлуулсан 1,3,4-тиадиазол, 1,2,4-триазолуудын нийлэгжилт ба хавдрын эсрэг үйл ажиллагаа / T.R. Ховсепян [болон бусад] // Хими-эмийн сэтгүүл. – 2011. – Т. 45. – No 12. – С. 3-7.

4. Попов Н.С., Демидова М.А. Тиадиазолын шинэ амин хүчлийн деривативын цочмог хордлогын үнэлгээ нь хулганад хэвлийн хөндийгөөр тарих / N.S. Попов, М.А. Демидова // Дээд Волга эмнэлгийн сэтгүүл. – 2016. – T. 15, дугаар. 1. – хуудас 9-12.

5. Попов Н.С., Демидова М.А. Харханд ходоодонд тарих үед тиадиазолын шинэ амин хүчлийн деривативын шархлаа үүсгэдэг байдлын үнэлгээ / N.S. Попов, М.А. Демидова // Доктор, аспирантур. – 2017. – No1(80). – 71-78-р тал.

6. 2-амин-5-алкил(арилалкил)-1,3,4-тиадиазолууд дээр суурилсан фенилтио- ба бензилсульфонил цууны хүчлийн амидуудын нийлэгжилт ба нянгийн эсрэг үйл ажиллагаа / С.А. Серков [болон бусад] // Хими-эмийн сэтгүүл. – 2014. – Т.48, №1. – С.24-25.

7. Arpit K., Basavaraj M., Sarala P., Sujeet K., Satyaprakash K. Имидазотиадиазолын деривативын синтез ба фармакологийн идэвхжил // Acta Poloniae Pharmaceutica, Эмийн судалгаа. 2016. Боть. 73.Үгүй. 4. P. 937-947.

8. Eman M. Flefel, Wael A. El-Sayed, Ashraf M. Mohamed, New 1-thia-4-azaspirodecane-ийн синтез ба хорт хавдрын эсрэг үйл ажиллагаа, тэдгээрийн гаралтай тиазолопиримидин ба 1,3,4-тиадиазол тиогликозидууд // Молекулууд. 2017. Үгүй. 22(1). P. 170.

9. Хорхе Р.А. Диас, Жерардо Энрике Ками. Ацетазоламидын бүтцийн болон аналоги болох 5-амин-2-сульфонамид-1,3,4-тиадиазолын давс нь нүүрстөрөгчийн ангидразын дарангуйлах шинж чанар, шээс хөөх эм, таталтын эсрэг үйлчилгээтэй болохыг харуулж байна // Ферментийн дарангуйлал ба эмийн химийн сэтгүүл. 2016. Боть. 12. Үгүй. 6. P. 1102-1110.

10. Naiyuan Chen, Wengui D., Guishan L., Luzhi L. Dehydroabietic хүчилд суурилсан 1,3,4-тиадиазол-тиазолидиноны нэгдлүүдийн нийлэгжилт ба мөөгөнцрийн эсрэг үйл ажиллагаа // Молекулын олон янз байдал. 2016. Боть. 20. Үгүй. 4. P. 897-905.

11. Йомна, И.Эль-Газзар, Ханан Х.Жоржи, Шахенда М.Эль-Мессери. Шинэ (1,2,4-триазол эсвэл 1,3,4-тиадиазол)-метилтио дериватив хиназолин-4(3Н)-н DHFR дарангуйлагчийн синтез, биологийн үнэлгээ, молекулын загварчлалын судалгаа // Биорганик хими. 2017. Боть. 72. P. 282-292.

Масс спектрометрийн илрүүлэлт бүхий өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографи нь янз бүрийн биологийн объектуудад эмийг тодорхойлох, тоон тодорхойлох хамгийн ирээдүйтэй аргуудын нэг юм. Энэ арга нь өндөр өвөрмөц байдал, нарийвчлал, хамгийн бага концентрацитай бодисыг тодорхойлох чадвараараа тодорхойлогддог бөгөөд энэ нь эмнэлзүйн лабораторийн оношлогоонд чухал ач холбогдолтой фармакокинетик судалгаа, эмийн мониторингийн явцад эмийн тоон тодорхойлоход ашиглах боломжийг олгодог. Үүний тулд HPLC-MS/MS аргад суурилсан төрөл бүрийн эмийн бодис, түүний дотор шинэлэг бодисыг тоон тодорхойлох аргыг боловсруулж, баталгаажуулах шаардлагатай байна.

