Rsk-Analyse. Serologische Methoden zur Labordiagnostik der Syphilis

Indirekte Methoden zur Diagnose von Syphilis.

Zur Diagnose von Syphilis werden viele Forschungsmethoden eingesetzt, die sich in Technik und Zweck unterscheiden. Direkte Methoden zielen darauf ab, den Erreger im Untersuchungsmaterial mittels Mikroskopie (Dunkelfeldmikroskopie etc.) oder PCR nachzuweisen.

Zusätzlich zu den Methoden zum direkten Nachweis von Treponema pallidum (T. pallidum) werden bei der Untersuchung auf Syphilis häufig indirekte Methoden eingesetzt ( serologisch) Forschungsmethoden, die Antikörper gegen den Erreger der Syphilis im Blutserum und in der Liquor cerebrospinalis nachweisen. Indirekte Methoden zur Diagnose von Syphilis umfassen serologische Reaktionen ELISA, RPHA, DAC, RIF und RIF-abs, RIBT, PCR, Express-Methode, Immunoblot und andere.

Serologische Methoden zur Diagnose von Infektionskrankheiten.

Serologische Diagnosekriterien basierend auf spezifischen Antigen-Antikörper-Reaktionen. Antigene (Bestandteile von Zellwänden, Flagellen, Kapseln, DNA und Toxinen) der zu bestimmenden Mikroorganismen reagieren mit in Seren enthaltenen Antikörpern. Zwischen Antigenen und ihren entsprechenden Antikörpern kommt es zu einer Bindung, die die Grundlage für serologische Diagnoseverfahren darstellt. Serologische Tests dienen zur Bestimmung eines unbekannten Antigens (dessen Quelle ein Bakterium, Virus, Toxin usw. ist) mithilfe eines bekannten Antikörpers oder zur Bestimmung eines Antikörpers im Serum mithilfe eines bekannten Antigens.

Serologische Reaktionen werden nach dem Zustand des Antigens und den Eigenschaften der Umgebung, in der Antigen und Antikörper interagieren, sowie nach der Durchführungsmethode klassifiziert.

Zur Durchführung serologischer Reaktionen werden viele Labormethoden verwendet, wie Agglutination, Präzipitation, Komplementfixierung, Immunfluoreszenz, Enzymimmunoassay und Radioimmunoassay und andere. Diese Reaktionen ermöglichen eine effektive vorläufige Identifizierung von Mikroorganismen.

Seren, die zur Durchführung serologischer Reaktionen notwendig sind, werden experimentell gewonnen, insbesondere von Impfstoff- und Seruminstituten hergestellt und als Bestandteil kommerzieller Diagnosekits angeboten.

Serologische Methoden sind ein wichtiges Instrument bei der Diagnose und Behandlung von Infektionskrankheiten bei Mensch und Tier, da mit ihrer Hilfe nicht nur der Erreger der Krankheit identifiziert, sondern auch spezifische Antikörper gegen die entsprechenden Krankheitserreger im Blut nachgewiesen werden können von Patienten und Hinterbliebenen. Serologische Methoden sind derzeit die wirksamsten diagnostischen Methoden, wenn eine Isolierung des Erregers nicht oder nur schwer möglich ist und liefern relativ selten falsch-positive und falsch-negative Ergebnisse.

Einsatz serologischer Methoden zur Syphilis-Diagnose

Serologische Labormethoden zur Diagnose von Syphilis basieren auf der Fähigkeit des Körpers, eine Immunantwort auf das Auftreten des Erregers auszulösen. Mithilfe serologischer Reaktionen im Blutserum (Plasma) (oder der Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit) werden Spuren der Immunantwort auf eine Infektion nachgewiesen, nämlich Antikörper gegen Treponema-pallidum-Antigene oder die Antigene selbst.

Um die spezifische Natur der bestehenden klinischen Manifestationen festzustellen (d. h. dass sie eine Folge der Syphilis sind) und in Zukunft die Dynamik des pathologischen Prozesses zu kontrollieren, wurde eine Vielzahl serologischer Forschungsmethoden vorgeschlagen. Dieselben Methoden werden auch häufig für das Bevölkerungsscreening eingesetzt.

In Übereinstimmung mit den aktuellen nationalen Richtlinien und klinischen Richtlinien werden in vielen Ländern der Welt fortschrittliche serologische Methoden in Bevölkerungsumfragen eingesetzt, um Patienten mit Syphilis zu identifizieren und eine klinische Diagnose zu erstellen. Sie werden sowohl bei Vorliegen klinischer Krankheitssymptome bei Patienten als auch während der Latenzzeit eingesetzt.

Serologische Tests gehören zu den zuverlässigsten Methoden zur Diagnose von Syphilis. Als serologische Tests auf Syphilis werden standardisierte serologische Tests mit geregeltem Ablauf bezeichnet. In Anbetracht der Tatsache, dass fast alle serologischen Reaktionen auf Syphilis unter bestimmten Bedingungen falsch positiv oder falsch negativ sein können, sollten sie in Kombination und gegebenenfalls in Dynamik betrachtet werden.

Serologische Reaktionen, die zur Bestimmung von Antikörpern im Blutserum eines Patienten verwendet werden, unterscheiden sich voneinander in Sensitivität, Spezifität, Komplexität und Kosten. Zur effektiven Serodiagnose der Syphilis kommen neben klassischen Methoden auch immunologische Tests und Technologien zum Einsatz, die im 21. Jahrhundert einen neuen Entwicklungsimpuls erhalten haben.

Antikörper werden mit verschiedenen immunchemischen (serologischen) Methoden nachgewiesen, darunter Sedimentreaktionen, Enzymimmunoassays, Chemilumineszenz-Immunoassays, immunchromatographische Tests, lineares Immunblotting, Studien mittels Durchflussfluormetrie, Immunchip-Technologie und andere.

Die Serodiagnose (Forschung mit serologischen Methoden) wird eingesetzt bei:

• Bestätigung der klinischen Diagnose einer Syphilis,
• eine Diagnose einer latenten Syphilis stellen,
• Überwachung der Wirksamkeit der Behandlung als eines der Kriterien für die Heilung von Patienten mit Syphilis,
• Prävention von Syphilis (Screening-Untersuchung bestimmter Bevölkerungsgruppen zur Identifizierung von Pathologien).

