Testsysteme hergestellt von NPO Diagnostic Systems LLC. Was ist ELISA? Enzymimmunoassay-Methode: Wesen, Prinzip, Nachteile

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Hersteller: Diagnosesysteme

Land Russland

Einheit Maße: eingestellt

Verpackungsart: Karton

Artikel: L-1823

Beschreibung

Enzymimmunoassay-Testsystem zum Nachweis von Antikörpern der Klassen G, M und A gegen Treponema pallidum (T. pallidum) in menschlichem Blutserum (Plasma) und Liquor cerebrospinalis zum Zwecke der Syphilis-Diagnose, ein kompletter Reagenziensatz für 96x2-Bestimmungen, geeignet für manuelle Methoden und automatische Testanalysatoren. Die Methode basiert auf dem „Trap“-Prinzip, das darin besteht, dass spezifische antitreponemale Antikörper aller in der Probe vorhandenen Klassen gleichzeitig an rekombinante Antigene binden – Analoga immundominanter Proteine ​​von T. pallidum, die in den Vertiefungen der Platte fixiert sind. und auf die gleichen mit Peroxidase Meerrettich markierten Antigene, wenn Proben von menschlichem Blutserum (Plasma) oder Liquor cerebrospinalis und das Konjugat gemeinsam inkubiert werden. Eine Farbveränderung der TMB-haltigen Substrat-Chromogen-Mischung bei Zugabe zu den Vertiefungen der Platte weist auf das Vorhandensein spezifischer Antikörper gegen Treponema pallidum in den Testproben hin

Der Nachweis von Antikörpern gegen Treponema pallidum spielt eine wichtige Rolle bei der Diagnose der Syphilis, da T. pallidum nicht aus Zellkulturen isoliert werden kann und in latenten und späten Stadien der Erkrankung häufig keine Proben zur direkten Bestimmung des Erregers zur Verfügung stehen. Bei der Serodiagnose der Syphilis werden nicht-treponemale (RMP, RPR, VDRL) und treponemale (RPGA, RIF, ELISA) Tests eingesetzt. Enzymimmunoassay-Tests zur Bestimmung der Gesamtantikörper werden zum Massenscreening von Spenderblut und zur Diagnose von Syphilis im Rahmen eines Komplexes serologischer Tests eingesetzt. Nach erfolgreicher Therapie bleibt die Reaktivität von Treponemaltests in den meisten Fällen bestehen

Inhalt des Sets:
1. 96-Well-Faltplatte aus Polystyrol – 2 Stück,
2. Das Konjugat ist eine transparente gelbe Flüssigkeit.
3. Positivkontrolle – transparente rote Flüssigkeit,
4. Negativkontrolle – transparente grüne Flüssigkeit,
5. Waschlösung, Konzentrat, pH-Wert von 6,9 bis 7,6,
6. TMB ist eine transparente farblose Flüssigkeit,
7. Substratlösung – transparente farblose Flüssigkeit, pH ~4,2.
8. Stoppreagenz (0,2 M),
9. Gebrauchsanweisung und Qualitätszertifikat.
Lagerbedingungen: Bei einer Temperatur von +2...8°C ist Einfrieren nicht akzeptabel.
Die Haltbarkeit beträgt 15 Monate ab dem auf dem Kit-Etikett angegebenen Produktionsdatum.
Einhaltung der Anforderungen der TU 9398-182-05941003-2010.
Registriert bei Roszdravnadzor.

A.P. RITE, T.I. ULANOVA
LLC „Forschungs- und Produktionsvereinigung „Diagnosesysteme“,

Nizhny Novgorod
ELISA-IMMUNOTESTSYSTEME „DS-ELISA-HBeAg“ und „DS-ELISA-anti-HBe“ ZUR SPEZIFISCHEN DIAGNOSE UND VORHERSAGE DER ERGEBNISSE VON AKUTER UND CHRONISCHER HEPATITIS B
Hepatitis B ist eine virale Infektionskrankheit, die durch einen schweren Verlauf gekennzeichnet ist

entzündliche Leberschädigung. Etwa 1 % der Todesfälle ereignen sich in

akute Phase der Krankheit, in 4-10 % der Fälle kommt es zu einem Übergang in eine chronische

Prozess mit der möglichen Bildung einer nachfolgenden Leberzirrhose und Primärzirrhose

Hepatokarzinome.

Trotz des Trends zu einem Rückgang der Inzidenz der akuten Hepatitis B bildet sich weiterhin eine epidemiologisch gefährliche Gruppe von Patienten, bei denen erstmals eine chronische Virushepatitis diagnostiziert wird, sowie eine Gruppe von Trägern des Krankheitserregers . Aufgrund der hohen Inzidenz von Hepatitis B in der Bevölkerung im gebärfähigen Alter sowie bei Jugendlichen bleibt die Prognose ungünstig.

Daher sind die Themen Behandlung, Prävention und Diagnose von Hepatitis B jetzt besonders relevant. Derzeit werden enzymgebundene Immunosorbent-Assay-Methoden häufig zum Nachweis von Markern dieser Infektion eingesetzt. Zu den wichtigsten serologischen Markern von HBV gehören E-Antigen (HBeAg) und Antikörper gegen E-Antigen (Anti-HBe). HBeAg wird mit einer hohen Blutkontamination in Verbindung gebracht, was auf eine aktive Replikation des Hepatitis-B-Virus (HBV) hinweist. Es wurde festgestellt, dass hohe HBeAg-Titer einer hohen DNA-Polymerase-Aktivität entsprechen und immer mit dem Nachweis vollständiger Dane-Partikel einhergehen. Wenn HBeAg-haltiges Serum in das Blut eines gesunden Menschen gelangt, ist das Infektionsrisiko um viele Größenordnungen höher als nach einer Serokonversion.

Bei akuter Hepatitis B wird HBeAg im Blut in den frühen Stadien des Infektionsprozesses, bereits bei den ersten klinischen Manifestationen der Krankheit, nachgewiesen und liegt eine Woche hinter dem Auftreten von HBsAg zurück. Akute Hepatitis B (AHB) mit zyklischem Verlauf ist durch eine kurzfristige Zirkulation von HBeAg gekennzeichnet. Bald, nach 2-3 Wochen der Ikterusperiode, tritt Anti-HBe auf, was es ermöglicht, einen günstigen Verlauf der Krankheit vorherzusagen.

Anti-HBe zirkuliert 2–5 Jahre im Blut, seltener mehrere Monate.

Der Beginn der HBeAg-antiHBe-Serokonversion markiert einen starken Rückgang der Aktivität

infektiöser Prozess. Der Nachweis von HBeAg im Blut von Patienten nach 2 Monaten Krankheit weist auf die Chronizität des pathologischen Prozesses hin. In diesem Fall kann sich Anti-HBe erst viele Jahre nach dem Auftreten von Antikörpern gegen HBcAg bilden oder überhaupt nicht nachgewiesen werden.

Das Auftreten von Anti-HBe kann einen ungünstigen prognostischen Wert haben

akute Phase von HBV in schweren Formen, die einer Mutation in der Präkernzone mit entspricht

Bildung des HBV-„e-“-Stamms.

Das Ziel dieser Arbeit war es, hochsensibel und spezifisch zu entwickeln

Enzymimmunoassay-Testsysteme zum Nachweis von HBeAg und Anti-HBe und zur Beurteilung ihrer Haupteigenschaften.

Materialen und Methoden.

1. Enzymimmunosorbens-Testsystem „DS-ELISA-HBeAg“. Gültiger Prüfungsbeginn

sind polyklonale Ziegen-Antikörper gegen rekombinantes HBeAg, hergestellt von NPO Diagnostic Systems, Nischni Nowgorod, adsorbiert an der Festphase, und ein Konjugat, das aus polyklonalen Ziegen-Antikörpern gegen rekombinantes HBeAg, markiert mit Meerrettichperoxidase, hergestellt von NPO Diagnostic Systems, Nischni Nowgorod, besteht. Das Analyseschema stellt ein einstufiges „Sandwich“ dar. Die Gesamtreaktionszeit beträgt 1,5 Stunden. Die Serumprobe wird unverdünnt analysiert.