Стероид бус үрэвслийн эсрэг эмийн бүлгийн анхны эм нь 1,3,4-тиадиазол амид ба ацексамины хүчлийн шинэ дериватив болох ацесазоламид юм. Энэ нэгдлийн чухал давуу тал нь бага хоруу чанар, шархлаа үүсгэх чадвар багатай байдаг. Фармакокинетик судалгаа хийх, энэ эмийн био хүртээмжийг янз бүрийн аргаар хэрэглэхийн тулд биологийн шингэн дэх тоон хэмжээг тодорхойлох найдвартай аргыг боловсруулах шаардлагатай.

Энэхүү судалгааны зорилго HPLC-MS/MS ашиглан тиадиазолын деривативын бүлгээс стероид бус үрэвслийн эсрэг шинэ эмийг тодорхойлох, тоон тодорхойлох арга техникийг боловсруулах явдал байв.

Материал ба арга

Судалгааны объект нь "VNTs BAV" OJSC (Старая Купавна) -д проф. С.Я. Скачилова (Зураг 1).

2-(5-этил-1,3,4-тиадиазолил)амид 2-ацетиламиногексаны хүчил

Цагаан будаа. 1. LHT 7-09-ийн химийн бүтэц (нийт томъёо: C 12 H 20Н 4 О 2С; молийн масс 284.4г/моль)

LHT 7-09 нэгдэл нь цагаан нунтаг бөгөөд усанд бараг уусдаггүй, спиртэнд уусдаг, ацетонитрилд амархан уусдаг.

Масс спектрометр илрүүлэх (HPLC-MS/MS) арга бүхий баталгаажсан өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийг LCT 7-09-ийг тодорхойлж, тоон үзүүлэлтээр нь тодорхойлоход ашигласан.

Хроматографийг Agilent 1260 InfinityII өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматограф (Agilent Technologies, Герман) ашиглан хийсэн. Судалгаанд ашигласан аналитик багана нь Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 μm 2.1 × 10 мм байв. Судалгаанд хамрагдаж буй нэгдлийг тусгаарлахын тулд бид градиент хроматографийн горимыг боловсруулсан. Ацетонитрил, ионгүйжүүлсэн ус, аммонийн ацетатыг янз бүрийн харьцаагаар угаагч бодис болгон ашигласан.

Масс спектрометрийн хувьд ABSciexQTrap 3200 MD гурвалсан квадруполь масс спектрометрийг (ABSciex, Сингапур) цахилгаан шүрших ионы эх үүсвэртэй (TurboIonSpray мэдрэгчтэй TurboV) ашигласан. Масс спектрометрийг 6.1×10 -2 мг/л концентрацитай резерпиний туршилтын уусмалыг ашиглан тохируулсан.

Судалгаанд хамрагдсан дээжийн масс-спектрометрийн шинжилгээг хроматографаар нийлүүлсэн дээж, элюатыг шууд шахах замаар цахилгаан шүрших горимд хийсэн. Туршилтын дээжийг массын хроматограф руу шууд шахах ажлыг 4.61 мм диаметртэй тариурын насос ашиглан 10 мкл/мин хурдтайгаар гүйцэтгэсэн.

Тиадиазолын шинэ деривативыг тодорхойлох, хэмжих аргыг боловсруулахдаа шингэний өндөр үзүүлэлттэй хроматографи, масс илрүүлэх оновчтой нөхцлийг сонгосон. Хроматографийн баганаас бодис ялгарах хугацаа, MRM шилжилтийг харгалзан үзсэн (бүртгэлийг хийсэн). м/занхны аналитик квадруполь Q1 дээрх прекурсор ион ба м/зХоёр дахь аналитик квадруполь Q3 дээрх бүтээгдэхүүний ионууд). LCT 7-09-ийн хэмжээг тодорхойлохын тулд 0.397-397 нг/мл концентрацийн мужид тохируулгын графикийг байгуулсан.

AnalystMD 1.6.2.Програм хангамжийг (ABSciex) програм хангамж болгон ашигласан.

Үр дүн ба хэлэлцүүлэг

Туршилтын судалгааны эхний шатанд туршилтын дээжийг тариурын насос ашиглан масс детекторт шууд оруулах замаар масс илрүүлэх ажлыг гүйцэтгэсэн. Дээж бэлтгэх шатанд LHT 7-09 (500 нг/мл) уусмалыг аммонийн ацетат (0.1%) нэмэн 2:1 харьцаатай ацетонитрил ба ионжуулсан усны холимогт бэлтгэсэн.

Урьдчилсан туршилтууд эерэг ионуудыг бүртгэх горимд LHT 7-09-ийг тодорхойлох мэдрэмж өндөр, массын спектр нь сөрөг ионуудыг бүртгэх горимоос илүү эрчимтэй, мэдээлэл сайтай байсныг харуулсан. Үүнтэй холбогдуулан цаашдын судалгаанд зөвхөн эерэг иончлолын горимыг ашигласан.