Die wichtigsten für serologische Tests erforderlichen Eigenschaften sind Sensitivität, Spezifität und Reproduzierbarkeit

Das entscheidende Kriterium bei der Auswahl einer labordiagnostischen Methode ist deren Wirksamkeit – Sensitivität, Spezifität und Reproduzierbarkeit.

Empfindlichkeit ist der Anteil positiver Ergebnisse bei Patienten. Die Sensitivität der Methode wird durch den Prozentsatz positiver Testergebnisse an Proben bestimmt, von denen bekannt ist, dass sie bestimmte Krankheitserregermarker enthalten (z. B. Krankheitserregerantigene oder Antikörper dagegen).

Spezifität- Anteil negativer Testergebnisse bei gesunden Patienten. Die Spezifität der Methode wird durch den Prozentsatz negativer Testergebnisse an Proben bestimmt, von denen bekannt ist, dass sie keine spezifischen Marker des Erregers enthalten. Je höher also die Sensitivität und Spezifität, desto zuverlässiger und verlässlicher ist die Forschungsmethode.

Wichtige diagnostische Kriterien sind auch Reproduzierbarkeit Ergebnisse aus wiederholten Untersuchungen derselben Proben. Es ist zu beachten, dass es trotz erheblicher Fortschritte auf dem Gebiet der Hochtechnologie keine Methoden gibt, die bei allen getesteten Bioassays eine 100-prozentige (absolute) Sensitivität und Spezifität bieten.

Derzeit sind in Russland Testsysteme, Kits und Inhaltsstoffe offiziell registriert, die beim Aufbau einer Reaktion eine Sensitivität und Spezifität von weniger als 95 % aufweisen. Daher besteht immer die Möglichkeit, dass ein unzureichendes Ergebnis erzielt wird.

Klassifizierung der Tests nach der Art des verwendeten Antigens. Treponemale und nicht-treponemale Tests auf Syphilis

In der modernen Venerologie werden zu diagnostischen Zwecken mehr als ein Dutzend Varianten serologischer Reaktionen auf Syphilis herangezogen, die sich nach unterschiedlichen Kriterien in verschiedene Kategorien einteilen lassen. Die Klassifizierung erfolgt nach Forschungsmethodik, Umfang, Geschwindigkeit, geringen Kosten, Anforderungen an die Laborausstattung usw.

Treponema-Tests sind theoretisch spezifischer, liefern aber auch falsch positive Ergebnisse. Darüber hinaus erlauben sie keine Unterscheidung zwischen unbehandelter und geheilter Syphilis. Die Ergebnisse treponemaler Reaktionen werden in beiden Fällen positiv sein. Bei nicht-treponemalen Reaktionen wird zwischen einer unbehandelten oder kürzlich erfolgten Infektion und einer geheilten Infektion unterschieden.

Bei der Untersuchung wird empfohlen, sowohl treponemale als auch nicht-treponemale Reaktionen durchzuführen. Um die Diagnose einer Syphilis zu stellen und zu bestätigen, sind positive Ergebnisse bei beiden Arten von Tests erforderlich – treponemal und nicht-treponemal. Daher werden nicht-treponemale Tests in Kombination mit treponemalen Tests eingesetzt und in bestimmten Zeitabständen vor, während und nach Ende der Behandlung durchgeführt.

1. Nicht-treponemale Tests

Die bekanntesten nicht-treponemalen Tests mit visueller Interpretation der Ergebnisse sind

• RW - Wasserman-Reaktion mit Lipidantigenen (Komplementfixierungsreaktion mit Cardiolipin-Antigen, PCK)
• Kanna-Reaktion (derzeit nicht verwendet),
• zytocholische Sachs-Vitebsky-Reaktion (derzeit nicht verwendet),
• Mikropräzipitationsreaktion mit Plasma oder inaktiviertem Serum (MPR oder RMP),
• RPR (Rapid Plasma Reagin Test),
• VERTRAUEN (Test mit Toluidinrot und unbeheiztem Serum, Toluidinrot unbeheizter Serumtest).

Unter den nicht-treponemalen Tests gibt es 2 Tests mit mikroskopischer Ablesung der Reaktionsergebnisse:

1. VDRL – (Forschungslabor für Geschlechtskrankheiten);

2. USR – Test zur Bestimmung aktiver Plasmareagine (Unheated Serum Reagins).

Die Reaktivität in nicht-treponemalen Tests weist in der Regel auf eine Gewebeschädigung hin und ist nicht immer spezifisch für Syphilis. Die einfache Implementierung und die geringen Kosten ermöglichen den Einsatz als Screening-Reaktionen bei der vorläufigen Diagnose einer Syphilis.

2. Treponemale Tests

Treponema-Tests verwenden spezifische Treponema-Antigene. Diese Tests sind zur Bestätigung der Diagnose erforderlich (RPGA, RIT, RIF und ELISA). Sie sind komplexer und teurer als Tests der Gruppe 1, aber auch spezifischer und empfindlicher. Antikörper in der Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit werden auch mit Treponemal-Tests nachgewiesen.

Herkömmliche Treponemaltests, die die Diagnose einer Syphilis bestätigen, erfordern teure Laborausrüstung und erfahrenes Personal und werden daher selten außerhalb spezialisierter Labore durchgeführt. Sie können jedoch mittlerweile durch einfache und schnelle Treponemalreaktionen ersetzt werden, die lokal und unter Verwendung von Vollblut durchgeführt werden können. Die Durchführung dieser Reaktionen erfordert keine langwierige Schulung oder besondere Bedingungen für die Lagerung von Reagenzien und Geräten.

Die vergleichsweise geringe Kostengünstigkeit, Bequemlichkeit und Praktikabilität treponemaler Expressreaktionen erregen Aufmerksamkeit, nicht nur als Methoden zur Bestätigung der Diagnose. Diese Tests können zum Screening auf Syphilis in der Primärversorgung (sie können vor Ort in derselben Gesundheitseinrichtung durchgeführt werden) oder in Gebieten verwendet werden, in denen keine Labore verfügbar sind. Da Antikörper gegen T. pallidum jedoch über mehrere Jahre hinweg nachgewiesen werden, unabhängig davon, ob der Patient behandelt wurde oder nicht, können treponemale Schnellreaktionen nicht zur Beurteilung der Wirksamkeit der Behandlung und zur Differenzialdiagnose zwischen unbehandelter und geheilter Syphilis herangezogen werden.

