Sammlung von pathologischem Material zur Diagnose von Mykosen und deren mikroskopische Untersuchung. Labordiagnostik von Mykosen Methoden der mikrobiologischen Diagnostik und Prävention von Mykosen

Inhalt

Bei einer Pilzinfektion im Anfangsstadium ist es äußerst schwierig, die Läsion zu identifizieren und den Erreger zu bestimmen. Die Diagnose wird dadurch erschwert, dass sich die Pathologie nicht sofort manifestiert oder eine Vielzahl von Symptomen aufweist. Zur Bestimmung des Erregers wird Biomaterial aus dem von der pathogenen Mikroflora betroffenen Bereich entnommen: Sputum, Teil der Haut, infizierter Nagel, Blut, Biopsie von Lymphknoten oder inneren Organen.

Was sind Pilzkrankheiten?

Wie sieht es aus

Der Grund für die Kontaktaufnahme mit einem Dermatologen sind in der Regel die ersten pathologischen Manifestationen der Erkrankung. Die klinischen Symptome unterscheiden sich je nach Infektionsort und Erreger der Pilzerkrankung. Folgende Arten pathogener Mikroorganismen werden unterschieden:

• Candida-Pilz – verursacht Candidiasis-Infektionen;
• Trichophyton (Trichophyton) – provoziert infektiöse Pathologien von Nägeln, Haut und Schleimhäuten;
• Kryptokokkose – befällt innere Organe, Lunge;
• Aspergillose ist eine Pilzerkrankung, die durch eine verminderte Immunität verursacht wird.

Bei der Diagnose kann anhand der Lokalisation eine von 2 Infektionsgruppen bestimmt werden:

Pathogene Mikroflora dringt durch Wunden auf der Oberfläche der Epidermis, Mikrotraumas, ein; die Ursache der Krankheit kann jeder Kratzer sein, der eine Mykose glatter Haut hervorruft. Der Körper kann dem Angriff des Erregers nicht mehr standhalten, wenn seine Schutzfunktionen eingeschränkt sind. Bei der Diagnose wird häufig eine Infektion mit der Gattung Trichophyton oder Candida festgestellt. Letztere verursachen folgende Krankheiten:

• Soor;
• Candidiasis bei Männern;
• orale Candidiasis.

Es gibt mehr als mehrere Dutzend Krankheitserreger, sie werden nach der Art der Gewebeschädigung unterteilt. Bei der Diagnose können folgende Arten von Pilzmikroorganismen identifiziert werden:

• tiefe systemische Mykosen werden durch Histoplasma capsulatum hervorgerufen;
• subkutane subkutane Mykosen werden durch Sportrichum schenckii verursacht;
• Epidermomykose entwickelt sich aufgrund von Epidermophyton floccosum;
• Pityriasis versicolor, oberflächliche Mykose – Malassezia furfur;
• opportunistische Pilzkrankheiten - Candida albicans.

Klassifizierung von Mykosen

Der allgemeine Name aller Krankheiten dieser Art verbirgt verschiedene Arten von Schäden am menschlichen Körper durch Pilze. Bei der Diagnose teilen Ärzte Hautkrankheiten in 4 Gruppen ein:

1. Keratomykose. Der Ort der Lokalisierung wird zum Stratum corneum der Epidermis; in anderen Hautschichten gibt es keine entzündlichen Erscheinungen (Piedra, Pityriasis versicolor, Schorf, Sporotrichose). Die folgenden Pilze verursachen diese Art von Pathologie: Sporotrichium, Trichosporon, Piedraia, Exophiala, Pityrosporum.
2. Dermatomykosen. Sie zeichnen sich durch einen ausgeprägten Entzündungsprozess aus, der auf Haut, Kopfhaut und Nägeln lokalisiert ist (Faus, Trichophytose, Epidermophytose, Mikrosporie). Die folgenden Pilzstämme provozieren Pathologien: Epidermophyton, Microsporum, Trichophyton.
3. Candidiasis. Diese Art von Pilz befällt die Schleimhäute, die Haut und ihre Anhangsgebilde. Innere Organe sind häufig das Ziel von Pilzen der Gattung Candida.
4. Tiefe Mykosen. Sie rufen schwere Infektionen aller Hautschichten, inneren Organe, Schleimhäute, Knochen und Muskeln hervor (Mukorose, Penicillose, Aspergillose).

Es gibt separate Pseudomykosen (Aktinomykose, Erythrasma), bei denen es sich nicht um Pilzerkrankungen handelt, deren Symptome jedoch echten Mykosen ähneln. In diesen Fällen ist eine Differenzialdiagnose erforderlich. Die Diagnostik ist in solchen Fällen sehr wichtig, da sie hilft, die Art der Pilzinfektion festzustellen oder auszuschließen. Davon hängen der Zweck des Behandlungsschemas, seine Dauer und Wirksamkeit ab.

Dermatomykosen

Dermatophytenpilze dringen tief in die Haut ein und lösen Dermatomykose aus, beispielsweise die folgenden bekannten Pathologien:

• Mikrosporien;
• Trichophytose;
• Fußpilz;
• Rubrophytie;
• Favorit.

Diese Art von Pathologie wird in verschiedene Krankheiten eingeteilt, die zu Narbenbildung, Verformung der Hände und Zehennägel, Strukturveränderungen und Haarausfall führen. Krankheitserreger befallen die oberen, tiefen Hautschichten, was zur Entstehung kochartiger Knoten, pustulöser Hautausschläge und ausgedehnter Entzündungsherde führt. Eine günstige Voraussetzung für die Entwicklung ist eine schlechte Fußhygiene. Der Pilz wächst zunächst auf der Haut der Füße, in den Zehenzwischenräumen, und breitet sich dann auf die Nägel aus.

Candidiasis

Pathogene Mikroorganismen befallen die tiefen und oberflächlichen Hautschichten und breiten sich auf Nägel, Haare und innere Organe aus. Krankheiten werden durch Pilze der Gattung Candida verursacht; die Krankheiten gehören zur Gruppe der Candidiasis. Folgende Arten dieser Beschwerden werden unterschieden:

• verallgemeinert;
• oberflächlich;
• viszeral.

Candida-Pilze werden als opportunistisch eingestuft. Hefeartige Erreger können bei der Diagnose im Darm, in der Mundhöhle und beim gesunden Menschen nachgewiesen werden. Eine starke Immunität hemmt die Ausbreitung pathogener Mikroorganismen, und wenn sie schwächt, beginnt die aktive Vermehrung von Candida, was zu Schäden an der Haut von Rumpf, Füßen, Kopf und Händen führt. Klinische Veränderungen werden bei allen Formen der Candidiasis beobachtet. Die Behandlung hängt von der Schwere der Erkrankung und der Art der Läsion ab.