2. Enzymimmunosorbens-Testsystem „DS-ELISA-anti-HBe“. Die Grundlage des Tests ist

rekombinantes HBeAg (AHBV 102), hergestellt von NPO Diagnostic Systems,

Nischni Nowgorod, an der Festphase sorbiert und Anti-IgG-Konjugat mit Meerrettichperoxidase, hergestellt von Sorbent Service, Moskau. Die Reaktion erfolgt in zwei Stufen. Das Testserum wird dem immobilisierten Antigen in einer 1/10-Verdünnung zugesetzt und nach Inkubation und Entfernung ungebundener Komponenten werden spezifische Immunkomplexe mithilfe von mit Meerrettichperoxidase markierten monoklonalen Maus-Antikörpern gegen menschliches IgG nachgewiesen.

3. Zur Bewertung der entwickelten Testsysteme wurden 2178 Serumproben verwendet

Blut. Davon waren 480 Serumproben von gesunden Spendern. 1680 Proben repräsentieren

sind Blutserumproben, die verschiedene Marker des Hepatitis-B-Virus enthalten.

Im Laufe der Zeit wurden 18 Proben von Patienten mit der klinischen Diagnose einer akuten Virushepatitis B entnommen. Zuvor wurden alle Proben auf das Vorhandensein von HBsAg, HBeAg, Anti-HBe und Anti-HBc mit Testsystemen getestet, die von NPO Diagnostic Systems, Nischni Nowgorod, hergestellt wurden: „ELISA-HBsAg/m“, „DS-ELISA-HBeAg“, „ DS-ELISA-anti-HBe“, „ELISA-anti-HBc“.

4. Eine vergleichende Bewertung der entwickelten Testsysteme wurde mit durchgeführt

kommerzielles Medikament „Monolisa HBe“, hergestellt von BIO-RAD, Frankreich;

Resultate und Diskussion. NPO „Diagnostic Systems“ hat zwei neue Diagnosekits entwickelt: „DS-ELISA-HBeAg“ und „DS-ELISA-anti-HBe“. Das Testsystem „DS-ELISA-HBeAg“ ist für den Nachweis des E-Antigens des Hepatitis-B-Virus im menschlichen Serum (Plasma) mithilfe eines enzymgebundenen Immunosorbens-Assays konzipiert und kann zur spezifischen Diagnostik zur Bestimmung der Aktivität des Erregers eingesetzt werden Prozess, der den Schweregrad und das Ergebnis von Hepatitis B vorhersagt.

Das Testsystem „DS-ELISA-anti-HBe“ ist für den Nachweis von IgG-Antikörpern gegen das E-Antigen des Hepatitis-B-Virus im menschlichen Blutserum (Plasma) konzipiert und kann

Wird zur Vorhersage des Verlaufs des Infektionsprozesses und zur Überwachung der Hepatitis-B-Therapie verwendet.

Um die Spezifität der neuen Tests zu untersuchen, wurde die Verteilung bewertet

optische Dichte (OD) von enthaltenden und nicht enthaltenden Blutserumproben

HBeAg oder Anti-HBe. Es wurden Blutserumproben von gesunden Spendern und Blutserumproben verwendet, die auf verschiedene Marker des Hepatitis-B-Virus selektiert wurden.

Bluttransfusionsstationen. Die Ergebnisse der Studie zeigten eine deutliche Trennung der beiden Populationen. Die OD-Werte von Serumproben, die kein HBeAg enthielten, lagen zwischen 0,011 und 0,111, und der Hauptpeak von Serumproben, die HBeAg enthielten, lag zwischen 2,186 und 3,186 (Abbildung 1a).

Abb.1a. Verteilung der OD von Serumproben mit und ohne HBeAg im Testsystem „DS-ELISA-HBeAg“.
Der Peak, der der Gruppe von Seren mit einer niedrigen OD (0,3–0,6) entspricht, besteht wahrscheinlich aus Serumproben, die in den frühen Stadien des Infektionsprozesses entnommen wurden.

Bereits während der Inkubationszeit werden HBsAg und HBeAg auf natürliche Weise im Blut von Patienten registriert, was ihre potenzielle epidemiologische Gefahr bestätigt.

Optischer Dichtebereich von Serumproben, die kein Anti-HBe enthalten

lag im Bereich von 0,002 bis 0,122, und der Hauptpeak-OD von Serumproben, die Anti-HBe enthielten, lag im Bereich von 2,431 bis 3,231 (Abbildung 1b).

Reis. 1b. Verteilung der OD von Serumproben mit und ohne Anti-HBe im Testsystem „DS-ELISA-anti-HBeAg“.
Die Verteilungsmerkmale der OD von Anti-HBe-positiven Proben wurden untersucht

Seren mit ( N=78) und enthält kein HBsAg ( N=56).


Reis. 2a. HBe-positive Serumproben mit HBsAg im Testsystem „DS-ELISA-anti-HBe“.

Abb.2b. Merkmale der OD-Verteilung von Anti-HBe-positiven Serumproben, die kein HBsAg enthalten, im Testsystem „DS-ELISA-Anti-HBe“.
Die optischen Dichten von 87 % der Anti-HBe-positiven Serumproben, die kein HBsAg enthielten, lagen zwischen 0,41 und 0,81 (Abbildung 2b). Darüber hinaus hatten nur 14 % der Anti-HBe-positiven Serumproben, die HBsAg enthielten, eine OD in diesem Bereich (Abbildung 2a). Es ist bekannt, dass es in der Phase der späten Rekonvaleszenz mit negativer Reaktivität gegenüber HBsAg zu einer allmählichen Abnahme der Antikörpertiter gegen HBeAg kommt (Abbildung 2b). Daher ist es möglich, dass die vorherrschende Konzentration an Anti-HBe-positiven Proben einer OD von weniger als 0,8 entsprach.

Die erhaltenen Daten zeigen die Zuverlässigkeit der Trennung von Positiv und

negative Blutserumproben, unabhängig vom Stadium der Erkrankung. Die Sensitivität und Spezifität der Testsysteme „DS-ELISA-HBeAg“ und „DS-ELISA-antiHBe“ wurden im Vergleich zum „Monolisa HBe“-Test (BIORAD, Frankreich) untersucht (Tabelle 1).

Tabelle 1
Vergleichende Eigenschaften von Sensitivität und Spezifität

Testsysteme DS-ELISA-HBeAg und DS-ELISA-antiHB

Die in Tabelle 1 dargestellten Daten zeigen eine 100 %ige Übereinstimmung zwischen den Ergebnissen.

Es ist bekannt, dass die kombinierte Indikation von HBeAg und Anti-HBe, insbesondere deren quantitative Bewertung, eine zusätzliche prognostische Bedeutung hat. Ein schneller Anstieg des Anti-HBe-Titers kennzeichnet eine aktive humorale Immunantwort und eliminiert praktisch die Gefahr einer Chronifizierung. Wir analysierten Veränderungen im HBeAg/Anti-HBe-Gehalt in Blutserumproben von Patienten mit der klinischen Diagnose „akute Virushepatitis B“ (Tabelle 2).

Tabelle 2
Dynamik der HBeAg/Anti-HBe-Serokonversion bei Patienten mit HBV

* ab Aufnahme ins Krankenhaus
Alle Serumproben wurden auf das Vorhandensein serologischer Marker getestet

OGV: HBsAg, Anti-HBc, Anti-HBc-IgM. Der Beobachtungszeitraum lag zwischen 13 und 38 Tagen. Bei den Patienten Nr. 1, Nr. 2 und Nr. 6 wurde Anti-HBe vor dem Hintergrund einer Abnahme des HBeAg-Titers nachgewiesen. Bei den Patienten Nr. 3 und Nr. 4 trat Anti-HBe auf, nachdem HBeAg am 21. bzw. 8. Tag aus dem Blutserum verschwunden war. Die Analyse des HBeAg-Nachweises im Blutserum von Patient Nr. 5 bei der Aufnahme ins Krankenhaus ergab ein negatives Ergebnis. Gleichzeitig wurde bereits am ersten Untersuchungstag eine Umstellung auf Anti-HBe registriert.