Klassifizierung serologischer Methoden zur Diagnose von Syphilis nach der Art der nachgewiesenen Antikörper

In der modernen Dermatovenerologie werden verschiedene serologische Reaktionen auf Syphilis zur Diagnose herangezogen. Einige Methoden, die vor zehn Jahren relevant waren, werden aufgrund ihrer Komplexität oder mangelnden Spezifität nicht mehr verwendet. Abhängig von den nachgewiesenen Antikörpern werden Methoden zur serologischen Diagnostik der Syphilis in drei Gruppen eingeteilt:

I. Lipid-(Reagin-)Reaktionen – Antikörper gegen Lipid-Antigene (Reagin) werden bestimmt:

1) Flockung: Mikroreaktion auf Glas mit Lipidantigenen – Express-Diagnosemethode (Präzipitationsmikroreaktionen – MRP), VDRL, CMF (Cardiolipin-Mikroflockungstest), RPR usw.;

2) Komplementfixierungsreaktion (CRF) mit Lipidantigenen: Wasserman-Reaktion (WR), qualitative und quantitative Methoden, thermostatisch und kalt (Kolmer-Reaktion);

3) Sedimentreaktionen, die derzeit nicht verwendet werden: die Cahn-Fällungsreaktion, die zytocholische Sachs-Vitebsky-Reaktion usw.;

II. Gruppen-Treponem-Reaktionen – Antikörper gegen Gruppen-Treponem-Antigene (Teil der mikrobiellen Zelle sowohl pathogener als auch saprophytischer Treponeme) werden bestimmt:

1) RSC mit Reiter-Protein-Antigen;

2) Immunfluoreszenzreaktion (RIF);

3) Immunadhäsionsreaktion (IAR).

III. Speziesspezifische Protein-Treponema-Reaktionen – Antikörper gegen spezifische Antigene der Treponema pallidum-Art werden bestimmt:

1) Treponema pallidum-Immobilisierungsreaktion (TRI);

2) Immunfluoreszenzreaktion RIF-abs und seine Varianten (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS usw.);

3) indirekte Hämagglutinationsreaktion von Treponema pallidum (IPHA) und seiner Modifikation TPPA.

4) Enzymimmunoassay (ELISA);

5) Immunblotting.

Praktische Anwendung serologischer Tests auf Syphilis

Verschiedene serologische Reaktionen werden für unterschiedliche praktische Zwecke eingesetzt.

Im Ausland kommen bei Massenbefragungen der Bevölkerung und wenn eine Notfallerkennung der Syphilis erforderlich ist, nicht-treponemale Selektionsreaktionen (VDRL, RPR etc.) zum Einsatz. Die Diagnose erfordert eine Bestätigung durch den FTA-ABS-, FTA-ABS- oder TPPA-Treponemaltest. Derzeit wird empfohlen, ELISA als Ersatz für VDRL in Screening-Tests zu verwenden. Dies liegt daran, dass sich der ELISA-Test durch Sensitivität, Spezifität, die Fähigkeit zur Automatisierung von Studien sowie die Entwicklung diagnostischer Testkits auszeichnet. Darüber hinaus wird ein umgekehrtes Schema der Testreihenfolge auf Syphilis begründet, bei dem zunächst Treponemaltests eingesetzt werden.

Um die Wirksamkeit der Therapie zu überwachen und die Infektionsaktivität zu beurteilen, wird die quantitative VDRL empfohlen. Als Bestätigungs-/Zusatztest wird ein ELISA-Test auf anti-treponemale IgM-Antikörper eingesetzt.

In der häuslichen Praxis wird ein Komplex serologischer Reaktionen (CSR) verwendet, einschließlich einer Mikropräzipitationsreaktion (MPR) mit Cardiolipin-Antigen und RSC mit Cardiolipin- und Treponemal-Antigenen. Kürzlich wurde im DAC empfohlen, RSK durch ELISA oder RPGA zu ersetzen. Ebenfalls verwendet werden RIF (und seine Modifikationen – RIF-Abs und andere), RIBT.

RIBT wird als Untersuchungsreaktion bei Unstimmigkeiten bei Treponemalreaktionen eingesetzt.

Ansätze zur laborserologischen Diagnose von Syphilis in der Russischen Föderation

Die Einführung einheitlicher Methoden der klinischen Laborforschung in der UdSSR und der Russischen Föderation in die Praxis ermöglichte die Einführung fortschrittlicherer Diagnosemethoden, rationalisierte die Arbeit klinischer Diagnoselabors, steigerte die Arbeitsproduktivität, reduzierte die Duplizierung von Labortests und wurde zur Grundlage für die Entwicklung rationeller Formen vorgefertigter Reagenzienkits.

Um die Diagnose der Syphilis zu verbessern, wurden 1985 in der UdSSR die nicht-treponemale Reaktion von RSC mit einem unspezifischen (Wassermann-)Antigen und Sedimentreaktionen (zytocholisch und Cana) als weniger empfindlich und nicht aus dem Diagnosekomplex ausgeschlossen Bereitstellung zusätzlicher Informationen.

Stattdessen wurde im Rahmen des Komplexes serologischer Reaktionen auf Syphilis (CSR) die Verwendung einer Komplementfixierungsreaktion mit Treponemal- und Cardiolipin-Antigenen (RSKt) und einer Mikropräzipitationsreaktion mit Cardiolipin-Antigen (RMA) vorgesehen. Die höhere Empfindlichkeit und der höhere Informationsgehalt dieser Reaktionsreihe gewährleisteten den Nachweis nicht nur von Reaginen, sondern auch von antitreponemalen Antikörpern.

1985

1. RMP mit Cardiolipin-Antigen mit Blutplasma und inaktiviertem Blutserum. Screening-Test zur isolierten Anwendung.

2. RSC mit Treponemal- und Kardiolipid-Antigenen; qualitative und quantitative Methoden der Inszenierung, thermostatisch und kalt;

3. Treponema pallidum-Immobilisierungsreaktion (TRE); Reagenzglas- und Melange-Herstellungsverfahren;

4. Immunfluoreszenzreaktion (RIF) in folgenden Modifikationen: RIF mit Absorption (RIF-abs) mit Blutserum und Kapillarblut, RIF-200, RIF mit gesamter Liquor (RIF-c); qualitative und quantitative Formulierungsmethoden. Diagnostik latenter und später Formen der Syphilis, Erkennung von DM (falsch-positive Ergebnisse)

5. Komplex klassischer serologischer Reaktionen (CSR): CSR (Wassermann-Reaktion) mit Cardiolipin und Treponemal-Antigenen + RMP. Vorbeugende Untersuchung der Bevölkerung auf Syphilis, Diagnose aller Syphilisformen, Überwachung der Wirksamkeit der Behandlung, Untersuchung von Syphilis-Patienten.