Tiefe Mykose

Dabei handelt es sich um eine Erkrankung, die die tiefen Schichten der Haut und der inneren Organe befällt. Es entstehen Krankheiten mit einem starken Rückgang der körpereigenen Abwehrkräfte, Veränderungen des Hormonspiegels und Stoffwechselstörungen. Die folgenden Pathologien werden als tiefe Mykosen klassifiziert:

• Kokzidioidose;
• Chromomykose;
• Rhinosporidiose;
• Histoplasmose;
• Sporotrichose;
• Blastomykose;
• Mukorose;
• Cephalosporiose;
• Myzetom;
• Cladosporiose;
• Madura-Fuß;
• Aspergillose.

Keratomykose

Hierbei handelt es sich um eine Gruppe von Pathologien, die nur auf der Haarkutikula, dem Stratum Corneum und der Oberflächenschicht der Haut lokalisiert sind. Ein charakteristisches Zeichen der Keratomykose ist das Fehlen entzündlicher Phänomene. Die Erreger der Krankheit sind schimmelige, hefeartige Pilze, Dermatophyten (ca. 70 Arten von Krankheitserregern). Sie provozieren folgende Krankheiten:

• Shimberi;
• Pityriasis alba;
• Flechte schwarz;
• Schuppenmykose;
• tropische weiße und gelbe Flechten;
• noduläre Trichosporie;
• Stein;
• Pityriasis versicolor (Pityriasis versicolor).

So diagnostizieren Sie einen Pilz

Als nächstes beginnt eine visuelle Inspektion, die dabei hilft, das Ausmaß des Schadens zu ermitteln und festzustellen, welche Bereiche von Pilzen befallen sind. Der Arzt sollte auf das Vorliegen einer Immunschwäche des Patienten achten. Um die Art des Erregers zu bestimmen, ist es notwendig, Material zu sammeln, das zur Laboruntersuchung geschickt wird. Ein erfahrener Arzt kann bei der Erstuntersuchung eine Diagnose stellen, aber um ein Behandlungsschema zu erstellen, müssen Sie noch das Biomaterial untersuchen. Zur Diagnose von Pilzerkrankungen werden folgende Methoden eingesetzt:

• Mikroskopie – Untersuchung von Biomaterial unter einem Mikroskop, eine gängige und einfache Diagnosemethode;
• Untersuchung unter einer Wood-Lampe – ein spezielles Spektrum ultravioletter Beleuchtung (Lumineszenz) hilft, Pilzläsionen zu erkennen;
• Die bakteriologische Kultur ist eine genaue Diagnosemethode, es dauert jedoch 2-3 Wochen, bis eine Kolonie auf einem Nährmedium wächst.
• Die PCR-Diagnostik ist die genaueste Methode, um die Art der pathogenen Mikroflora zu bestimmen. Für eine genaue Diagnose sind jedoch möglicherweise mehrere Tests erforderlich, für die Geld ausgegeben werden muss.

Labormethoden

Nur eine rechtzeitige und genaue Diagnose hilft dabei, ein wirksames Behandlungsschema zu verschreiben und die Dauer des Kurses zu verkürzen. Die Labordiagnostik von Pilzerkrankungen ist die effektivste Methode zur Bestimmung des Erregertyps. Zur Identifizierung werden folgende Recherchemöglichkeiten genutzt:

• bakteriologische Kultur;
• histologische Analyse;
• PCR-Diagnostik;
• immunologische Forschung;
• mikrobiologische Studien;
• Kulturforschung.

Differentialdiagnose von Mykosen

Eine genaue Diagnose zu stellen ist schwierig, da verschiedene Mykosearten unterschiedliche Symptome verursachen. In solchen Fällen wird eine differenzialdiagnostische Methode angewendet und die Mykose mit anderen dermatologischen Pathologien verglichen. Oft werden die Anzeichen einer Mykose mit Psoriasis verwechselt, aber wenn die Schuppen abgekratzt werden, blutet die Pilzpathologie nicht. Ähnliche Symptome werden bei Parapsoriasis beobachtet.

Der Arzt muss die Möglichkeit der Entwicklung eines nummulären Ekzems ausschließen. Hierbei handelt es sich um eine besondere Art von Pathologie, die nur durch Labordiagnostik erkannt werden kann. Oft werden Anzeichen eines Pilzes mit einer polymorphen Photodermatose verwechselt, die sich nur bei Erwachsenen entwickeln kann und bei Kindern nie auftritt. Um eine genaue Diagnose zu stellen und eine kompetente Behandlung zu verschreiben, sind Labor- und Differentialdiagnostik erforderlich.

Mikrobiologische Diagnostik von Mykosen

Dies ist die einfachste und gebräuchlichste Methode zum Nachweis von Mykosen auf der Haut und im Blut. Für eine genaue Diagnose ist es notwendig, Material für Forschungszwecke zu sammeln. Wenn die Kopfhaut betroffen ist, müssen Sie die betroffenen Haare mit einer Pinzette sammeln und den beschädigten Bereich von der Haut abkratzen. Laboruntersuchungen auf Pilzkrankheiten mit der mikrobiologischen Methode werden durchgeführt, indem das Biomaterial in eine 30 %ige Kaliumhydroxidlösung und dann auf einen Objektträger gegeben wird.

Die Analyse hilft dabei, festzustellen, wo sich der Pilz befindet (außerhalb oder innerhalb der Haut, Haare) und wie groß er ist. Wenn das Material falsch gesammelt wird, kann die Analyse zu einem fehlerhaften Ergebnis führen. Zur Diagnostik kommen folgende mikrobiologische Diagnostikverfahren zum Einsatz:

• Mikroskopie mit nativen und ungefärbten Präparaten;
• Mikroskopie mit gefärbten Präparaten.

Forschungsmethoden

Bei der Diagnose muss ein Spezialist die Struktur des Myzels (Struktur der Hyphen, ihre Septierung, Farbe), die Strukturmerkmale von Sporen, Kondien, ihre Farbe, Form und Größe, die Struktur der Zellwand usw. berücksichtigen . berücksichtigt. Für die Untersuchung werden native, farbige Präparate hergestellt. Letztere erfordern eine unterschiedliche Bearbeitung des Materials:

1. PAS-Färbung. Diese Art der Färbung hilft, neutrale Polysaccharide in den Wänden von Mikroorganismen zu identifizieren. Dazu gehört der Glucan-Mannan-Komplex, der in der Zellwand vieler Eumyceten vorkommt. Es provoziert den Färbeprozess.
2. PAS-Reaktion. Wird zur Diagnose einer Pilzinfektion in Gewebeform verwendet. Im Labor werden für diese Untersuchung verschiedene Modifikationen verwendet, beispielsweise die Gridley-Färbung oder die Bauer-Reaktion.
3. Gramm-Methode. Eine solche Färbung hilft, das Vorhandensein begleitender Mikroorganismen zu erkennen.
4. Ziehl-Nielson-Färbung. Hilft bei der Identifizierung säurefester Mikroorganismen. Wenn das Biomaterial flüssig ist, bereiten Sie einen speziellen, ungefärbten Abstrich in Reinigungsflüssigkeiten für die Mikroskopie vor: Glycerin und Alkohol werden zu gleichen Anteilen gemischt.