Хүчтэй оргилд хүрэхийн тулд масс илрүүлэх дараах нөхцлийг сонгосон. : эерэг туйлшрал, цахилгаан шүрших хүчдэл 5500.0 В, бөөгнөрөх боломж ба тарилгын потенциал - 36.0 ба 6.5 В, хөшигний хийн даралт 20.0 psi, атомчлах хийн даралт 40.0 psi, хурд 10 мкл/мин. Сканнердах хүрээ нь 270-300 Да байв.

Эхний аналитик квадруполь Q1-ийн олж авсан массын спектрийн дүн шинжилгээ нь эдгээр нөхцөлд устөрөгчийн протон нэмснээр судлагдсан нэгдлийн протонжуулсан молекул + үүсэж байгааг харуулсан. м/ z 285.2 Тийм (Зураг 2).

Цагаан будаа. 2. LHT 7-09 протонжуулсан молекулын массын спектр (эерэг ион + сканнердах горимд)

Хоёрдахь аналитик дөрвөлсөн туйлт Q3 дээр урьдчилсан ионы хувьд бүтээгдэхүүний ионуудыг утгатайгаар тэмдэглэв. м/з 285.2 Тийм ээ. 2-р дарааллын массын спектрийн шинжилгээ нь олон оргил байгааг харуулсан бөгөөд тэдгээрийн 3 нь хамгийн хүчтэй байв. м/з 114.2 Да, м/з 130.2 Да ба м/з 75.1 Да (Зураг 3).

Цагаан будаа. 3. Бүтээгдэхүүний ионуудын массын спектр (эерэг ион сканнердах горимд, прекурсор ионм/ z285.2 Тийм)

Өндөр эрчимтэй ионы дохиог авахын тулд Q2 мөргөлдөөний үүрний энергийн оновчтой утгыг сонгосон (0-ээс 400 В хүртэлх энергийн хүрээг авч үзсэн). Утгатай бүтээгдэхүүний ионуудын хувьд м/ z 114.2 Да, 130.2 Да, 75.1 Да нь мөргөлдөх үүрэнд хамгийн оновчтой энерги нь 27 В; 23 В ба 49 В.

үнэ цэнэ бүхий бүтээгдэхүүн ион гэж үздэг м/ z 114.2 Да нь 5-амин-2-этил-1,3,4-тиадиазолын фрагмент бөгөөд бусад 1,3,4-тиадиазолын деривативуудыг задлахад мөн ижил утгатай бүтээгдэхүүний ион илэрдэг. м/ z. Утгатай бүтээгдэхүүн ион м/ z 130.2 Да нь ацексамины хүчлийн протонжуулсан хэсэг байх магадлалтай. Ийнхүү судалж буй дээжийн масс илрүүлэх үр дүн нь шинэ 1,3,4-тиадиазолын деривативын химийн бүтцийг баталсан.

Туршилтын судалгааны дараагийн шатанд туршилтын нэгдлийг HPLC-масс спектрометрээр шинжлэв.

HPLC-MS/MS горимд дараах иончлолын нөхцлийг ашигласан: цахилгаан шүрших хүчдэл 5500.0 В, хөдөлгөөнт фазын урсгалын хурд 400 мкл/мин, азотын температур 400 °C, хөшигний хий ба шүрших урсгалын даралт 20.0 ба 50.0 psi тус тус. Нэг массын спектрийн бичлэгийн хурд секундэд 100 спектр байв. Массын спектрийг нэгтгэн авахын тулд хроматограмм дээр 10.5-11.5 минутын хугацааг сонгосон; Бүтээгдэхүүний ионуудын дохионы эрчмийг үндэслэн судалж буй нэгдэлд тохирох ионы гүйдлийн цаг хугацааны хамаарлын муруй ба бие даасан дохионы оргил талбайг байгуулав. Аналитик баганад оруулсан дээжийн хэмжээ 10 мкл байв.