Im Jahr 2001 genehmigte das Gesundheitsministerium der Russischen Föderation ein neues Regulierungsdokument, das das Verfahren zur Durchführung diagnostischer Tests regelt – Verordnung des Gesundheitsministeriums der Russischen Föderation Nr. 87 vom 26. März 2001 „Über die Verbesserung der serologischen Diagnose von Syphilis“. .“

Um die Labordiagnose der Syphilis zu verbessern, die Arbeitsqualität zu verbessern und die weitere Ausbreitung der Syphilis zu verhindern, wird empfohlen, RSC im Komplex der Seroreaktionen (SSR) bei der Syphilisdiagnose durch ELISA und RPGA als Screening- und Bestätigungstests zu ersetzen. Weil Diese Testsysteme sind hochempfindlich, spezifisch und reproduzierbar.

Die Verordnung Nr. 87 vom 26. März 2001 „Zur Verbesserung der serologischen Syphilisdiagnostik“ sieht den Einsatz folgender Methoden zur Sero- und Liquordiagnostik der Syphilis in Russland vor:

1. RMP und ausländische Analoga (VDRL, RPR und ähnliche Mikroreaktionen) als Screening-Tests zum Screening der Bevölkerung auf Syphilis. RMP wird mit Plasma oder inaktiviertem Blutserum durchgeführt.
2. Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA). Antigen aus kultiviertem oder pathogenem Treponema pallidum. Diagnostische Reaktionen, auch zur Liquordiagnostik. Aufgrund der einfachen Herstellung und der Verfügbarkeit kommerzieller Testsysteme können sie als Screening-Tests eingesetzt werden.
3. Passive Hämagglutinationsreaktion (RPHA). Antigen aus kultiviertem oder pathogenem Treponema pallidum. Screening und diagnostische Reaktionen.
4. Qualitative und quantitative Varianten von RIF (RIF-abs, RIF-ts, RIF mit Kapillarblut aus einem Finger). Antigen – pathogener Treponema pallidum-Stamm Nichols.
5. Ein Komplex serologischer Reaktionen (CSR) auf Syphilis, bestehend aus einer Komplementfixierungsreaktion (CFR) mit Treponemal- und Cardiolipin-Antigenen und Blasenkrebs. Es ist möglich, die Komplementfixierungsreaktion durch ELISA oder RPHA zu ersetzen, auch in Kombination mit Blasenkrebs. DAC bezieht sich auf diagnostische Tests.
6. Treponema pallidum-Immobilisierungsreaktion (TRI), bei der pathogenes Treponema pallidum vom Nichols-Stamm als Antigen verwendet wird. RIBTs sind diagnostische Bestätigungstests.

Daher wird empfohlen, den Ablauf der Untersuchung von Patienten auf Syphilis in Gesundheitseinrichtungen wie folgt zu planen:

1. Bei der Erstuntersuchung wird eine Auswahl (Screening) Mikropräzipitationsreaktion (RMP) oder deren Modifikation (RPR, TRUST, VDRL) in quantitativer und qualitativer Form durchgeführt und im Falle eines positiven Ergebnisses ein spezifischer bestätigender Treponemaltest ( RPGA, ELISA, DAC, RIF), RIT);

2. Nach Beendigung der Therapie wird RMP oder seine Modifikation diagnostiziert und die Dynamik des Infektionsprozesses und die Wirksamkeit der Therapie anhand der Titerabnahme beurteilt. Als Bestätigung der Wirksamkeit der Therapie gilt eine Abnahme des Titers um das Vierfache oder mehr innerhalb eines Jahres.

Empfang nach Vereinbarung! Samstag Sonntag.

Serologische Methode ist eine Reihe von Reaktionen, die auf basieren Antigen-Antikörper-Interaktion (Ag-Ab) und zielt darauf ab, Antikörper gegen Antigene von Krankheitserregern von Infektionskrankheiten oder mikrobielle Antigene selbst im Blutserum und anderen Körperflüssigkeiten zu identifizieren. Die serologische Methode zeichnet sich durch eine hohe Sensitivität und Spezifität aus. Die meisten Reaktionen dieser Methode sind einfach durchzuführen und aufzuzeichnen, stehen einem breiten Spektrum von Laboratorien zur Verfügung, sind in der Regel sicher, wirtschaftlich und einer Standardisierung zugänglich. ZU Mängel Die serologische Methode lässt sich auf Folgendes zurückführen: 1) die indirekte Natur des Ergebnisses, wenn die Ätiologie der Krankheit nicht anhand der Isolierung des Erregers, sondern anhand der (Immun-)Reaktion des Körpers auf den Erreger beurteilt wird; 2) die Notwendigkeit eines parenteralen Eingriffs in den Körper des Patienten; 3) in den meisten Fällen späte Diagnose, die durch die natürliche Dynamik der humoralen Immunantwort erklärt wird; 4) die Möglichkeit, anamnestische Abs (aufgrund einer früheren Erkrankung oder Impfung) mit Abs einer aktuellen Infektion zu verwechseln. Bei der Bestimmung der mikrobiellen Antigene 3 und 4 gibt es keine Nachteile, es ist jedoch notwendig, die Zirkulationsmerkmale von Antigenen verschiedener Mikroben zu berücksichtigen und diese Merkmale mit der Möglichkeit der Materialentnahme für Forschungszwecke zu korrelieren.

Stufen der serologischen Methode:

1) nehmen Materialien für die Forschung. In den meisten Fällen ist das Material Blutserum. Es wird nach der Bildung eines Blutgerinnsels gewonnen. Das Blut sollte unter streng aseptischen Bedingungen gemäß Standardtechniken entnommen werden.