Kulturtest auf Pilze

Das Biomaterial wird auf ein Nährmedium gegeben (Kultivierung), um eine Reinkultur bei Raumtemperatur zu isolieren. Dimorphe Pilze bilden unter solchen Bedingungen Myzel; wenn sie auf 37 Grad wachsen, beginnen sich hefeähnliche Zellen zu bilden. Sabourauds Medium wird für Dermatophyten und Candida-Pilze verwendet; für schimmelige (Hyphen-)Pilze ist Czapeks Medium erforderlich. Der Zusammensetzung wird häufig ein Antibiotikum zugesetzt. Tiefe Mykosen können aufgrund ihrer hohen Ansteckungsgefahr nur in klinischen Laborzentren festgestellt werden.

Lumineszenzdiagnostik von Pilzerkrankungen

Um betroffene Hautbereiche mit pathogener Mikroflora der Gattung Microsporum zu identifizieren, wird eine UV-Lampe verwendet. Hierbei handelt es sich um eine Möglichkeit der Expressdiagnostik, die eingesetzt wird, wenn das Vorliegen einer Hautinfektion oder Symptome einer Flechtenerkrankung bestätigt werden muss. Ultraviolette Strahlung ist nicht die Hauptmethode zur Bestimmung von Pilzen; sie ist eine Hilfsmethode und daher nicht notwendig.

Zur Untersuchung des Patienten wird eine Wood-Lampe verwendet; sie emittiert UV-Strahlung, unter deren Einfluss die Abfallprodukte des Pilzes in hellem Licht leuchten. Die Farbe hängt davon ab, welche Art von Erreger den Patienten befallen hat:

• grünlich – Kopfhautflechte;
• blau – Lupus erythematodes auf den Lippen;
• gelblich – flache Flechtenformationen.

Immunologischer Enzym-Bluttest auf Pilze

Zur Erkennung von Mykosen, die die Haut und innere Organe befallen haben (Histoplasmose, Kokzidioidose), wird ein immunologischer Enzymbluttest auf Pilzerkrankungen eingesetzt. Diese Technik wird häufig eingesetzt, wenn aus bestimmten Gründen die Entnahme einer Gewebebiopsie zu Untersuchungszwecken nicht möglich ist. Die Technik basiert auf der Suche nach Antikörpertitern gegen eine bestimmte Art von Pilzkrankheit.

Zu diesem Zweck wird die Bestimmung von IgG gegen Aspergillose und Candidiasis eingesetzt. Die Genauigkeit der Analyse liegt bei etwa 80 %, in seltenen Fällen kann es ohne tiefe Mykosen zu einem falsch positiven Ergebnis kommen. Dies geschieht, wenn der Patient einen Pilz in der Mundschleimhaut oder eine fortgeschrittene Form von Soor hat. Für den ELISA ist eine venöse Blutprobe erforderlich, die früh morgens oder 4 Stunden nach der letzten Mahlzeit entnommen wird. Für die Analyse ist keine weitere Vorbereitung erforderlich.

Die Antwort auf die Analyse wird einige Tage nach der Sammlung des Biomaterials vorliegen. Selten beträgt die Wartezeit mehr als 5 Tage. Die Qualität der Laborausrüstung beeinflusst die Geschwindigkeit der Untersuchung, wenn es Gründe gibt, zusätzliche Untersuchungen von Blutproben durchzuführen. Nach Abschluss des Eingriffs erhält der Patient eine Schlussfolgerung, die einen der folgenden Werte angibt:

• Wenn das Vorhandensein eines Pilzes bestätigt wird, wird „positives Ergebnis“ geschrieben.
• Wenn keine vollständige Sicherheit besteht, dass ein Pilz im Blut nachgewiesen wurde, schreiben sie „zweifelhaftes Ergebnis“;
• Wenn in der Biomaterialprobe keine pathogene Mikroflora vorhanden ist, wird ein „negatives Ergebnis“ geschrieben.
• Wenn Sie über eine gute Ausrüstung verfügen, können Blutuntersuchungen die Konzentration von Mykosezellen bestimmen und den Indikator im Ergebnis angeben.

PCR-Diagnostik von Pilzerkrankungen

Die genaueste und zuverlässigste Methode zur Diagnose von Pilzen und anderen Infektionskrankheiten ist die Polysize-Kettenreaktion. Die Diagnosemethode hat folgende Vorteile:

• niedrige Analysekosten;
• hohe Genauigkeit;
• die Erforschung von Biomaterial erfolgt schnell;
• Zur Analyse können Sie jede beliebige Gewebeprobe entnehmen (ein Stück Haut, Schleimhaut, Abschabsel von den Fußsohlen, Finger, Nageloberflächen, Haare, Blut).

Die Haupteinschränkung dieser Studie ist ihr enger Fokus. Um eine Mykose zu diagnostizieren, müssen Sie genau wissen, wo sie den menschlichen Körper befallen hat. Die PCR bestimmt die Art des Erregers und seine Konzentration im Körper des Patienten. Die Ergebnisse werden innerhalb eines Tages bekannt gegeben, in einigen Fällen (sofern keine ungünstigen Bedingungen vorliegen) erfolgen die Antworten am Tag der Lieferung (in 5-6 Stunden). Die Geschwindigkeit der Studie hängt von der Korrektheit der Probenentnahme, der Erfahrung des medizinischen Personals und der Arbeitsbelastung des Labors ab.

So erkennen Sie Pilze zu Hause

Mit der Fähigkeit, die Symptome mykotischer Pathologien zu erkennen und heimdiagnostische Methoden anzuwenden, ist es möglich, die Art des Erregers zu bestimmen. Der Patient muss den Krankheitsverlauf richtig einschätzen, im Frühstadium kann eine Pilzerkrankung mit Psoriasis oder Flechten verwechselt werden. Um dies zu vermeiden, müssen Sie die wichtigsten Anzeichen einer Mykose kennen, die sie von anderen Krankheiten unterscheidet. Symptome einer Pilzinfektion:

• Nägel werden gelb und beginnen sich abzulösen;
• Veränderung der Form der Nagelplatte;
• es gibt keine Phasen der Remission und Exazerbation, es beginnt eine vollständige Ablösung der Platte, die bei Hauterkrankungen und Psoriasis nicht auftritt;
• der betroffene Bereich hat einen unangenehmen Geruch, schmerzt bei Berührung, Juckreiz, Peeling und es können sich Plaques auf der Hautoberfläche bilden;
• Der Pilz befällt meist die Zehenzwischenräume eines oder beider Füße, dann breitet sich die Krankheit auf den Nagel und den Rest des Fußes aus.