Судалгаанд хамрагдаж буй нэгдлүүдийг тусгаарлахын тулд өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн градиент горимыг ашигласан бөгөөд энэ нь аналитик баганын үүдэнд шингээгчийн найрлагыг өөрчилснөөр баталгаажсан. Ацетонитрил, ионгүйжүүлсэн ус, аммонийн ацетатыг янз бүрийн харьцаагаар угаагч бодис болгон ашигласан. Градиент хроматографийн горимыг сонгосон нь изократ шүүрлийн горимын нөхцөлд (өөр өөр концентрацитай ацетонитрил ашиглах үед) хадгалах хугацаатай тэгш хэмтэй хэлбэрийн туршилтын бодисын оргилыг олж авах боломжгүй байсантай холбоотой юм. шинжилгээ хийхэд тохиромжтой. Судалгаанаас үзэхэд хамгийн оновчтой уусмалын нийлүүлэлтийн горим нь: 0-ээс 4 минутын хооронд ацетонитрилийн концентраци 1%; 4-8 минутын хооронд ацетонитрилийн концентраци 99% хүртэл шугаман өсөлт; 8-аас 12 минут хүртэл - изократик хэсэг (1% ацетонитрил). Судалгааны ажил дууссаны дараа хроматографийн баганыг 30% -ийн ацетонитрилийн уусмалаар 5 минутын турш угаана.

Тайлбарласан хроматографийн горимыг ашиглах үед судлагдсан нэгдлийн хувьд хангалттай эрчимтэй тэгш хэмтэй оргилыг олж авсан (Зураг 4).

Цагаан будаа. 4. Хроматограмм LHT 7-09 (аналитик баганаЧадварлагPoroshell 120 EC-C18 2.7 мкм 2.1×10 мм; градиент хроматографийн горим)

Өөр өөр концентрацитай LCT 7-09 уусмалын олж авсан хроматограммын шинжилгээ нь эдгээр шүүрлийн нөхцөлд хадгалах хугацаа (tR) 11 минут байсан бөгөөд судалж буй бодисын концентрацаас хамааралгүй болохыг харуулсан. Үүнтэй холбогдуулан хадгалах хугацааны утгыг олон бүрэлдэхүүн хэсэгтэй хольц дахь LHT 7-09-ийн жинхэнэ эсэхийг баталгаажуулах нэмэлт шалгуур болгон ашиглаж болно. Эдгээр хроматографийн параметрүүдийг LHT 7-09-ийг зөвхөн масс детектор ашиглан бус, фотометр зэрэг бусад детекторуудыг тодорхойлоход ашиглаж болох нь анхаарал татаж байна.

Тиадиазолын шинэ деривативын хэмжээг тодорхойлохын тулд 0.397 нг/мл-ээс 397 нг/мл хүртэлх концентрацийн мужид тохируулгын графикийг байгуулсан (Зураг 5).

Цагаан будаа. 5. LCT 7-09-ийн концентрацийг тодорхойлох шалгалт тохируулгын график (абсцисса тэнхлэгийн дагуу LCT 7-09-ийн концентраци нг/мл, ордны тэнхлэгийн дагуу импульсийн оргил хэсэг)

Шалгалт тохируулгын уусмалыг боловсруулахын тулд LHT 7-09-ийн уусмалыг 0.397 концентрацид ашигласан; 1.980; 3.970; 19.8; 39.7; 198.0; 397.0 нг/мл. Оргил талбайн судлагдсан нэгдлийн концентрацаас хамаарах хамаарлыг дараах регрессийн тэгшитгэлээр тайлбарлав.

y= 8.9e 5 ·x 0.499, регрессийн коэффициентийн утга r=0.9936.

Боловсруулсан шалгалт тохируулгын шийдэл нь өргөн хүрээний концентрацид судлагдсан нэгдлийг өндөр нарийвчлалтай тоон тодорхойлох боломжийг олгодог бөгөөд энэ нь эмийн бодисын чанарыг үнэлэх, фармакокинетикийн судалгаа хийхэд энэ аргыг ашиглах боломжийг олгодог гэдгийг тэмдэглэх нь зүйтэй.

Ийнхүү судалгааны үр дүн нь HPLC-MS/MS ашиглан тиадиазолын шинэ амин хүчлийн деривативыг тодорхойлох, тоон тодорхойлох аргыг боловсруулсан явдал юм.

дүгнэлт

1. HPLC-MS/MS нь тиадиазолын шинэ амин хүчлийн деривативыг өндөр нарийвчлалтайгаар тодорхойлох, хэмжих боломжийг олгодог.
2. Тиадиазолын шинэ дериватив LHT 7-09-ийн массыг илрүүлэх нь эерэг ионы сканнердах горимд (MRM шилжилт - прекурсор ион Q1) явагдах ёстой. м/ z 285.2 Тийм; бүтээгдэхүүний ионууд Q3 м/ z 114.2 Да, м/ z 130.2 Да ба м/ z 75.1 Да).
3. LCT 7-09-ийг олон бүрэлдэхүүн хэсэгтэй хольцоос тусгаарлахын тулд өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн техникийг боловсруулсан (аналитик багана Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 мкм 2.1 × 10 мм; уусгагч ацетонитрил: ионгүйжүүлсэн ус: аммонийн ацетат; градиент горим).

Ном зүйн холбоос