2) Die Wahl der serologischen Reaktion für einen bestimmten Fall hängt vom Zweck der Studie, der vermuteten Krankheit, der Krankheitsphase, dem Untersuchungsmaterial, der Empfindlichkeit der Reaktion und den Fähigkeiten eines bestimmten Labors ab. Zum Nachweis von Ab und Ag werden Agglutinationsreaktionen verwendet ( RA), passive Hämagglutination ( RPGA)), Immunfluoreszenz (RIFF), Hemmung der Hämagglutination ( RTGA), Niederschlag, Flockung, Komplementfixierungsreaktion (FFR) usw.

3) Aufbau einer serologischen Reaktion,

4) Registrierung einer serologischen Reaktion, um das Vorhandensein serologischer Infektionsmarker festzustellen.

Verschiedene serologische Reaktionen sind durch mehrere gekennzeichnet allgemeine Charakteristiken:

1) Da es sich bei allen serologischen Reaktionen um Wechselwirkungsreaktionen zwischen Ab und Ag handelt, wird in allen Fällen zum Nachweis des Vorhandenseins von Ab im untersuchten Substrat eine Reihe bekannter korpuskulärer oder löslicher Standard-Ags genannt Diagnostika. Um wiederum das Vorhandensein von Ag festzustellen, ist eine Reihe von erforderlich Immundiagnostische Seren,

2) Die Wechselwirkung von Ag und Ab erfolgt nur in Gegenwart eines Elektrolyten, bei dem es sich normalerweise um eine isotonische Natriumchloridlösung oder Puffermischungen handelt. Der pH-Wert des Systems sollte etwa 7 betragen.

3) Die Bildung des Ag-At-Komplexes erfordert eine Inkubationszeit unter besonderen Temperaturbedingungen (von +4 °C bis 37 °C). Die Bildung eines spezifischen Immunkomplexes erfolgt schnell; Mit bloßem Auge sichtbares Phänomen (Agglutination, Lyse usw.) - langsam, nach mehreren Stunden oder sogar Tagen,

4) Beide Komponenten der serologischen Reaktion (Antigen und Antikörper) müssen in äquivalenten Anteilen vorhanden sein. Ein Überschuss einer der Komponenten blockiert die Bildung des Ag-At-Komplexes und trägt zu falsch negativen Ergebnissen bei.

Serologische Reaktionen werden visuell, teilweise auch mit einer Lupe, erfasst. Der Kern der Berücksichtigung der serologischen Reaktion besteht darin, das Phänomen der Bindung von Ag und Ab durch die Bildung des Ag-At-Komplexes zu bestimmen. Optisch wird die Bildung des Ag-At-Komplexes von zwei Hauptphänomenen begleitet – Agglutination und Ausfällung. Die Unterschiede zwischen ihnen werden durch die Eigenschaften der für sie spezifischen Antigene und Antikörper bestimmt. Gleichzeitig gibt es unter den mikrobiellen Antigenen auch solche, die die Synthese nicht präzipitierender Antigene induzieren; die Bildung des Ag-Ab-Komplexes geht in diesem Fall weder mit dem Phänomen der Agglutination noch mit dem Phänomen der Ausfällung einher und identifiziert Die Tatsache der Bildung des Ag-Ab-Komplexes erfordert die Markierung der diagnostischen Komponente der Reaktion mit speziellen Markierungen oder die Übertragung des diagnostischen Antigens in einen anderen Aggregatzustand.

Bei der Beurteilung einer Reaktion werden drei Hauptkriterien verwendet: 1) das Vorhandensein und die Intensität der Reaktion (in Pluspunkten usw.); 2) diagnostischer Titer, 3) Anstieg des Ab-Titers im Krankheitsverlauf um das Vierfache oder mehr. Das Vorliegen einer Reaktion wird durch visuelle Phänomene oder durch die Bindung eines immunchemischen Markers festgestellt. Zur Beurteilung der Intensität der serologischen Reaktion wird das 4-„+“-Prinzip verwendet (Tabelle 7).

Tabelle 7.

System zur Beurteilung serologischer Reaktionen anhand von 4 „+“ für Agglutinations- und Fällungsreaktionen

Um die Ergebnisse einer serologischen Reaktion quantitativ darzustellen, wird das Konzept des Antikörper- oder Antigentiters verwendet. Um den Ab-Spiegel (oder Ag-Titer) zu bestimmen, ist es notwendig, eine serologische Reaktion durchzuführen, indem eine Reihe von Verdünnungen von Blutserum oder anderem Material (Titrat) hergestellt wird. Bei der Herstellung von Blutserumverdünnungen wird eine Elektrolytlösung (meistens isotonische Natriumchloridlösung) verwendet. Der Verdünnungsschritt (Titration) wird durch das Verhältnis des Volumens der Elektrolytlösung zum Volumen des Blutserums festgelegt. Beispielsweise werden bei aufeinanderfolgenden Verdünnungen in 2-fachen Schritten gleiche Volumina an Elektrolytlösung und Blutserum im 1. Reagenzglas gemischt, wobei in 5-fachen Schritten 1 Volumenteil Serum zu 4 Volumenteilen der Elektrolytlösung gegeben wird ; mit einem Schritt von 10 bis 9 1 Volumen Blutserum wird zum Volumen der Elektrolytlösung hinzugefügt (Tabelle 8).

Die Website stellt Referenzinformationen nur zu Informationszwecken bereit. Die Diagnose und Behandlung von Krankheiten muss unter Aufsicht eines Spezialisten erfolgen. Alle Medikamente haben Kontraindikationen. Rücksprache mit einem Spezialisten ist erforderlich!

Zu untersuchendes Material

• Blutserum
• Speichel
• Fäkalien

• die Erde

Analysemethode oder Blutentnahmemethode

Merkmale des Bluttransports und der Serumlagerung

Wozu dienen serologische Tests?