Alle Probanden zeigten eine Tendenz zu einem Anstieg des Antikörpertiters gegen HBeAg in

Blutserum, das es ermöglicht, eine günstige klinische Dynamik vorherzusagen

Manifestationen eines akuten respiratorischen Syndroms und schnelle Genesung.

Die Untersuchung der neuen Testsysteme zeigte deren hohe diagnostische Zuverlässigkeit. Die Vergleichsergebnisse von DS-ELISA-HBeAg und DS-ELISA-antiHBe zeigten eine 100-prozentige Übereinstimmung mit dem Monolisa-HBe-Test.

Bei der Untersuchung von Serumproben von Patienten mit Hepatitis B in dynamischen Tests

bestätigte hohe Sensitivität und Spezifität.

Die kurze Inkubationszeit der Testproben und des Konjugats (1 Stunde) ermöglicht es, in kürzester Zeit die richtige Taktik zur Durchführung therapeutischer Maßnahmen zu ermitteln. Die erstellten Testsysteme sind einfach anzuwenden und wirtschaftlich (50 μl Serum werden zur Bestimmung von HBeAg und 10 μl Serum zur Bestimmung von Anti-HBe benötigt). Die hohen Qualitätsmerkmale der Tests ermöglichen einen erfolgreichen Einsatz bei der Vorhersage des Infektionsverlaufs und der Therapieüberwachung bei Hepatitis B.
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Veröffentlicht: J. „Klinische Labordiagnostik“ – 2005.-Nr. 6-P.-34-37

Stichworte

Die epidemiologische Situation bezüglich der HIV-Infektion in der Russischen Föderation bleibt äußerst angespannt, was die Suche nach neuen, wirksameren und kostengünstigeren Lösungen zur Bekämpfung der Epidemie erfordert. Durch die Einbeziehung von Laborstudien mit einem Testsystem zur Bestimmung der Dauer einer HIV-Infektion in die Routinepraxis der epidemiologischen Überwachung wird es möglich, die Häufigkeit früher Infektionsfälle bei neu identifizierten HIV-positiven Personen zu bestimmen. Die Analyse dieses Kriteriums auf Bevölkerungsebene wird dazu beitragen, die Wirksamkeit der in einem bestimmten Gebiet durchgeführten Präventions- und Antiepidemiemaßnahmen objektiv zu beurteilen. Die Erhöhung der Objektivität bei der Bestimmung der Zeitspanne seit der HIV-1-Infektion mit dem Testsystem DS-ELISA-HIV-AT-SROC bietet die Möglichkeit, die in epidemiologischen Untersuchungen gewonnenen Ergebnisse zur genaueren und vollständigeren Identifizierung von Kontaktpersonen zu nutzen. Die Bestimmung der wahrscheinlichen Dauer der Infektion kann auch bei der Entscheidung über die Verschreibung einer antiretroviralen Therapie als zusätzliche Studie zur Überwachung der HIV-Arzneimittelresistenz erforderlich sein. Ziel dieser Arbeit war es, die Wirksamkeit des neuen Testsystems DS-ELISA-HIV-AT-SROC zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer HIV-1-Infektion zu bestimmen. Untersucht wurden Blutserumproben (Plasma) von HIV-infizierten Personen mit epidemiologisch gesicherter Infektionsperiode (n = 281) und Proben kommerzieller Serokonversionspanels. Die Ergebnisse der Studie zeigten, dass die Wahrscheinlichkeit, die Dauer einer HIV-1-Infektion korrekt zu bestimmen, bei Proben von Personen mit der wahrscheinlichsten Infektionsperiode bei 95 % lag, bei Proben aus kommerziellen Serokonversionspanels bei 100 %. Die erhaltenen Daten zeigten die hohe Effizienz des DS-ELISA-HIV-AT-SROC-Testsystems bei der Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1, was uns in Kombination mit der Geschwindigkeit und Einfachheit des Verfahrens eine Empfehlung ermöglicht es für den Einsatz in der Laborpraxis.

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  2014 / Trokhimchuk T. Yu., Serdyuk V. G., Ganova L. A., Gorlov Yu. I., Mikhalap Yu. I., Spivak N. Ya.

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  2014 / Zaitseva Natalya Nikolaevna, Efimov Evgeny Igorevich, Nosov Nikolay Nikolaevich, Parfenova Olga Vladimirovna, Peksheva Olga Yuryevna

• Moderne molekulargenetische Forschungsmethoden zur Charakterisierung von HIV-1-Isolaten infizierter Patienten in Justizvollzugsanstalten

  2015 / Zaitseva Natalya Nikolaevna, Peksheva Olga Yurievna, Parfenova Olga Vladimirovna, Butina Tatyana Yurievna, Kuznetsova Irina Vasilievna

• Diagnose einer HIV-Infektion bei Kindern in den ersten Lebensmonaten von HIV-infizierten Müttern

  2012 / Bogoslovskaya Elena Vladimirovna, Shipulin G. A.

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  2012 / Uryvaev L.V., Bobkova M.R., Lapovok I.A.

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  2017 / Polyanskaya Larisa Nikolaevna

• Humanes Immundefizienzvirus und sexuell übertragbare Infektionen bei gefährdeten Bevölkerungsgruppen in Kasachstan

  2015 / Trumova Zh.Z., Akyshbaeva Kulbarshin Sabyrovna, Dzhumabaeva S.M.

• Merkmale der frühen Neurosyphilis bei HIV-infizierten Patienten

  2018 / Shprakh Vladimir Viktorovich, Kostina Ulyana Sergeevna

• Natürlicher Verlauf einer HIV-Infektion bei Kindern unter Berücksichtigung des Infektionswegs

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Die epidemiologische Situation in Bezug auf die HIV-Infektion in Russland bleibt äußerst angespannt, was die Suche nach neuen, effizienteren und kostengünstigeren Lösungen zur Bekämpfung der Epidemie erfordert. Die Einbeziehung von Laborstudien unter Verwendung eines Testsystems zur Bestimmung der Entfernung einer HIV-Infektion in routinemäßige Überwachungspraktiken wird es ermöglichen, die Häufigkeit des Auftretens früher Infektionsfälle bei neu diagnostizierten HIV-positiven Personen zu bestimmen. Die Analyse dieses Kriteriums auf Bevölkerungsebene wird dazu beitragen, die Wirksamkeit der in einem bestimmten Gebiet durchgeführten Präventions- und Kontrollaktivitäten objektiv zu bewerten. Die Erhöhung der Objektivität bei der Bestimmung der Zeit, die seit dem Zeitpunkt der HIV-1-Infektion verstrichen ist, durch den Einsatz des Testsystems DSEIA-HIV-Ab-TERM bietet die Möglichkeit, die gewonnenen Ergebnisse in der epidemiologischen Untersuchung zu nutzen genauere und vollständigere Identifizierung von Kontaktpersonen. Die Bestimmung des wahrscheinlichen Infektionszeitraums kann auch bei der Lösung der Frage nach der Verschreibung einer antiretroviralen Therapie als ergänzende Studie zur Überwachung der HIV-Arzneimittelresistenz erforderlich sein. Ziel dieser Arbeit war es, die Wirksamkeit des neuen Testsystems DS-EIAHIV-Ab-TERM zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer HIV-1-Infektion zu bestimmen. Untersucht wurden Serumproben (Plasma) des Blutes von HIV-infizierten Personen mit epidemiologisch gesichertem Infektionszeitpunkt (n = 281) und Proben kommerzieller Serokonversionspanels. Die Ergebnisse der durchgeführten Studie zeigten, dass die Wahrscheinlichkeit einer korrekten Erkennung der Entfernung einer HIV-1-Infektion bei Proben von Personen mit dem wahrscheinlichsten Zeitpunkt der nachgewiesenen Infektion 95 % betrug, bei Proben kommerzieller Serokonversionspanels 100 %. Die Daten zeigten die hohe Wirksamkeit des Testsystems DS-„EIAHIV-Ab-TERM“ bei der Bestimmung des wahrscheinlichsten Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1, was in Kombination mit der Geschwindigkeit und Einfachheit des Verfahrens eine Empfehlung ermöglicht es für den Einsatz in der Laborpraxis.

UDC 616.98:578.828.6]-092:612.017.1.064]-078

Zagryadskaya Yu.E.1, Neshumaev D.A.2, Kokotyukha Yu.A.2, Meirmanova E.M.2, Olkhovsky I.A.3, Puzyrev V.F.1, Burkov AN.1, Ulanova T.I.1

Evaluierung des neuen Testsystems ds-ifa-vich-at-srok zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1)

1OOO NPO Diagnostic Systems, 603093, Nischni Nowgorod; 2Krasnojarsker Regionalzentrum für Prävention und Bekämpfung von AIDS, 660049, Krasnojarsk; 3FGBU „Hämatologisches Forschungszentrum des Gesundheitsministeriums Russlands“ (Zweigstelle Krasnojarsk), Krasnojarsk

Die epidemiologische Situation bezüglich der HIV-Infektion in der Russischen Föderation bleibt äußerst angespannt, was die Suche nach neuen, wirksameren und kostengünstigeren Lösungen zur Bekämpfung der Epidemie erfordert. Durch die Einbeziehung von Laborstudien mit einem Testsystem zur Bestimmung der Dauer einer HIV-Infektion in die Routinepraxis der epidemiologischen Überwachung wird es möglich, die Häufigkeit früher Infektionsfälle bei neu identifizierten HIV-positiven Personen zu bestimmen. Die Analyse dieses Kriteriums auf Bevölkerungsebene wird dazu beitragen, die Wirksamkeit der in einem bestimmten Gebiet durchgeführten Präventions- und Antiepidemiemaßnahmen objektiv zu beurteilen. Die erhöhte Objektivität bei der Bestimmung der Zeitspanne seit der HIV-1-Infektion mit dem Testsystem DS-ELISA-HIV-AT-SROC bietet die Möglichkeit, die in epidemiologischen Untersuchungen gewonnenen Ergebnisse zur genaueren und vollständigeren Identifizierung von Kontaktpersonen zu nutzen. Die Bestimmung der wahrscheinlichen Dauer der Infektion kann auch bei der Entscheidung über die Verschreibung einer antiretroviralen Therapie als zusätzliche Studie zur Überwachung der HIV-Arzneimittelresistenz erforderlich sein.

Ziel dieser Arbeit war es, die Wirksamkeit des neuen Testsystems DS-ELISA-HIV-AT-SROC zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer HIV-1-Infektion zu bestimmen.

Untersucht wurden Blutserumproben (Plasma) von HIV-infizierten Personen mit epidemiologisch gesicherter Infektionsperiode (n = 281) und Proben kommerzieller Serokonversionspanels. Die Ergebnisse der Studie zeigten, dass die Wahrscheinlichkeit, die Dauer einer HIV-1-Infektion korrekt zu bestimmen, bei Proben von Personen mit der wahrscheinlichsten Infektionsperiode bei 95 % lag, bei Proben aus kommerziellen Serokonversionspanels bei 100 %. Die erhaltenen Daten zeigten die hohe Effizienz des DS-ELISA-HIV-AT-SROC-Testsystems bei der Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1, was uns in Kombination mit der Geschwindigkeit und Einfachheit des Verfahrens eine Empfehlung ermöglicht es für den Einsatz in der Laborpraxis.

Schlüsselwörter: frühe HIV-Infektion; langfristige HIV-Infektion; Differenzierung der frühen HIV-Infektion; Dauer der HIV-Infektion; HIV-1.

Zum Zitieren: Epidemiologie und Infektionskrankheiten. 2015; 20 (3): 23-27. Zagryadskaya Yu.E.1, Neshumaev D. A2, Kokotyukha Yu.A.2, Meyrmanova E.M.2, Olkhovskiy I.A.3, Puzyrev V.F.1, Burkov A.N.1, Ulanova T.I.“\ BEWERTUNG EINES NEUEN „DS-EIA- HIV- „AB-TERM“-TEST ZUR BESTIMMUNG DES WAHRSCHEINLICHEN ZEITPUNKTS EINER INFEKTION MIT DEM HUMANEN IMMUNDEFEKTIVITÄTSVIRUS -1 (HIV-1)

JNPO „Diagnostic Systems“, 22, Yablonevaya Str. , Nischni Nowgorod, Russische Föderation, 603093

2Krasnojarsker Regionalzentrum für AIDS-Prävention, 45, Karla Marksa Str., Krasnojarsk, Russische Föderation, 660049

3Hämatologisches Wissenschaftszentrum (Zweigstelle Krasnojarsk), 50, Akademgorodok, Krasnojarsk, Russische Föderation, 660036

Die epidemiologische Situation in Bezug auf HIV-Infektionen in Russland bleibt äußerst angespannt, was die Suche nach neuen, effizienteren und kostengünstigeren Lösungen zur Bekämpfung der Epidemie erfordert. Die Einbeziehung von Laborstudien unter Verwendung eines Testsystems zur Bestimmung der Entfernung

Die Analyse der HIV-Infektion in routinemäßigen Überwachungspraktiken wird es ermöglichen, die Häufigkeit des Auftretens früher Infektionsfälle bei neu diagnostizierten HIV-positiven Personen zu bestimmen. Die Analyse dieses Kriteriums auf Bevölkerungsebene wird dazu beitragen, die Wirksamkeit der in einem bestimmten Gebiet durchgeführten Präventions- und Kontrollaktivitäten objektiv zu bewerten. Die Erhöhung der Objektivität bei der Bestimmung der seit dem Zeitpunkt der HIV-1-Infektion verstrichenen Zeit durch den Einsatz des Testsystems DS-EIA-HIV-Ab-TERM bietet die Möglichkeit, die gewonnenen Ergebnisse gezielt in der epidemiologischen Untersuchung zu nutzen einer genaueren und vollständigen Identifizierung von Kontaktpersonen. Die Bestimmung des wahrscheinlichen Infektionszeitraums kann auch bei der Lösung der Frage nach der Verschreibung einer antiretroviralen Therapie als ergänzende Studie zur Überwachung der HIV-Arzneimittelresistenz erforderlich sein. Ziel dieser Arbeit war es, die Wirksamkeit des neuen Testsystems DS-EIA-HIV-Ab-TERM zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer HIV-1-Infektion zu bestimmen. Untersucht wurden Serumproben (Plasma) des Blutes von HIV-infizierten Personen mit epidemiologisch gesichertem Infektionszeitpunkt (n = 281) und Proben kommerzieller Serokonversionspanels. Die Ergebnisse der durchgeführten Studie zeigten, dass die Wahrscheinlichkeit einer korrekten Erkennung der Entfernung einer HIV-1-Infektion für Proben von Personen mit dem wahrscheinlichsten Zeitpunkt der nachgewiesenen Infektion 95 % betrug, für Proben kommerzieller Serokonversionspanels 100 %. Die Daten zeigten die hohe Wirksamkeit des Testsystems DS-„EIA-HIV-Ab-TERM“ bei der Bestimmung des wahrscheinlichsten Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1, was in Kombination mit der Geschwindigkeit und Einfachheit des Verfahrens ermöglicht um es für den Einsatz in der Laborpraxis zu empfehlen.

Schlüsselwörter: frühe HIV-Infektion; langfristige HIV-Infektion; Differenzierung der frühen HIV-Infektion; Entfernung der HIV-Infektion; HIV-1.

Zitat: Epidemiologiya i Infektsionnye Bolezni. 2015; 20(3): 23-27. (Auf Russisch.)

Für Korrespondenz: Yulia Evgenievna Zagryadskaya, E-Mail: [email protected]

Die Ausbreitung von Infektionen durch das Humane Immundefizienzvirus (HIV) bleibt in der modernen Welt ein dringendes Problem. Das epidemiologische Überwachungssystem, einschließlich Labordiagnostik, Behandlung und Präventionsmaßnahmen mit breiter Abdeckung der Bevölkerung, ist das wichtigste Mittel zur Bekämpfung der HIV-Infektion.