Diagnose von Zehennagelpilz mit Kaliumpermanganat

Wenn Sie bemerken, dass sich die Nägel an Ihren Fingern und Zehen zu verändern beginnen oder ein unangenehmer Geruch auftritt, können Sie direkt zu Hause überprüfen, ob eine Infektion vorliegt oder nicht. Für die Analyse benötigen Sie Mangan, warmes Wasser und einen Behälter. Das Verfahren wird wie folgt durchgeführt:

• bei Anzeichen einer Hauterkrankung eine dünne Schicht Jod auf diesen Bereich auftragen;
• warte 2 Minuten;
• Wenn es ein Problem gibt, nehmen die Läsionen eine satte Farbe an;
• gesunde Hautpartien werden nicht hervorgehoben.

Wie viel kostet die Diagnose von Pilzkrankheiten in Moskauer Kliniken?

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Aufmerksamkeit! Die im Artikel dargestellten Informationen dienen ausschließlich Informationszwecken. Die Materialien im Artikel ermutigen nicht zur Selbstbehandlung. Nur ein qualifizierter Arzt kann eine Diagnose stellen und Behandlungsempfehlungen geben, die auf den individuellen Merkmalen eines bestimmten Patienten basieren.

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Leider lässt sich auch heute noch feststellen, dass die Diagnose von Pilzerkrankungen oft zu früh gestellt wird (Bereiche mit schütterem Haar, Schuppenbildung werden oft mit „Schuppen“, „Trockenheit“ verwechselt). Gleichzeitig treten in den Läsionen oft keine subjektiven Empfindungen (Juckreiz, Schmerzen etc.) auf und Patienten konsultieren aus diesem Grund längere Zeit keinen Facharzt.

Veränderungen der Nägel (hässlich, bröckelig, dünner) werden als „Onychodystrophie“ nach einem Bluterguss, Erfrierungen usw. angesehen. Gleichzeitig können (auch einzelne Läsionen, einschließlich Nägel) zur Bildung allergischer Veränderungen im Körper führen, die sich auf die Haut auswirken Kreislauf- und Lymphsysteme, Blutgefäße usw. Patienten bleiben auf unbestimmte Zeit eine Quelle von Pilzinfektionen. In diesem Zusammenhang sind immer eine rechtzeitige Labordiagnose von Mykosen und eine mögliche frühzeitige Behandlung relevant.

Die Vielfalt der klinischen Varianten von Pilzerkrankungen, die hauptsächlich beim Menschen auftreten, sowie die Merkmale der Mikrobiologie, Morphostruktur, immunologischen und anderen Parameter verschiedener Pilzarten (und -gattungen) haben die Verfügbarkeit einer erheblichen Anzahl von Methoden zur Diagnose von Mykosen bestimmt ; Es ist zu beachten, dass die verfügbaren Methoden ständig verbessert werden und (seit relativ kurzer Zeit) eine besondere Tendenz zu immunologischen und molekulargenetischen Tests aufweisen.

Andererseits seien die Kulturwissenschaften immer noch „nah am Goldstandard“ und würden zur Bestätigung zweifelhafter Ergebnisse anderer Studien herangezogen; Es besteht die Meinung, dass die Kombination kultureller und molekulargenetischer Methoden bei diagnostisch „fragwürdigen“ Formen von Mykosen (insbesondere disseminierten, vor dem Hintergrund einer Immunsuppression jeglicher Herkunft, mit Schädigung innerer Organe etc.) eine der zuverlässigsten ist Möglichkeiten, die mykotische Natur des Prozesses zu registrieren.

Man sollte jedoch die „alten“ Methoden, insbesondere die Bakterioskopie (insbesondere bei der Erstuntersuchung), nicht vernachlässigen, zumal in der täglichen Praxis in vielen dermatologischen Einrichtungen der mikroskopische „Nachweis“ von Mykosen im Vergleich zu anderen Tests am weitesten verbreitet ist.

Unter Berücksichtigung der deutlichen Zunahme allergischer Manifestationen auf der Haut (und manchmal auch viszeral) ist es bei langfristigem, chronischem, periodisch verschlimmertem Mykosenverlauf (Haut, Nägel etc.) ratsam, eine allergologische Untersuchung durchzuführen Tests zur Feststellung des Sensibilisierungsgrades des Körpers, inkl. kombinierte Pilz-Bakterien-Infektion; Diese Tatsache kann sich auf die Besonderheiten der Behandlung eines bestimmten Patienten auswirken – beispielsweise auf die Bestimmung der sinnvollen Verschreibung von Antimykotika und Desensibilisierungsmitteln usw.

Traditionell wird eine Verdachtsdiagnose einer Pilzerkrankung auf der Grundlage klinischer Manifestationen gestellt und durch Labortests bestätigt.

In diesem Abschnitt des Buches stellen wir kurz grundlegende Methoden zur Erfassung von Mykosen (unabhängig von ihrem Standort) vor und berücksichtigen dabei die „Art der Studie und das entnommene Material“. Es ist zu beachten, dass der Polymorphismus der klinischen Manifestationen von Mykosen (einschließlich solcher mit allergischer Komponente) die Vielfalt des zu untersuchenden pathologischen Materials bestimmt. Gleichzeitig hängt der Erfolg der Suche nach den Elementen des Pilzes von der richtigen Auswahl ab.

Daher ist die periphere Zone erythematosquamöser, oft figurierter Hautausschläge reicher an Myzel und Pilzsporen; An den behaarten Stellen der Läsion werden gekräuseltes, weißliches, gebleichtes, stumpfes Haar oder seine Fragmente – „Stümpfe“ – entnommen (es ist ratsam, die Haarsammlung mit einer Wood-Lampe zu kontrollieren). Um Material (mit einer Nadel) aus dem sogenannten Material zu sammeln, sind bestimmte Fähigkeiten erforderlich. „Schwarze Punkte“ – dunkle Hornzapfen an der Mündung der Follikel.

Im Praxisalltag werden meist Hautschuppen (Entnahme durch Kratzen, Abschmieren, mit Klebeband), Abkratzen verfärbter Nägel, der Bereich der subungualen Hyperkeratose sowie Schleimhautausfluss untersucht. Je nach Indikation werden Sputum, Spülflüssigkeit und Urin untersucht (bei Patienten mit nicht katheterisierter Blase); Urin aus Urinalen und Bettpfannen kann nicht für Forschungszwecke gesammelt werden.