Grundlegende Methoden der serologischen Diagnostik

Immunfluoreszenzreaktion (RIF)

Die Immunfluoreszenzreaktion ist ein sehr arbeitsintensiver Prozess, der von einem Spezialisten viel Zeit und Verantwortung erfordert. Die Reaktion beginnt mit der Herstellung von Lösungen, dann werden die Seren und ihre Kontrollproben titriert ( ein Verfahren, mit dem Sie den Gehalt einer bestimmten Substanz bestimmen können, indem Sie die Testlösung nach und nach mit einer kontrollierten Menge des Reagenzes mischen). Zuvor hergestellte Verdünnungen und deren Kontrollproben werden vorsichtig auf Objektträger mit dem Antigen aufgetragen. Anschließend werden die Präparate inkubiert, anschließend gewaschen und an der Luft getrocknet. Auf die Objektträger wird eine dünne Schicht Antiserum mit dem Antigen aufgetragen. Anschließend erfolgt eine sekundäre Inkubation der Präparate und die gesamte vorherige Aktionskette wird wiederholt, bis das Präparat getrocknet ist. Dazu wird das Präparat auf einem Objektträger mit Glycerin behandelt und unter einem Fluoreszenzmikroskop untersucht.

Die Ergebnisse der Reaktion werden auf einer vierstufigen Skala bewertet, die durch die Intensität des oberflächlichen gelbgrünen Leuchtens von Antigenzellen gekennzeichnet ist:
+ Sehr schwaches Leuchten der Zelle, nur an der Peripherie wahrnehmbar
++ schwaches Leuchten der Zellperipherie, aber mit deutlich wahrnehmbarem Grünstich
+++/++++ hellgrünes Leuchten der Zellperipherie
Als Reaktionstiter gilt eine Serumverdünnung, bei der mindestens 50 % der Antigenzellen ein klares Oberflächenglühen aufweisen, also das Ergebnis der Reaktion +++ oder ++++ . Der Reaktionsbereichswert liegt zwischen 1/80 und 1/100.

Die Intensität der Reaktion hängt von der Anzahl der ausgefällten roten Blutkörperchen am Boden der gebildeten Löcher ab:
– eine negative Reaktion, die durch die Ablagerung roter Blutkörperchen am Boden der Vertiefungen in Form eines kleinen Rings mit glatten Kanten oder eines „Knopfes“ gekennzeichnet ist.
+ Bei geringer Intensität ist diese Reaktion durch kleine einzelne Ablagerungen am Boden des Lochs gekennzeichnet. Nicht agglutinierte rote Blutkörperchen bilden einen „kleinen Ring“ in der Mitte der Vertiefung
++ Mittlere Intensität, gekennzeichnet durch die Bildung eines „breiten, dichten Rings“ nicht agglutinierter Erythrozyten am Boden des Lochs
+++ Bei intensiver Reaktion bilden verklebte Erythrozyten sogenannte „Schirme“, in deren Mitte deutlich Ringe aus abgesetzten, nicht verklebten Erythrozyten zu erkennen sind
++++ eine äußerst intensive Reaktion, bei der alle roten Blutkörperchen agglutinieren und den Boden der Vertiefungen unter Bildung von „Regenschirmen“ auskleiden.
Als Titer dieser Reaktion gilt die letzte Serumverdünnung, bei der zumindest eine deutliche Agglutination der Erythrozyten nachweisbar ist +++ , das heißt mit einer intensiven oder scharf intensiven Reaktion.

Die Zuverlässigkeit und Qualität serologischer Diagnosemethoden hängt von der Organisation der internen und externen Laborkontrolle ab, die aus mehreren unabhängigen Verfahren zur Beurteilung der Qualität der Analyseergebnisse besteht.

Immobilisierungsreaktion von Treponema pallidum(RIBT). Voraussetzung ist, dass der Patient vor der Untersuchung keine Antibiotika einnimmt, die eine toxische Wirkung auf Treponema pallidum haben und zu deren unspezifischer Immobilisierung führen.

Positive Ergebnisse der RIBT werden etwa ab der Mitte der sekundären Neuphase der Syphilis festgestellt und können noch lange nach der Behandlung bestehen bleiben. Bei Bedarf wird die Methode zum Nachweis von AT im Liquor eingesetzt; diese Studie zeichnet sich durch eine hohe Spezifität, aber geringe Sensitivität (ca. 40 %) aus.

Aufgrund des späten (nicht früher als 8–9 Wochen nach dem Zeitpunkt der Infektion) Auftretens von AT-Immobilisinen ist die RIBT für die Diagnose früher Formen der Syphilis von geringem Nutzen; Die Methode kann zu falsch positiven Ergebnissen führen, insbesondere bei Patienten mit Autoimmunerkrankungen, bösartigen Erkrankungen und Diabetes. Darüber hinaus handelt es sich bei der RIBT um eine recht komplexe, arbeitsintensive und teure Analyse, die hochqualifiziertes Personal und das Vorhandensein eines Vivariums erfordert und daher in den letzten Jahren nur in bestimmten Labors eingesetzt wurde. In der Diagnostik wird RIBT als Reaktionsrichter bei Unstimmigkeiten in den Ergebnissen anderer serologischer Untersuchungen, zur Differenzierung falsch-positiver Ergebnisse und bei der Diagnose von Spätformen der Syphilis eingesetzt.

Komplementfixierungsreaktion mit Treponema-Antigen (RSC mit TA) Die Sensitivität der Methode liegt bei etwa 80 %, die Spezifität bei 98 %. Die Methode war Teil einer Reihe serologischer Standardreaktionen für Syphilis, die durch die Verordnung des Gesundheitsministeriums der UdSSR Nr. 1161 vom 2. September 1985 „Über die Verbesserung der serologischen Diagnose von Syphilis“ geregelt wurden. Derzeit ist die Verwendung dieser Reaktion, ähnlich wie bei CSC mit Cardiolipin-Antigen, auf einzelne Labore beschränkt.

Immunfluoreszenzreaktion (RIF). Zur Diagnose von Syphilis werden mehrere Modifikationen von RIF verwendet: RIF-c – zum Nachweis von AT im Liquor, RIF-200 (das Testserum wird vor der Reaktion 200-fach verdünnt); RIF-Abs (RIF mit Absorption), IgM-RIF-Abs (zur Bestimmung von IgM AT). Hinsichtlich Sensitivität und Spezifität steht RIF-abs der RIBT in nichts nach, allerdings ist die Umsetzung dieser Methode deutlich einfacher. Die Ergebnisse von RIF-abs werden ab der 3. Woche nach der Infektion positiv (vor dem Auftreten des Schankers oder gleichzeitig damit), es handelt sich um eine Methode zur Früherkennung von Syphilis. Positive Forschungsergebnisse finden sich oft noch viele Jahre nach der vollständigen Behandlung der Frühsyphilis, bei Patienten mit Spätsyphilis sogar über Jahrzehnte hinweg.