Der in der Russischen Föderation übernommene Standardalgorithmus zur Diagnose einer HIV-Infektion und die verfügbaren Labortechnologien ermöglichen es uns nicht, den wahrscheinlichen Zeitraum einer HIV-Infektion objektiv zu bestimmen. Allerdings könnte die Identifizierung echter Fälle einer frühen HIV-Infektion eine nützliche Maßnahme sein, um grundlegende epidemiologische Parameter wie Inzidenz oder Prävalenz zu ergänzen. Dieser Indikator wird es uns ermöglichen, die Geschwindigkeit der Epidemieentwicklung im Vergleich zu allgemein anerkannten Indikatoren genauer und schneller einzuschätzen. Die gewonnenen Daten können als Kriterium zur Bestimmung der Wirksamkeit präventiver und antiepidemischer Maßnahmen in einem bestimmten Gebiet betrachtet werden. Um die Dynamik des Infektionsprozesses beurteilen zu können, ist es notwendig, nicht so sehr die Gesamtzahl der infizierten Patienten (oder Indikatoren für die Prävalenz der Infektion und die Prävalenz der Bevölkerung) zu kennen, sondern vielmehr die Zahl der Neuinfizierten über einen bestimmten Zeitraum Zeitspanne. Aus der Arbeit von J. Eaton und T. Hallett ist bekannt, dass die Dynamik der Vorfälle nicht mit der Prävalenz der HIV-Infektion in der Bevölkerung korreliert.

Darüber hinaus können objektive Informationen über die voraussichtliche Infektionsdauer durchaus eine wesentliche Hilfe bei der epidemiologischen Untersuchung von Infektionswegen und der rechtzeitigen Identifizierung der maximalen Anzahl von Kontaktpersonen sein. Es hat sich gezeigt, dass die Hälfte aller HIV-Infektionsfälle bei Personen in einem frühen Infektionsstadium auftreten, was die Strategie eines frühzeitigen Einsatzes einer antiretroviralen Therapie unterstützt.

Darüber hinaus kann die molekulargenetische Überwachung im epidemiologischen Überwachungssystem, ergänzt durch die Erforschung der Infektionsdauer, es uns ermöglichen, von der Ebene der phylogenetischen Analyse von HIV-Subtypen und resistenten Stämmen auf die Ebene phylodynamischer Studien zu gelangen.

In den letzten Jahren konnten Labordienste im Ausland die Häufigkeit neuer Infektionsfälle (Inzidenz) ermitteln. Es wurden Tests entwickelt und werden weiterhin verbessert, um eine frühe HIV-Infektion zu unterscheiden. Zur Auswertung solcher Tests wurden Sammlungen biologischer Proben angelegt, die ständig erweitert werden.

Im Zusammenhang damit steht die Entwicklung und Nutzung inländischer Testgeräte in der Arbeit von AIDS-Zentren

Systeme, die eine Differenzierung früher HIV-Infektionen ermöglichen, werden positive wirtschaftliche und praktische Auswirkungen haben. Der Einsatz des entwickelten Tests in der klinischen Praxis kann zu einer nützlichen Informationsquelle und einem objektiven Kriterium für die Beurteilung der Wirksamkeit der Umsetzung staatlicher und regionaler Gesundheitsprogramme zur Prävention, Diagnose und Behandlung von HIV-Infektionen werden.

Ziel der Studie war es, die Wirksamkeit des entwickelten Testsystems DS-ELISA-HIV-AT-SROC zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer HIV-1-Infektion zu bewerten.

Materialen und Methoden

Die Arbeiten wurden bei NPO Diagnostic Systems LLC (Nischni Nowgorod) durchgeführt. Blutserumproben (Plasmaproben) von HIV-infizierten Personen mit epidemiologisch nachgewiesenen Infektionsperioden (n = 281; Gruppe M, Subtyp A) wurden vom Krasnojarsker Regionalzentrum für die Prävention und Kontrolle von AIDS (Krasnojarsk) bereitgestellt. Die wahrscheinliche Dauer der Infektion wurde durch Untersuchung von Blutserumproben (Plasma) von Patienten bestimmt, die sich wiederholten Untersuchungen in kurzen Zeitintervallen (2–4 Wochen) unterzogen, entsprechend der Dynamik der Labormarker einer HIV-Infektion und unter Berücksichtigung der epidemiologischen Vorgeschichte und bei HIV-infizierten Patienten, die sich einer klinischen Untersuchung unterziehen. mit einer Behandlungsdauer von mehr als drei Jahren.

Parallel dazu wurden Proben von 33 kommerziellen Serokonversionspanels untersucht, die von Zeptometrix Corp. hergestellt wurden. und SeraCare Life Sciences (USA) (Gruppe M, Subtyp B). Darüber hinaus wurde die Möglichkeit der Untersuchung von Blutserumproben (Plasmaproben), die Antikörper gegen HIV-1 verschiedener Subtypen, einschließlich HIV-1-Gruppe O, enthalten, durch Testen von Proben der folgenden kommerziellen Panels bewertet: „Referenzpanel menschlicher Blutseren, die und enthalten.“ enthält keine Antikörper gegen HIV Typ 1 (Subtypen A, B, C) und Typ 2“ (Avicenna Medical Center, Russland) (außer Probe Nr. 24, die Antikörper gegen HIV-2 enthält); 1. internationales Anti-HIV-Referenzgremium (NIBSC-Code: 02/210) (Subtypen A, B, C, E) (außer Probe Nr. 5, die Antikörper gegen HIV-2 enthält); Anti-HIV Mixed Subtype Panel (MSP-HIV-001) (außer Proben Nr. 19, 20, die Antikörper gegen HIV-2 enthalten) und Blutserumproben (Plasma), die Antikörper gegen HIV-1 Gruppe O enthalten (Nr. 1342, K00175). , K00259; BioMex).

Das Wirkprinzip des entwickelten Testsystems besteht aus rekombinanten Antigenen, die den Strukturproteinen HIV-1 gp160 (env) und gp41 (env) der HIV-1-Gruppe O ähneln, hergestellt von NPO Diagnostic Systems LLC, adsorbiert auf Streifen einer faltbaren Polystyroltablette ; Konjugate sind rekombinante Antigene HIV-1 gp41 und HIV-1 Gruppe O, markiert mit Biotin, und Streptavidin, markiert mit Meerrettichperoxidase. Während der Entwicklung des Tests wurden HIV-1-Antigene ausgewählt, die über

die die größte diagnostische Bedeutung haben: gp160, das die immundominante Region von gp41 umfasst, und gp41 der HIV-1-Gruppe O. Das Analyseschema im DS-ELISA-HIV-AT-SROC-Testsystem ist ein zweistufiges „Sandwich“. Version eines Enzymimmunoassays (ELISA) mit schrittweiser Einführung von Konjugaten. Es wurde ein System zur visuellen Beurteilung der Einführung aller Komponenten und Proben entwickelt. Die Reaktionszeit beträgt weniger als zwei Stunden. Die Ergebnisse werden mit einem Spektralphotometer aufgezeichnet.

Das Konfidenzintervall wurde für die korrekte Bestimmung des Infektionszeitraums mithilfe des Testsystems mit einer Konfidenzwahrscheinlichkeit von 95 % mithilfe des R. Herbert Confidence Interval Calculator-Programms bewertet.

Resultate und Diskussion

Die im Testsystem implementierte Strategie basiert darauf, die quantitative und qualitative Zusammensetzung der Antikörper in der Probe abhängig von der Infektionsdauer zu verändern. Bei der Untersuchung von Blutserumproben (Plasmaproben) mittels ELISA wurde die optische Dichte (OD) nativer und verdünnter Proben bestimmt, die den Gehalt an HIV-spezifischen Antikörpern widerspiegelt. Basierend auf der Änderung der OD der Probe bei Verdünnung im Verhältnis zur OD der nativen Probe wurde entweder eine frühe oder eine langfristige HIV-Infektion festgestellt.

Die durchgeführten Studien zeigten die hohe Effizienz des entwickelten Testsystems DS-ELISA-HIV-AT-SROC. Mit der Empfindlichkeit von Tests der dritten Generation zum Nachweis von Antikörpern gegen HIV-1 konnte DS-ELISA-HIV-AT-SROC die Dauer der HIV-1-Infektion für alle Proben kommerzieller Serokonversionspanels korrekt bestimmen (Tabellen 1, 2).

Die Wahrscheinlichkeit, die Dauer einer HIV-1-Infektion korrekt zu bestimmen, lag bei Proben mit epidemiologisch nachgewiesenen Infektionsperioden bei 95 % (siehe Tabelle 2).

Es ist wichtig zu beachten, dass die Immunantwort auf HIV eines zufällig ausgewählten Individuums aus einer Population in manchen Fällen entweder hyper- oder hyperaktiv sein kann.

Tabelle 1

Ergebnisse der Tests von Serokonversionspanels in DS-ELISA-HIV-AT-SROC

Serokonversion – Tage ab 1. Anzahl positiver Proben im Panel / Gesamtzahl der Proben im Panel Testergebnis in

Blutentnahme-Paneltest zum Nachweis von Antikörpern gegen HIV-1/2, CE0483 DS-ELISA-HIV-AT-SROC DS-ELISA-HIV-AT-SROC

VV1 RYAV 914 31 5/5 5/5 Frühe HIV-1-Infektion

BB1 RYAV 916 35 2/6 2/6 Das Gleiche

BB1 RYAV 925 49 2/6 2/6 "

BB1 RYAV 929 28 3/7 3/7 "

BB1 RYAV 930 10 2/4 2/4 "

BB1 RYAV 931 42 4/9 4/9 "

BB1 RYAV 933 27 2/3 2/3 "

BB1 RYAV 934 11 3/3 3/3 "

BB1 RYAV 940 29 6/8 6/8 "

BB1 RYAV 941 25 3/6 3/6 "

BB1 RYAV 942 14 0/4 0/4 "

BB1 RYAV 944 16 2/6 2/6 "

BB1 RYAV 947 20 3/4 3/4 "

BB1 RYAV 951 19 1/6 1/6 "

BB1 RYAV 952 21 3/6 3/6 "

BB1 RYAV 955 14 2/5 2/5 "

BB1 RYAV 965 21 3/6 3/6 "

BB1 RYAV 966 51 3/10 3/10 "

BB1 RYAV 968 35 4/10 4/10 "

BB1 RYAV 969 77 3/10 3/10 "

ZMS NGU 6243 33 2/10 2/10 "

ZMS NGU 6247 30 1/10 1/10 "

ZMC NSU 9014 31 5/7 5/7 "

ZMC NSU 9017 35 3/6 3/6 "

ZMC NSU 9018 33 2/11 2/11 "

ZMC NSU 9021 57 2/17 2/17 "

ZMC NSU 9022 29 1/9 1/9 "

ZMC HIV 9030 54 1/16 1/16 "

ZMC HIV 9031 157 3/19 3/19 "

ZMC HIV 9032 55 7/14 7/14 "

ZMC HIV 9077 104 15/29 15/29 "

ZMC NSU 9079 95 15/25 15/25 "

ZMC HIV 12008 42 4/13 4/13 "

Die Gesamtzahl der positiven Proben...

reaktiv. Die Verteilung der allgemeinen Immunmerkmale in einer Population enthält immer Varianten, die nicht in das als normal angesehene Intervall passen. Aus diesem Grund kann es in manchen Fällen ungenau sein, den wahrscheinlichen Zeitpunkt einer Infektion anhand der Dynamik der Labormarker einer HIV-Infektion zu bestimmen. Es hat sich gezeigt, dass die Richtigkeit der Bestimmung des Infektionszeitraums für Proben mit der wahrscheinlichsten Dauer einer nachgewiesenen Infektion von bis zu 3 Monaten völlig konsistent ist

Tabelle 2

Korrektheit der Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitraums einer HIV-1-Infektion mithilfe von DS-ELISA-HIV-AT-SROC

Zahl Zahl ist korrekt. Richtigkeit der Bestimmung durch den DS-ELISA-Test

Proben Eine Gruppe von Proben, die den wahrscheinlichen Zeitpunkt der Infektion bestimmen

in der Probengruppe der HIV-1-Gruppe (mit einem Konfidenzniveau von 95 %) %*

Mit epidemiologischen bis zu 3 Monaten 81 81 100,00 (95,50-100,00)

logisch etabliert – 3–6 Monate 47 42 89,36 (77,41–95,37)

im Laufe der Zeit

HIV-1-Infektion 6–9 Monate 22 17 77,27 (56,56–89,88)

bis 9 Monate 150 140 93,33 (88,16-96,34)

9 Monate oder länger (CD4+-Wert unbekannt) 79 76 96,20 (89,42–98,70)

9 Monate oder länger (niedriger CD4+-Wert 52 51 98,08 (89,88–99,66)

(< 200 кл/мл)

9 Monate und mehr 131 127 96,95 (92,41-98,81)

Gesamtergebnis... 281 267 95,02 (91,81-97,01)

Serokonversion – Bis zu 157 Tage 117 117 100 (96,82–100,00)

Abschlusstafeln

Notiz. * - Es ist notwendig, den probabilistischen Charakter des bei Labortests ermittelten Infektionszeitraums zu berücksichtigen.

Die Daten stammen aus Proben mit einem genau festgelegten Zeitraum einer HIV-Infektion (d. h. aus Proben aus Serokonversionspanels) und betragen 100 %. Bei der Untersuchung von Proben aus der Gruppe „bis zu 9 Monate“ betrug die Übereinstimmung zwischen den Testergebnissen und den Ergebnissen der vorab festgelegten Infektionsdaten 93,33 %, für die Gruppe „Infektion über 9 Monate“ 96,95 %. Einer der Hauptgründe für falsche Ergebnisse in der Gruppe „Infektion vor 9 Monaten“ ist die individuelle Ausprägung der Immunantwort (schnelle Reaktion). Bei der Gruppe der Personen, die seit mehr als 9 Monaten infiziert sind, können die Gründe sowohl in den Merkmalen der Immunantwort (langsame Reaktion) als auch in der Seroreversion (aufgrund einer Behandlung oder einer schweren Immunschwäche in späteren Stadien der HIV-Infektion) liegen.

Beim Testen kommerzieller Panels „Referenzpanel menschlicher Blutseren, die Antikörper gegen HIV Typ 1 (Subtypen A, B, C) und Typ 2 enthalten und nicht enthalten“, NIBSC-Code: 02/210, MSP-HIV-001 und Proben Nr. 1342 , K00175, K00259, bereitgestellt von BioMex, wurde die Möglichkeit der Untersuchung von Blutplasmaproben, die Antikörper gegen HIV-1 verschiedener Subtypen und HIV-1-Gruppe O enthalten, im DS-ELISA-HIV-AT-SROC bestätigt.

Abschluss

Die erhaltenen Daten deuten darauf hin, dass das entwickelte Enzymimmunoassay-Testsystem es ermöglicht, mit hoher Wahrscheinlichkeit zwischen der frühen Serokonversionsphase einer HIV-Infektion und der späteren Zeit nach der Infektion zu unterscheiden. Die Verfügbarkeit der Forschung zur Infektionsdauer eröffnet die Möglichkeit, die gewonnenen Informationen nicht nur auf Bevölkerungsebene, sondern auch auf individueller Ebene zu nutzen. Die hohe Effizienz des DS-ELISA-HIV-AT-SROC-Testsystems, kombiniert mit der Geschwindigkeit und Einfachheit des Verfahrens, ermöglicht die erneute

empfehlen es für den Einsatz in der epidemiologischen und klinischen Praxis.

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Neshumaev Dmitry Aleksandrovich, Ph.D. Honig. Naturwissenschaften, Doktor der klinischen Labordiagnostik, Labor für bakteriologische und molekulargenetische Forschung, regionales AIDS-Zentrum; Kokotyukha Yulia Aleksandrovna, Ärztin für klinische Labordiagnostik im Labor für Enzymimmunoassay-Forschung des Regionalen AIDS-Zentrums; Meirmanova Elena Maratovna, Ärztin für klinische Labordiagnostik, Labor für Enzymimmunoassays, Regionales AIDS-Zentrum; Olkhovsky Igor Alekseevich, Ph.D. Honig. Sci., Direktor der Krasnojarsker Zweigstelle der föderalen Staatshaushaltsinstitution „Hämatologisches Forschungszentrum des Gesundheitsministeriums Russlands“; Puzyrev Vladimir Fedorovich, Ph.D. biol. Wissenschaften, Anfang Abt. Produktion rekombinanter Antigene und Konjugate durch NPO Diagnostic Systems LLC; Burkov Anatoly Nikolaevich, Doktor der Medizin. Wissenschaften, Prof., Generaldirektor von NPO Diagnostic Systems LLC; Ulanova Tatyana Ivanovna, Doktor der Biologie. Wissenschaften, Forschungsdirektor, LLC „NPO „Diagnostic Systems““

Inhaber des Patents RU 2515051:

Die Erfindung bezieht sich auf das Gebiet der Biotechnologie und Medizin. Ein enzymgebundenes Immunosorbens-Testsystem zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 der Gruppe O, im menschlichen Blutserum (Plasma). Das Testsystem umfasst ein Immunosorbens auf Basis von Antigenen des humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1 und HIV-1-Gruppe O env), eine Probenverdünnungslösung (SRS) und Nachweisreagenzien (Konjugate, Chromogen/Substrat). Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 der Gruppe O, im menschlichen Blutserum (Plasma) durch Untersuchung des Blutserums des Patienten unter Verwendung des beschriebenen Enzyms -gebundenes Immunosorbens-Testsystem. Die Erfindung ermöglicht es, schnell und einfach den wahrscheinlichen Zeitpunkt einer HIV-Infektion zu bestimmen. 2 n.p. Dateien, 4 Tabellen, 2 Pr.

Die ERFINDUNG betrifft den Bereich Biotechnologie und Medizin. Und es kann verwendet werden, um den wahrscheinlichen Zeitpunkt einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 der Gruppe O, im menschlichen Serum (Plasma) zu bestimmen.

Die Ausbreitung der HIV-Infektion bleibt in der modernen Welt ein echtes Problem. Da eine rechtzeitige und qualitativ hochwertige Diagnose ein echtes Mittel zur Eindämmung der Ausbreitung einer HIV-Infektion ist, ist die Entwicklung eines wirksamen Testsystems zur Bestimmung der wahrscheinlichen Infektionsdauer eine wichtige Aufgabe der modernen Gesellschaft.

Eine Analyse des Stands der Technik hat gezeigt, dass es eine Reihe von Methoden und Tests gibt, die von verschiedenen Autoren vorgeschlagen wurden, um die Stadien einer HIV-Infektion mithilfe verschiedener Methoden zu bestimmen. Beispielsweise ist ein molekulargenetischer Test bekannt, der auf der Bestimmung der Viruslast des peripheren Blutes mithilfe der Polymerase-Kettenreaktionsmethode (PCR) basiert (Kravchenko A.V., Serebrovskaya L.V., Golokhvostova E.L. et al. Timazid in Kombination mit Chivid und Invirase in der komplexen Therapie). von Patienten mit HIV-Infektion. - Epidemiologie und Infektionskrankheiten. - 1998. - Nr. 5 - S. 51-52). Es gibt eine bekannte Methode zur Beurteilung der Stadien einer HIV-Infektion (Clinical Immunology and Allergology, herausgegeben von G. Lawlor Jr. - M.: Praktika, 2000. - S. 585-587), die in der Bestimmung des Serum-β-Spiegels besteht 2-Mikroglobulin. Es wird eine Methode zur Diagnose der Stadien einer HIV-Infektion beschrieben (V.V. Pokrovsky et al. „Klinische Diagnose und Behandlung der HIV-Infektion.“ - M.: GOU VUNMC RF, 2001. - S. 11), die in der Bestimmung der absoluten Zahl besteht von CD4+-Lymphozyten im peripheren Blut. Es gibt auch eine bekannte Methode zur Diagnose der Stadien einer HIV-Infektion, die darauf basiert, dass bei der Untersuchung des Blutserums eines Patienten mithilfe eines Enzymimmunoassays (ELISA) die optische Dichte (OD) der ursprünglichen Blutserumprobe bestimmt wird , was den Gehalt an HIV-spezifischen Antikörpern widerspiegelt, und die OD der ursprünglichen Serumprobe, die 10 Minuten lang mit 100 μl 3,5 M Natriumisothiocyanatlösung inkubiert wurde. Wenn der OP um 40 % oder weniger abnimmt, wird Stadium A diagnostiziert – generalisierte Lymphadenopathie; wenn der OP im Bereich von 40–60 % abnimmt – Stadium B – bakterielle Angiomatose, oropharyngeale Candidiasis usw., und wenn der OP um 60 abnimmt % oder mehr – Stadium C – AIDS (RU 2251701).

Somit ergab die Analyse des Stands der Technik, dass keine der vorhandenen Quellen als am nächsten kommendes Analogon zur beanspruchten Erfindung dienen kann, da sich alle diese Dokumente auf Methoden und Tests beziehen, die das Stadium der HIV-Infektion bestimmen, und keines davon Die beschriebenen Quellen enthalten technische Entscheidungen, die darauf abzielen, das wahrscheinliche Zeitintervall einer Infektion zu bestimmen. Die beanspruchte Erfindung betrifft ein Testsystem, das die voraussichtliche Dauer einer HIV-Infektion bestimmt. Die Analyse des Technologieniveaus ergab keine ähnlichen Lösungen zur Lösung des Problems.

Die vorliegende Erfindung beansprucht einen Satz von Reagenzien „DS-ELISA-HIV-AT-SROC“ zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 der Gruppe O, im menschlichen Blutserum ( Plasma). Der Test ist zur ergänzenden Testung HIV-positiver Proben mit bestätigtem positivem Ergebnis im Immunoblot vorgesehen. Es ist möglich, Proben mit einem unbestimmten oder negativen Immunoblot-Testergebnis zu untersuchen, in denen das Vorhandensein von HIV-RNA und/oder HIV-1-p24-Antigen bestätigt wird.

Die vorliegende Erfindung beansprucht auch ein Verfahren zur Verwendung dieses Reagenziensatzes „DS-ELISA-HIV-AT-SROC“, um den wahrscheinlichen Zeitpunkt einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 der Gruppe O, zu bestimmen. im Serum (Plasma) menschlichen Blutes.

Das technische Ergebnis der beanspruchten Erfindung ist die Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 der Gruppe O, sowie die einfache Durchführung des Tests, die die Verwendung der beanspruchten Erfindung ermöglicht zur epidemiologischen Überwachung der Ausbreitungsdynamik der HIV-Infektion, der dynamischen Identifizierung von Serokonvertern in einer bestimmten Bevölkerung (Geschlecht, Alter, soziale Gruppen der Bevölkerung) sowie bei der epidemiologischen Untersuchung von Fällen und Herden der HIV-Infektion.

Der Kern der vorgeschlagenen technischen Lösung besteht darin, dass die Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitraums einer HIV-1-Infektion mithilfe eines Testsystems erfolgt, das ein Immunosorbens auf der Basis von Antigenen des humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1 env und HIV-1-Gruppe) umfasst O), einer Verdünnungslösung, Proben (SRS) und Nachweisreagenzien (Konjugate, Chromogen/Substrat). Die Testproben werden nativ getestet und in einer Probenverdünnungslösung verdünnt. Basierend auf den Testergebnissen werden die Proben in „früh“ und „spät“ unterteilt. „Frühe“ Proben – die wahrscheinliche Infektionsdauer beträgt bis zu 9 Monate ab dem Zeitpunkt der Infektion, „späte“ Proben – die wahrscheinliche Infektionsdauer beträgt 9 oder mehr Monate ab dem Zeitpunkt der Infektion. Ob eine Probe zu „früh“ oder „spät“ gehört, wird anhand des prozentualen Abfalls der optischen Dichte (OD) der verdünnten Probe im Vergleich zur unverdünnten Probe beurteilt.

Diese Beispiele dienen der Veranschaulichung konkreter Ausführungsformen der Erfindung und sollen die Rechte des Anmelders nicht einschränken. Der Umfang der Rechte des Anmelders umfasst alle möglichen Varianten der Erfindung, auch solche, die in diesem Abschnitt nicht aufgeführt sind.

Als Immunosorbentien werden rekombinante Antigene verwendet, die immundominante env-Regionen von HIV-1 und HIV-1-Gruppe O enthalten. Konjugat-1 ist eine Mischung aus rekombinanten Antigenen HIV-1-gp41 und HIV-1-Gruppe-O-gp41, konjugiert mit Biotin. Im ersten Schritt werden die Testproben, Kontrollproben und deren Verdünnungen von 1:101 sowie RRS mit Konjugat-1 inkubiert. Spezifische Antikörper, die in den positiven Test- und Kontrollproben vorhanden sind, binden an in den Mikrotiterplattenvertiefungen sorbierte Antigene und an mit Biotin konjugierte Antigene und bilden stabile Komplexe. Überschüssige Proben und Konjugat-1 werden durch Waschen entfernt. Im nächsten Schritt wird Streptavidin, konjugiert mit Meerrettichperoxidase (Konjugat-2), in die Vertiefungen gegeben. Konjugat-2 bindet an den in der Vertiefung vorhandenen Antigen-Antikörper-Antigen-Komplex. Überschüssiges Konjugat-2 wird durch Waschen entfernt und dann wird Chromogen/Substrat in die Vertiefungen gegeben. In Vertiefungen mit gebundenem Konjugat-2 entwickelt sich eine blaue Farbe, die bei Zugabe einer Stopplösung in Gelb umschlägt. Die Ergebnisse werden mit einem Spektralphotometer aufgezeichnet.

Als Immunosorbens werden rekombinante Antigene verwendet, die die immundominanten env-Regionen von HIV-1 und HIV-1-Gruppe O enthalten. Es wird ein Konjugat verwendet – eine Mischung aus rekombinanten Antigenen gp41 HIV-1 und gp41 HIV-1-Gruppe O, konjugiert mit Meerrettichperoxidase. Während der Analyse werden Proben, Kontrollen und deren Verdünnungen sowie RRS mit dem Konjugat in antigenbeschichteten Vertiefungen der Platte inkubiert. Der resultierende stabile Komplex nach Entfernung überschüssiger Probe und Konjugat wird durch Zugabe von Chromogen/Substrat sichtbar gemacht. Dabei entsteht eine blaue Farbe, die bei Zugabe der Stopplösung in Gelb umschlägt. Die Ergebnisse werden mit einem Spektralphotometer aufgezeichnet.

Ob die untersuchten Proben zu „früh“ oder „spät“ gehören, wird anhand des prozentualen Abfalls der OD beim Verdünnen der Probe beurteilt, der nach der Formel berechnet wird:

%   Abfall   O P = 100 % − O P   Aufklärung der Probe − O P s r. R R S O P   GANZE PROBE × 100 % ,

wo OPsr. RRS – Durchschnittswert von OP RRS (berechnet basierend auf mehreren Werten von OP RRS).

Die untersuchten Proben gelten als „früh“, wenn der OD-Abfall >40 % beträgt.

Die untersuchten Proben gelten als „spät“, wenn der Abfall der OD ≤40 % beträgt.

Ein Beispiel für die Berechnung des prozentualen Abfalls der OD beim Verdünnen einer Probe ist in Tabelle 1 aufgeführt.

Für die Erfassung und Weiterverarbeitung der Ergebnisse ist es praktisch, Excel zu verwenden. Mit dieser Anwendung können Sie Berechnungen automatisch durchführen. Das Programm zur Verarbeitung der Testergebnisse befindet sich auf der dem Kit beiliegenden Diskette oder kann auf der Website des Unternehmens gefunden werden.

Bei der Entwicklung und Auswertung des Tests wurden Proben von Serokonversionspanels (BBI, Inc., Zeptometrix, USA) und HIV-positive Blutserumproben (Plasmaproben) mit nachgewiesenem wahrscheinlichem Zeitpunkt der Infektion verwendet. Die von Serokonversionsgremien ermittelte Wahrscheinlichkeit, die Dauer einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 der Gruppe O, korrekt zu bestimmen, beträgt 100 % (Daten sind in Tabelle 2 dargestellt), basierend auf Serumproben von Personen mit einer bedingt festgestellten Infektionsperiode (n=129) beträgt 94 % (Tabellen 3, 4; Daten teilweise dargestellt).

Der „DS-ELISA-HIV-AT-TERM“-Test bewertete die Möglichkeit der Untersuchung von Blutserumproben (Plasmaproben), die Antikörper gegen HIV-1 verschiedener Subtypen enthalten, einschließlich HIV-1-Gruppe O: Referenzpanel QCS 42-28-327 – 03Р (GISC) (Subtypen A, B, C) (außer Probe Nr. 24, die Antikörper gegen HIV-2 enthält), 1. internationales Referenzpanel Anti-HIV (NIBSC-Code: 02/210) (Subtypen A, B, C, E) (außer Probe Nr. 5, die Antikörper gegen HIV-2 enthält), Blutserumproben (Plasma), die Antikörper gegen HIV-1 der Gruppe O enthalten (Nr. 1342, K00175, K00259; BioMex). Die Ergebnisse weisen auf die Möglichkeit hin, Blutserumproben (Plasmaproben), die Antikörper gegen HIV-1 verschiedener Subtypen, einschließlich HIV-1-Gruppe O, enthalten, im Test „DS-ELISA-HIV-AT-SROC“ zu untersuchen.

Die Spezifität des DS-ELISA-HIV-AT-SROC-Reagenzienkits wurde durch Untersuchung von Spenderblutserumproben (n=352) bestimmt, die im ELISA ein negatives Ergebnis zeigten. Die Spezifität betrug 100 %. Zusätzlich wurden 255 Blutserumproben (negativ im ELISA) getestet:

■ 167 Blutserumproben von Schwangeren und Patienten mit Infektionskrankheiten;

■ 128 Blutserumproben von Patienten mit verschiedenen nicht übertragbaren Krankheiten.

Die Spezifität betrug 100 %.

Die erhaltenen Daten zeigen die hohe Effizienz des entwickelten Testsystems „DS-ELISA-HIV-AT-SROC“ bei der Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1-Gruppe O, in Serum (Plasma) menschliches Blut.

1. Enzyme-linked Immunosorbent Testsystem zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 Gruppe O, in menschlichem Blutserum (Plasma), dadurch gekennzeichnet, dass es Folgendes enthält: Immunosorbens auf Basis von Virusantigenen menschlicher Immunschwäche Typ 1 (env HIV-1 und HIV-1 Gruppe O), Probenverdünnungslösung (SDS) und Nachweisreagenzien, bei denen es sich um Konjugate, Chromogen/Substrat handelt.

2. Eine Methode zur Bestimmung des wahrscheinlichen Zeitpunkts einer Infektion mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1), einschließlich HIV-1 der Gruppe O, im menschlichen Blutserum (Plasma), basierend auf unterschiedlichen Antikörpergehalten in Abhängigkeit vom Zeitpunkt der Infektion, einschließlich der Trennung der Testprobe in zwei Teile und der Verdünnung eines davon; Untersuchung beider (nativer und verdünnter) Teile der Blutserumprobe des Patienten mit dem in Absatz 1 beschriebenen enzymgebundenen Immunosorbens-Testsystem; Bestimmung der optischen Dichte (OD) nativer und verdünnter Proben und RRS; Berechnung des Durchschnittswerts von OP RRS; Berechnung des prozentualen Abfalls der OD einer verdünnten Probe im Vergleich zu einer unverdünnten Probe unter Verwendung der Formel
%   Abfall   O P = 100 % − O P   Aufklärung der Probe − O P s r. R R S O P   GANZE PROBE × 100 % ,
In diesem Fall gilt der wahrscheinliche Infektionszeitraum als „früh“, wenn der OD-Abfall > 40 % beträgt, und als „spät“, wenn der OD-Abfall ≤ 40 % beträgt.

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