Von diagnostischem Wert sind auch Blut (zur kulturellen Untersuchung sowie ELISA, PCR), Liquor cerebrospinalis und andere Körperflüssigkeiten (pleural, intraartikulär, intraperitoneal – einschließlich solcher, die durch Aspiration oder Drainage gewonnen werden); In einigen Fällen (je nach lokaler Diagnose) sind Galle, Kot, Punktate subkutaner Abszesse und Ausfluss aus Fisteln wichtig (insbesondere bei tiefen Mykosen). Selbst einfache diagnostische Tests erfordern die strikte Einhaltung einer Reihe von Bedingungen.

Zur Diagnose von Pilzerkrankungen werden derzeit folgende Methoden eingesetzt:
- Mikroskopie; basiert auf dem Nachweis eines Krankheitserregers im Untersuchungsmaterial, inkl. in menschlichen Geweben;
- Kulturuntersuchung mit anschließender mikroskopischer Untersuchung der Pilzkultur;
- histologische Untersuchung (g.o. bei tiefen Mykosen);
- Immun- und molekulare Methoden.

Mikroskopische Diagnostik

Die mikroskopische Diagnostik umfasst die Untersuchung ungefärbter (nativer) und gefärbter Präparate. Wie bereits erwähnt, ist diese Methode aufgrund ihrer vergleichsweisen Einfachheit und geringen Kosten in der dermatologischen Praxis am häufigsten anzutreffen, andererseits ist sie jedoch nicht empfindlich genug und erfordert in einigen Fällen wiederholte Tests und Bestätigung durch andere Methoden.

So kann man bei der Untersuchung ungefärbter Präparate neben Pilzelementen auch Epithelzellen, Blutzellen und verschiedene Verunreinigungen aus der äußeren Umgebung nachweisen, was das Auffinden des Erregers der Mykose erschwert und eine zusätzliche „Aufbereitung“ des Materials erfordert - die sogenannte. „Aufklärung“ (Mazeration), Konzentration, Verdünnung usw.

Dennoch ermöglicht die direkte Mikroskopie nativer Präparate eine schnelle Mykosediagnose und die Bestimmung, auf welche Nährmedien (falls erforderlich) das Material geimpft werden soll; es besteht die Meinung, dass ein positives Ergebnis möglicherweise die einzige Laborbestätigung einer Mykose mit negativer Reaktion bleibt in der Kultur (A.Yu. Sergeev, Yu.V.Sergeev, 2003).

Unter den verschiedenen Möglichkeiten zur „Reinigung“ von Medikamenten ist die Zugabe von KOH oder NaOH zum Testmaterial die gebräuchlichste (häufiger zum Nachweis von Pilzen in Hautschuppen, Haaren sowie einer Reihe von Erregern tiefer Mykosen im Sputum usw.). Biopsieproben).

Zur Mazeration von zerkleinertem und auf einen Objektträger gelegtem Glas wird eine 10–20 %ige Lösung von Natronlauge (oder Kalium) verwendet – 1–3 Tropfen für 10–20 Minuten; Die Zubereitung wird mit einem Deckglas leicht gepresst und zur schnelleren Mazeration auf einer Flamme erhitzt, bis Dampf entsteht. Die Betrachtung erfolgt zunächst bei geringer Vergrößerung, dann bei starker Vergrößerung (Trockensystem).

Ein richtig zubereitetes Präparat, das keinen starken mechanischen, thermischen und chemischen Einflüssen ausgesetzt war, ergibt das Bild einer homogenen Masse bestehend aus Epithelzellen, Produkten des Zellzerfalls von Pilzelementen – Myzelfäden und Sporen.

Das veränderte Haar wird auf einen Objektträger mit 10–30 % Alkali gelegt und auf die gleiche Weise behandelt, jedoch für eine längere Zeit – von 20 Minuten bis 3–4 Stunden. Bei reichlichem Pigmentgehalt empfiehlt es sich, zuerst zu bleichen das Haar mit einer 5%igen Wasserstoffperoxidlösung. Sie legen Wert auf die Erkennung von Pilzelementen sowie deren Lokalisierung im Verhältnis zum Haar.

Die Herstellung von Material aus pathologisch veränderten Nägeln (vorzugsweise ein feines Pulver, das durch Abkratzen aus der Tiefe der Läsion gewonnen wird) erfolgt auf ähnliche Weise, jedoch unter Verwendung von 30 %iger Natronlauge, obligatorischer sorgfältiger Erhitzung auf einer Flamme bis zu leichten Dämpfen und Einwirkung von ca. 1 Stunde (manchmal bis zu mehreren Stunden). Mit Alkali behandelte Präparate sollten aufgrund ihres „Verderbs“ (Kristallisation des Reagenzes, Abnahme der diagnostischen Zuverlässigkeit anhand des mikroskopischen Bildes) nicht länger als 1,5 bis 2 Stunden gelagert werden.

Anstelle von KOH oder NaOH können Sie verwenden: a) eine Lösung einer Mischung aus KOH mit 15 % DMSO; b) eine Mischung aus Phenol (2 Teile) mit Chloralhydrat (2 Teile) und Milchsäure (1 Teil); c) Calcofluorweiß, das eine Affinität zu Hyagin und Cellulose hat; Für die Forschung ist ein Fluoreszenzmikroskop erforderlich (je nach verwendetem Filter wird ein blaues oder grünes Leuchten beobachtet). Bei der Untersuchung von Liquor cerebrospinalis (bei Verdacht auf Kryptokokkose) wurde häufig eine Tintenfärbung durchgeführt.

Kulaga V.V., Romanenko I.M., Afonin S.L., Kulaga S.M.

Präzise Diagnose invasiver Mykosen nicht einfach. Dies erklärt sich nicht nur durch Schwierigkeiten bei der Gewinnung einer Pilzkultur, sondern auch durch die Interpretation von Forschungsergebnissen, da Pilze, sowohl Hefepilze als auch Fadenpilze, Schleimhäute besiedeln und die untersuchten Proben kontaminieren können. In dieser Hinsicht basiert die Diagnose invasiver Mykosen auf einem integrierten Ansatz, der nicht nur die Ergebnisse mykologischer (kultureller) und serologischer (Bestimmung von Pilzantigenen) Studien, sondern auch klinische Symptome einer Pilzinfektion sowie Daten aus Hilfsforschungsmethoden umfasst ( Computer- oder Magnetresonanztomographie, Ultraschall).

Europäisch-amerikanische Kooperationsgruppe zur Untersuchung invasiver Mykosen Kriterien für die Diagnose invasiver Mykosen wurden bei immungeschwächten Patienten entwickelt. Sie wurden 2001 auf der International Conference on Antimicrobials and Chemotherapy (ICAAC, Chicago) vorgestellt und 2002 in gedruckter Form vorgelegt. Es wurden Kriterien für nachgewiesene, wahrscheinliche und mögliche invasive Mykosen definiert, die für den Einsatz in klinischen und epidemiologischen Studien empfohlen werden

Nachgewiesene invasive Mykose durch Fadenpilze: Nachweis von Pilzmyzel in Biopsien oder Aspiraten während der histologischen oder zytologischen Untersuchung oder Isolierung einer Kultur aus unter aseptischen Bedingungen gewonnenen Proben aus einer normalerweise sterilen Läsion, die nach den Ergebnissen klinischer und radiologischer Studien mit einer Infektion verbunden ist, mit der Ausnahme sind Untersuchungen von Urin und Schleimhäuten.

Nachgewiesene invasive Mykose durch Hefepilze: Nachweis von Hefezellen (Pilze der Gattung Candida können Pseudomyzel oder echtes Myzel bilden) in Biopsien oder Aspiraten, mit Ausnahme von Proben aus Schleimhäuten, oder Isolierung einer Kultur aus Proben, die unter aseptischen Bedingungen aus einer normalerweise sterilen Läsion gewonnen wurden, was entsprechend auf die Ergebnisse einer klinischen und radiologischen Untersuchung im Zusammenhang mit einer Infektion, mit Ausnahme von Urin, Proben aus Nebenhöhlen und Schleimhäuten, oder dem mikroskopischen Nachweis und der spezifischen Färbung (in einem Tropfen Tusche, Mucicarmin-Färbung) von Hefezellen oder a positives Antigen von Cryptococcus spp. in der Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit.

Fungämie durch Fadenpilze: Isolierung einer Blutkultur von Pilzen, mit Ausnahme von Aspergillus spp. und Penicillium spp., einschließlich Penicillium marneffei, in Kombination mit klinischen Symptomen eines infektiösen Prozesses, der mit dem isolierten Erreger vereinbar ist.

Fungämie durch Hefepilze: Blutkulturisolierung von Candida oder anderen Hefepilzen bei Patienten mit klinischen Anzeichen einer mit diesem Erreger verbundenen Infektion.

Komplex diagnostischer Studien für invasive Mykosen

Mögliche invasive Mykose Die Diagnose basiert auf der Kombination der folgenden Kriterien:
ein Zeichen aus der Kategorie mikrobiologische Kriterien;
ein Zeichen aus der Kategorie „signifikant“ oder zwei aus der Gruppe „weniger signifikant“ klinische Symptome des Infektionsprozesses.

Mögliche invasive Mykose Die Diagnose basiert auf einer Kombination der folgenden Kriterien:
das Vorhandensein mindestens eines Risikofaktors, der die Entwicklung einer invasiven Mykose auslöst;
ein Zeichen aus der Kategorie der mikrobiologischen Kriterien oder ein Zeichen aus der Kategorie „signifikante“ (zwei aus der Gruppe „weniger signifikante“) klinische Symptome des Infektionsprozesses.

Das Konzept " mögliche invasive Mykose» Die Verwendung in klinischen Studien zur Untersuchung der Wirksamkeit von Antimykotika wird nicht empfohlen. Sie können diesen Begriff verwenden, wenn Sie empirische Antimykotika-Therapie, epidemiologische Studien und Pharmakoökonomie analysieren.

Bei mykologische Forschung Sterile Aspirate oder Biopsien berücksichtigen nicht nur die Isolierung von Pilzkulturen, sondern auch den Nachweis von Myzel oder Pseudomyzel durch Mikroskopie. In histologischen Präparaten lässt sich Aspergillus nur schwer von Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum und einigen anderen Fadenpilzen unterscheiden. Zur Differenzialdiagnose sollte eine immunhistochemische Untersuchung mit Antikörpern gegen Aspergillus durchgeführt werden.

Isolierung von Hefepilzen aus dem Blut gehört in mindestens einer Studie zur Kategorie der „nachweislichen“ invasiven Mykosen und ist eine absolute Indikation für die Verordnung systemischer Antimykotika bei Patienten mit Neutropenie. Die Häufigkeit des Nachweises von Hefepilzen aus dem Blut ist gering, selbst bei disseminierter Candidiasis liegt sie bei 35-50 %.
Durchführung wiederholte Blutkulturen erhöht die Wahrscheinlichkeit, positive Ergebnisse zu erzielen.

Andere Deutung Ergebnisse beim Nachweis von Fadenpilzen im Blut. Charakteristisch für Fusarium spp. ist eine hohe Isolationshäufigkeit von Fadenpilzen. und beträgt 40-60 %. Aspergillus wird äußerst selten nachgewiesen, in den meisten Fällen gilt es als Kontamination, mit Ausnahme von Aspergillus terreus.

Auswahl Aspergillus terreus aus dem Blut von Patienten mit Hämoblastosen kann auf eine echte Aspergilämie hinweisen und ist bei Vorliegen klinischer Infektionssymptome Grundlage für die Verschreibung von Antimykotika.

Kriterien für invasive Mykose

Bei Nachweis im Blut oder anderen sterilen Biosubstraten von Hefepilzen ist eine Identifizierung auf die Art und die Bestimmung der Empfindlichkeit gegenüber Antimykotika erforderlich; bei der Isolierung von filamentösen (Schimmel-) Pilzen erfolgt nur die Identifizierung auf die Art, die Empfindlichkeit wird nicht bestimmt.

Im klinischen Bereich üben Die Empfindlichkeit von Fadenpilzen wird aufgrund unzureichender Standards zur Bestimmung der Empfindlichkeit solcher Pilze gegenüber Antimykotika nicht untersucht. Darüber hinaus zeigte nur eine Studie einen Zusammenhang zwischen der Anfälligkeit von Aspergillus spp. und die Ergebnisse der Behandlung der invasiven Aspergillose bei Patienten mit hämatologischen Malignomen. Keine der nachfolgenden Studien kam zu ähnlichen Ergebnissen.

In letzter Zeit tauchen vereinzelte Berichte über die Bildung einer erworbenen Resistenz von A. fumigatus-Pilzen gegenüber Itraconazol und Voriconazol auf.

Zuordnung von Pilzen zu Arten, insbesondere solche, die aus sterilen Loci gewonnen werden, sind in erster Linie für die Auswahl eines Antimykotikums und die Durchführung einer adäquaten antimykotischen Therapie erforderlich. Daher ist Candida krusei resistent gegen Fluconazol und weniger empfindlich als andere Hefearten gegenüber Amphotericin B; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. resistent gegen Amphotericin B; Mucorales sind resistent gegen Itraconazol, Voriconazol, Candida glabrata zeigt eine dosisabhängige Empfindlichkeit gegenüber Fluconazol, und wenn diese Art von Pilz isoliert wird, sollte selbst bei empfindlichen Stämmen die Fluconazol-Dosis erhöht werden (Erwachsenen werden 800 mg statt 400 mg verschrieben); Candida lusitaniae ist resistent gegen Amphotericin B.

Zuordnung von Pilzen zu Arten ist auch wichtig für die Durchführung epidemiologischer Analysen in einem Krankenhaus – zur Identifizierung der Erreger von Infektionsausbrüchen und, wenn möglich, der Infektionsquelle. Es wurden Infektionsausbrüche beschrieben, die durch seltene Pilze wie C. lusitaniae, C. krusei und C. lipolytica verursacht wurden.

Basierend Identifizierung von Pilzarten Es kann von einer invasiven Mykose oder Pilzbesiedlung der Schleimhäute ausgegangen werden. Beispielsweise ist die Wahrscheinlichkeit, dass Aspergillus niger bei Patienten mit akuter Leukämie eine invasive Aspergillose verursacht, deutlich geringer als bei Aspergillus fumigatus. Die Isolierung von Aspergillus niger aus bronchoalveolärer Spülflüssigkeit wird am häufigsten als Kolonisierung der Atemwege und aus Sputum als Kontamination aus der Luft angesehen und erfordert zusätzliche Untersuchungen zur Bestätigung der Diagnose einer invasiven Aspergillose.

Basierend Sekrete von Fadenpilzen B. aus Sputum, Bronchoalveolarflüssigkeit und Aspirat der Nasennebenhöhlen, kann nur von einer invasiven Mykose ausgegangen werden, ohne sie in die Kategorie „nachgewiesen“ einzuordnen. Der Nachweis von Aspergillus im Sputum, insbesondere von Aspergillus fumigatus oder Aspergillus flavus, bei neutropenischen Patienten, die allogenes Knochenmark erhalten, sollte jedoch immer in Betracht gezogen werden. Dies erfordert eine erneute mykologische Untersuchung und eine Computertomographie der Lunge. Somit ist bei Neutropenie die Wahrscheinlichkeit, bei einer positiven Kultur von Aspergillus spp. eine invasive Aspergillose zu erkennen, höher. im Sputum beträgt 80 %.

Auswahl Cryptococcus neoformans bei immungeschwächten Patienten aus dem Respirationstrakt (Waschungen, Lavage) ist diagnostisch bedeutsam. Wenn die Identifizierung von Hefepilzen aus Flüssigkeiten aus den Atemwegen (Tracheal-, Bronchialspülung, bronchoalveoläre Spülung) von immungeschwächten Patienten nicht erforderlich ist, ist ein Screening zur Identifizierung von Cryptococcus neoformans aus diesen Proben erforderlich.

Nachweis von Candida im Urin Bei Patienten mit Neutropenie und Fieber wird es normalerweise als Manifestation einer disseminierten Candida-Infektion angesehen.

Rechtzeitig Diagnostik Invasiv verwenden Sie erfolgreich einen kommerziellen Test, um die Zirkulation eines spezifischen Antigens von Aspergillus spp. Galactomann (wasserlöslicher Polysaccharidbestandteil der Zellwand des Pilzes).

Galaktomann kann mit zwei Methoden bestimmt werden: der Latex-Agglutinationsmethode (Pastorex Aspergillus, BioRAD) und der Enzymimmunoassay-Methode (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Vorteil Enzymimmunoassay-Methode ist eine niedrigere Empfindlichkeitsschwelle für die Bestimmung des Galactomann-Spiegels im Blut – 1 ng/ml oder weniger und bei Verwendung der Latexagglutination – 15 ng/ml. Von diagnostischem Wert ist die Bestimmung von Galactomann im Blut (mindestens 2 Proben), im Liquor und in der bronchoalveolären Lavage. Die Sensitivität der Enzymimmunoassay-Methode beträgt etwa 90 %, die Spezifität beträgt 90–99 %, bei Empfängern von allogenem Knochenmark sind diese Indikatoren aufgrund der Prophylaxe niedriger und liegen bei 60–70 % bzw. 80–90 % Verwendung von Antimykotika (Antimykotika senken den Schwellenwert von Galactomann).

In 40 % der Fälle erfolgt die Erkennung Galaktomann im Blut ist den durch Computeruntersuchung der Lunge festgestellten Manifestationen einer invasiven Aspergillose voraus und liegt in 70 % vor den klinischen Symptomen einer Infektion.

Diagnostischer Wert des Antigen-Nachweistests Aspergillus Dies ist der Fall, wenn die Studie wiederholt durchgeführt wird. Die Bestimmung des Aspergillus-Antigens im Blut sollte bei Fieber während der Behandlung mit Breitbandantibiotika bei Patienten mit Neutropenie zweimal pro Woche durchgeführt werden; bei Lungenentzündung, die während einer antibakteriellen Therapie auftritt oder anhält; wenn Läsionen im Lungengewebe festgestellt werden (Computertomographie).

Das klinische Bild von Hautpilzerkrankungen ist sehr polymorph, daher muss die Diagnose in jedem Fall durch Laboruntersuchungsmethoden bestätigt werden. Zur Labordiagnostik von Mykosen werden mikroskopische, lumineszierende, kulturelle, immunologische (allergologische und serologische) Untersuchungsmethoden sowie Tierversuche eingesetzt.

Die Labordiagnose von Mykosen besteht aus mehreren Phasen. Die routinemäßige klinische Praxis beschränkt sich normalerweise auf die mikroskopische und kulturelle Untersuchung von kontaminiertem Material. Bei Bedarf werden diese Methoden durch immunologische, histologische Untersuchungen und die Infektion von Versuchstieren ergänzt. Bei manchen Hautmykosen spielt die Lumineszenzmethode eine wichtige unterstützende Rolle in der Diagnostik.

Entnahme von pathologischem Material.

Der Erfolg der Laborforschung von Mykosen hängt weitgehend von der korrekten Sammlung pathologischen Materials ab. Da Pilze verschiedene menschliche Organe befallen können, ist bei Verdacht auf eine Mykose die Untersuchung verschiedener pathologischer Materialien erforderlich. In der dermatologischen Praxis hat man es am häufigsten mit Mykosen zu tun, bei denen Hautschuppen, Haare und Nägel auf Pilze untersucht werden. Bei Verdacht auf tiefe und systemische Mykosen kann eine Labordiagnostik auf Pilze in Sputum, Waschwasser, Urin, Kot, Eiter, Schleimhautausfluss, Blut, Organstücken und biopsiertem Gewebe erforderlich sein.

Bei Hautläsionen, aus denen pathologisches Material entnommen werden soll, muss jede Behandlung mehrere Tage oder Wochen vorher abgebrochen werden. Es ist zu bedenken, dass die Verwendung schwacher Desinfektionslösungen oder auch indifferenter Mittel die Untersuchung beeinträchtigen kann. Unmittelbar vor der Entnahme von pathologischem Material muss die Läsion mit 96 %iger Alkohol- oder Xylollösung behandelt werden. Am besten entnehmen Sie das Material frischen, aber bereits voll entwickelten Läsionen. An der Peripherie der Läsionen müssen Hautschuppen abgekratzt werden; Pilze kommen hier am häufigsten in Form von Myzel und Sporen vor. Hautschuppen werden mit einem Skalpell entfernt, Krusten werden mit einer Epilationspinzette entfernt.

Bei Patienten mit Mykosen der Kopfhaut werden die befallenen Haare mit einer Epilationspinzette entfernt. Für die Forschung ist es notwendig, kurzes, gedrehtes, gebogenes Haar in Form eines Bogens oder Kommas sowie langes Haar zu nehmen, das jedoch an der Basis mit einer Scheide bedeckt ist. Wenn Sie einen Favus vermuten, müssen Sie bedenken, dass die Haare nicht abbrechen, sondern stumpf, leblos und gräulich werden.

Von den oberflächlichen Läsionen der betroffenen Nagelplatten werden mit einem Skalpell Abschürfungen vorgenommen, verdickte Nagelplatten werden mit einem Skalpell oder einem Nagelknipser abgeschnitten.

Flüssiges pathologisches Material wird aseptisch in einem sterilen Behälter gesammelt; Haut-, Nagel- und Haarschuppen werden auf einfachen oder weichen Pergamentpapierstücken gesammelt.

Der Ausfluss aus den Schleimhäuten zur Inokulation wird mit einem saugfähigen Wattestäbchen aufgenommen und dann in ein trockenes steriles Reagenzglas oder Reagenzglas mit 2 ml Nährmedium (Sabouraud-Würze) gegeben. Vaginalmaterial wird aus dem hinteren Fornix gewonnen; vom Peniskopf - aus dem Bereich des Koronarsulcus.

Mit einer Öse oder einem Tupfer wird Material aus dem äußeren Gehörgang entnommen und in ein Reagenzglas gegeben.

Das im Labor eingegangene Material wird innerhalb von 1 Stunde nach der Entnahme bei Lagerung bei Raumtemperatur bzw. spätestens 3 Stunden später bei Lagerung im Kühlschrank bei einer Temperatur von 4 °C untersucht.

Zur Untersuchung auf Pilze wird Blut in einer Menge von 5 - 10 ml aus der Ellenbogenvene entnommen und sofort in einen Kolben mit einem flüssigen Nährmedium oder einer gleichen Menge Natriumcitrat gegeben.

Wenn Biopsiematerial auf Pilze untersucht werden muss, wird es in eine sterile Petrischale gegeben und zur Mikroskopie, Kultur auf Nährmedien und zur Herstellung histologischer Präparate verwendet.

Mikroskopische Untersuchung.

Die mikroskopische Untersuchung von pathologischem Material auf Pilze erfolgt in nativen und gefärbten Präparaten. Zur Herstellung ungefärbter Präparate wird das resultierende Material mit einem Skalpell oder einer Präpariernadel zerkleinert und in die Mitte eines Objektträgers gegeben. Um die Bestandteile des Pilzes besser identifizieren zu können, wird das Material geklärt (mazeriert). Zu diesem Zweck greifen sie auf verschiedene Substanzen zurück, meist Ätzalkali (KOH, NaOH), die Epidermisschuppen, Schleim und Eiter auflösen, das Haarpigment aufhellen und die Pilze dadurch für die Forschung verfügbar machen.

In einigen Laboren werden Präparate für die mikroskopische Untersuchung mit einer 15-30%igen KOH-Lösung geklärt, der 5-10% handelsübliche dunkelblaue Tinte von Parker (Parker's SuperchromeBlue-BlackInk) zugesetzt wird. Bei dieser Färbung werden die Hyphen und Sporen bemalt Blau.

Zur Diagnose von Mykosen können mikroskopische, mykologische (kulturelle), allergische, serologische, biologische und histologische Untersuchungsmethoden eingesetzt werden. Abhängig von der Pathogenese kann das Forschungsmaterial Eiter, Auswurf, betroffene Haare, Nägel, Hautschuppen, Punktionen von Knochenmark, Lymphknoten, inneren Organen, Blut, Galle, Kot, Gewebebiopsien usw. sein.

Die mikroskopische Untersuchung umfasst die Mikroskopie von nativen (ungefärbten) und gefärbten Abstrichen. Zur Herstellung nativer Präparate werden Haare, Hautabschürfungen und Nägel in 10,30 %igen KOH- oder NaOH-Lösungen geklärt. Das mit Alkali behandelte Material wird auf einen Glasobjektträger in einem Tropfen Glycerin gelegt, mit einem Deckglas abgedeckt und mikroskopiert (Phasenkontrastmikroskopie kann verwendet werden), wodurch die Struktur des Pilzes und die Lage der Sporen untersucht werden können , aber eine endgültige Aussage über die Art des Pilzes kann erst nach Kulturstudien getroffen werden.

Zum Färben von Abstrichen werden am häufigsten die Gram-, Ziehl-, Nielsen- und Romanovsky-Giemsa-Methoden verwendet. Die Methoden von Sabouraud, Adamson und anderen werden auch zur Färbung von Dermatophyten verwendet.

Kulturelle (mykologische) Forschung wird durchgeführt, um eine Reinkultur des Pilzes zu isolieren und zu identifizieren. Verwenden Sie feste und flüssige Nährmedien (Sabouraud, Würze-Agar, Chapek usw.). Die Inkubation in einem Thermostat (22,28 °C) ist lang (3,4 Wochen). Eine Reinkultur des Pilzes wird durch eine Reihe von Merkmalen identifiziert: die Form der Kolonien, ihre Farbe, Konsistenz, mikroskopisches Bild (die Art des Myzels, die Lage der Sporen, Konidiophoren) und andere Merkmale. Serologische Reaktionen für die Diagnose von Pilzerkrankungen werden mit Pilzantigenen nach allgemein anerkannten Methoden durchgeführt, ebenso zur Diagnose anderer Infektionskrankheiten (RA, RP, RSK, RNGA, RIF etc.).

Allergietests können nach allgemein anerkannten Methoden durch intradermale Injektion geeigneter Allergene (Polysaccharid- und Proteinfraktionen aus Zellen oder Zellmembranen, Zellsuspension abgetöteter Pilze, Kulturfiltrate) durchgeführt werden. Zur Identifizierung von GNT können Sie den Degranulationstest von Gewebe- und Serumbasophilen verwenden, und zum Nachweis von GNT können Sie die Reaktion der Hemmung der Phagozytenmigration und der Blastentransformation von Lymphozyten verwenden.

Biologische Forschung wird an Labormodellen (Mäuse, Ratten, Meerschweinchen, Kaninchen, Hunde, Katzen) durchgeführt. Das biologische Modell der Mykose wird verwendet, um die Pathogenität des Erregers zu identifizieren, eine Reinkultur zu isolieren und neue Antimykotika zu untersuchen. Die histologische Untersuchung ermöglicht den Nachweis des Pilzes im Gewebe, die Untersuchung seiner Morphologie und der Merkmale des durch ihn verursachten pathologischen Prozesses im Körper.