Indikationen zur Durchführung von RIF-Abs:

• positive Ergebnisse der NTT bei schwangeren Frauen ohne klinische und anamnestische Daten, die auf Syphilis hinweisen;
• Untersuchung von Personen mit verschiedenen somatischen und infektiösen Erkrankungen, bei denen positive NTT-Ergebnisse festgestellt werden;
• Untersuchung von Personen mit für Syphilis charakteristischen klinischen Manifestationen, jedoch mit negativen NTT-Ergebnissen;
• Früherkennung von Syphilis;
• in einigen Fällen - als Kriterium für den Erfolg einer antisyphilitischen Behandlung: Der Übergang von einem positiven RIF-abs zu einem negativen nach der Behandlung ist ein 100-prozentiges Kriterium für die Heilung der Syphilis.

IgM-RIF-abs wird für den separaten Nachweis von ATs der Ig-Klasse verwendet, was von besonderem Interesse bei der Diagnose der angeborenen Syphilis ist, wenn im Körper des Kindes synthetisierte Treponema-ATs durch IgM repräsentiert werden und IgG-ATs mütterlichen Ursprungs sind. Indikationen für diese Studie sind: Diagnose einer angeborenen Syphilis; Beurteilung der Ergebnisse der Behandlung der Frühsyphilis.

RIF weist eine hohe Sensitivität (98,5 %) und Spezifität (99,6 %) für fast alle Formen der Syphilis auf. Die Nachteile des RIF sind: die Unmöglichkeit, die Forschung zu automatisieren und die Ergebnisse aufzuzeichnen; Schwierigkeiten bei der Herstellung eines hochwertigen Antigens aus einer Suspension von Treponema pallidum, die aus dem Hoden eines infizierten Kaninchens gewonnen wurde; Subjektivität bei der Bewertung der Ergebnisse.

Passive Hämagglutinationsreaktion (RPHA). Ein Vergleich der mit RPGA und RIBT, RIF-abs, CSR, MRP erzielten Ergebnisse zeigte eine hohe Sensitivität und Spezifität von RPGA bei der Diagnose von Syphilis, was mit den Ergebnissen von RIF-abs übereinstimmt.

RPGA kann in qualitativen und quantitativen Versionen durchgeführt werden; es gibt ihre Makro- und Mikromodifikationen. Mit der quantitativen RPGA-Methode lässt sich die Konzentration spezifischer Treponemal-Antikörper im Blut bestimmen. Titer von 1:640 und darunter sind typisch für Patienten, die in der Vergangenheit wegen Syphilis behandelt wurden. Höhere Titer sind bei aktiver, unbehandelter Infektion häufig.

Positive Ergebnisse der RPGA werden in der Regel 3 Wochen nach Auftreten des Schankers und dann bei Patienten festgestellt, die seit vielen Jahren, oft lebenslang, an Syphilis leiden.

Die Sensitivität von RPHA beträgt 76 % für primäre Syphilis; 100 % bei sekundärer Syphilis; 97 % bei latenter Syphilis; 94 % für Spätsyphilis. Die Spezifität von RPGA ist mit 99 % höher als die Spezifität von RIF-Abs.

Aufgrund des Verhältnisses von hoher Spezifität, Sensitivität, einfacher Durchführung und Standardisierung der Reagenzien unter den Treponemaltests zur Serodiagnose von Syphilis nimmt RPGA in der klinischen Praxis weltweit stets einen Spitzenplatz ein.

Besondere Vorteile von ELISA sind: hohe Sensitivität und Spezifität der Methode; Automatisierung der Reaktionseinstellung; hoher Standardisierungsgrad; die Fähigkeit, eine große Anzahl von Serumproben zu untersuchen; in der quantitativen Abrechnung und objektiven Dokumentation der erzielten Ergebnisse; die Möglichkeit der gleichzeitigen Bestimmung des Titers antitreponemaler Antikörper verschiedener Klassen (IgG und IgM) in einer Probe; Eignung zur Frühdiagnose der Syphilis und Diagnose der angeborenen Syphilis; in der Benutzerfreundlichkeit für Bluttests im Bluttransfusionsdienst; Anwendbarkeit als konfirmatorischer spezifischer Treponemaltest. Die ELISA-Sensitivität beträgt 98–100 %, die Spezifität 96–100 %.

Zu den Nachteilen des ELISA gehören: Ungeeignetheit für die Untersuchung einzelner Proben; längere Zeitspanne bis zum Erhalt des Ergebnisses und kürzere Haltbarkeit von beispielsweise ELISA-Kits im Vergleich zu RPGA.

Immunblot (IB). Eine der modernen Methoden zur Diagnose von Syphilis ist die IB zur Bestimmung von IgG- oder IgM-Antikörpern gegen bestimmte Treponema pallidum-Antikörper.

Die Methode weist eine hohe Sensitivität (bis zu 100 %), Spezifität (98 %) und Reproduzierbarkeit (100 %) auf. Die Studie ermöglicht die gleichzeitige Untersuchung des Spektrums von Antikörpern gegen mehrere T. pallidum-Antigene unter Verwendung hochreiner rekombinanter und peptidischer Antigene, die die unspezifische Serumreaktivität auf ein Minimum reduzieren.

All dies begründet die Möglichkeit, die IB-Methode gegenüber anderen Treponemaltests zur Überprüfung der Syphilis-Diagnose in schwierigen Fällen vorzuziehen, insbesondere zur Diagnose von Syphilis in der zweiten Hälfte der Inkubationszeit, latenter angeborener Syphilis in den ersten Tagen B. im Leben eines Kindes, zur Identifizierung einer latenten Syphilis bei Personen mit schwacher humoraler Antwort sowie zur Unterscheidung falsch-positiver Ergebnisse von anderen Tests.

Infektionskrankheiten lösen im Blut eines Erkrankten die Produktion entsprechender Antikörper aus. So funktioniert die Immunabwehr des Körpers.

Die Bestimmung des Vorhandenseins von Antikörpern gegen ein bestimmtes Virus oder Bakterium ermöglicht es, den Ausbruch einer Krankheit zu erkennen, bevor ihre Hauptsymptome auftreten. Serologische Tests liefern heute das umfassendste Bild. Daher werden wir in diesem Artikel über serologische Tests sprechen.

Was sind serologische Tests?

Methoden zur Untersuchung biologischer Materialien von Menschen und Tieren, die darin Antikörper oder Antigene nachweisen können, die der Körper als Schutzreaktion im Kampf gegen Infektionen produziert, werden als serologische Untersuchungen bezeichnet. Solche Methoden werden zur Bestimmung des Erregers einer Infektion sowie zu folgenden Zwecken eingesetzt:

• Bestimmung der Blutgruppe,
• Untersuchung der Immunität durch Bestimmung des Niveaus ihrer humoralen Komponente,
• Bestimmung von Gewebeantigenen.

Wem wird es verschrieben?

Warum es tun?

Die Methode wird von Fachleuten als Möglichkeit zur qualitativ hochwertigen Diagnose der Erkrankung geschätzt.

• Befindet sich der Patient im Krankheitsstadium, wird empfohlen, im Abstand von etwa einer Woche wiederholte Untersuchungen durchzuführen, um die Wirksamkeit der eingesetzten Behandlung zu überwachen.
• Um festzustellen, welcher Erreger die Krankheit nach der Erkrankung beim Patienten verursacht hat, werden häufig serologische Tests eingesetzt.

Verfahrensarten

Serologische Forschungsmethoden basieren auf verschiedenen Reaktionen:

• Neutralisierungsreaktion beruht auf der Eigenschaft von Immunserum-Antikörpern, als neutralisierendes Mittel gegen Toxine oder Mikroorganismen selbst zu wirken und deren schädliche Auswirkungen zu verhindern.
• Agglutinationsreaktion, die wiederum in folgende Untertypen unterteilt ist:
  • direkte Reaktionen – sie werden verwendet, um Blutserum auf das Vorhandensein von Antikörpern zu testen. Der untersuchten Zusammensetzung werden abgetötete Mikroben zugesetzt. Wenn ein Niederschlag in Form von Flocken auftritt, bedeutet dies, dass die Reaktion auf diesen Mikrobentyp positiv ist.
  • die indirekte Hämagglutinationsreaktion wird durch Einbringen von Erythrozyten in das Blutserum durchgeführt, an denen Antigene adsorbiert sind; Diese Wirkstoffe interagieren mit der gleichen Art von Antigenen, die im Blutserum vorhanden sind, was zu einem bogenförmigen Niederschlag führt.
• Reaktion mit Komplement zur Erkennung von Infektionskrankheiten eingesetzt. Die Methode wird durch die Aktivierung des Komplements und die Beobachtung der im untersuchten Medium ablaufenden Reaktionen umgesetzt.
• Fällungsreaktion wird durch Auftragen einer Antigenlösung auf ein flüssiges Medium – Immunserum – durchgeführt. Das für diese Methode verwendete Antigen ist löslich. Die Reaktion besteht darin, dass der Antigen-Antikörper-Komplex ausfällt; Der entstehende Niederschlag wird als Niederschlag bezeichnet.
• Reaktion mit markierten Antigenen und Antikörpern basiert auf der Tatsache, dass Mikroben oder Gewebeantigene, die auf eine bestimmte Weise verarbeitet werden, unter dem Einfluss ultravioletter Strahlen die Fähigkeit erlangen, Licht zu emittieren. Die Methode wird nicht nur zur Diagnose von Antigenen, sondern auch zur Bestimmung von Arzneimitteln, Enzymen und Hormonen eingesetzt.

Kontraindikationen für

Da die Methode die Untersuchung des biologischen Materials des Patienten beinhaltet, kann sie keine negativen Auswirkungen auf den Menschen haben. Daher gibt es keine Kontraindikationen für die Anwendung.

Die Studie ist völlig sicher.

Im Folgenden beschreiben wir, wie ein serologischer Test durchgeführt wird.

Hinweise zum Testen

Die Methode dient zur Bestimmung des Erregers einer Infektion, unter anderem bei folgenden Erkrankungen:

• HIV infektion,
• Toxoplasmose,
• durch sexuellen Kontakt erworbene Infektionskrankheiten;
• Diphtherie,
• Verfügbarkeit;
• Brucellose,
• Staphylokokken-Infektionen,
• Hepatitis.

Die Methode wird auch zur Identifizierung folgender Krankheiten eingesetzt:

• Opisthorchiasis,
• Amöbiasis,
• Zystizerkose,
• Giardiasis,
• Lungenentzündung.

Vorbereitung auf den Eingriff

Für den Eingriff sind keine besonderen Vorbereitungen erforderlich. Eine Bedingung ist zu beachten: Die Blutentnahme erfolgt auf nüchternen Magen.

Im Folgenden wird der Algorithmus zur Probenahme (Entnahme) von Blut(material) für serologische Tests beschrieben.

Analyse durchführen

Blut wird aus der Ulnarisvene entnommen. Damit die Studie funktioniert, wird das Blut nicht mit einer Spritze, sondern durch die Schwerkraft entnommen. Eine Nadel ohne Spritze wird in eine Vene eingeführt und bis zu 5 ml Blut in einem Reagenzglas gesammelt.

Während des Eingriffs verspürt der Patient leichte Beschwerden, wenn die Nadel in die Vene eingeführt wird. Die weiteren Schritte sind überhaupt nicht besorgniserregend.

Nachfolgend wird die Interpretation der Ergebnisse einer serologischen Blutuntersuchung beschrieben.

Dekodierung der Ergebnisse

Die erhaltenen Ergebnisse sollten im Zusammenhang mit dem klinischen Krankheitsbild betrachtet und die Verdachtsdiagnose anhand mehrerer Tests überprüft werden. Dies liegt daran, dass die Studien spezifisch sind und teilweise keine absolute Sensitivität gegenüber Infektionskrankheiten aufweisen.

Nachfolgend wird der Preis für eine umfassende serologische Blutuntersuchung beschrieben.

Durchschnittliche Kosten des Verfahrens

Der Preis des Verfahrens hängt von der Art der Studie ab. Sie setzt sich aus den Kosten für die Durchführung der Analyse und den Kosten für Antikörper gegen einen bestimmten Erreger zusammen. Die durchschnittlichen Kosten des Verfahrens liegen bei 700 Rubel.

Serologische Reaktionen werden im folgenden Video beschrieben: