NPO Diagnostic Systems LLC에서 생산한 테스트 시스템. 엘리사는 무엇입니까? 효소면역분석법 : 본질, 원리, 단점

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제조업체: 진단 시스템

국가 러시아

단위 측정값: 설정

포장 유형: 판지 상자

기사: L-1823

설명

매독 진단을 목적으로 인간 혈청(혈장) 및 뇌척수액에서 Treponema pallidum(T. pallidum)에 대한 클래스 G, M 및 A의 항체를 검출하기 위한 효소 면역분석 테스트 시스템, 96x2 측정을 위한 완전한 시약 세트, 다음에 적합함 수동 방법 및 자동 테스트 분석기. 이 방법은 샘플에 존재하는 모든 클래스의 특정 항트레포네마 항체가 플레이트의 웰에 고정된 T. pallidum의 면역우세 단백질 유사체인 재조합 항원에 동시에 결합한다는 사실로 구성된 "트랩" 원리를 기반으로 합니다. 그리고 인간 혈청(혈장) 또는 뇌척수액 샘플과 접합체를 공동으로 배양할 때 퍼옥시다제 고추냉이로 표지된 동일한 항원에 적용됩니다. TMB를 포함하는 기질-발색 혼합물을 플레이트의 웰에 첨가할 때 색상 변화는 테스트 샘플에 Treponema pallidum에 대한 특정 항체가 존재함을 나타냅니다.

Treponema pallidum에 대한 항체 검출은 매독 진단에 중요한 역할을 합니다. 왜냐하면 T. pallidum은 세포 배양에서 분리할 수 없고 병원체를 직접 확인하기 위한 샘플을 질병의 잠복기 및 후기 단계에서 이용할 수 없는 경우가 많기 때문입니다. 매독의 혈청진단에는 비트레포네말(RMP, RPR, VDRL) 검사와 트레포네말(RPGA, RIF, ELISA) 검사가 사용됩니다. 총 항체를 결정하기 위한 효소면역분석 검사는 기증자 혈액의 대량 선별검사와 일련의 혈청학적 검사의 일부로 매독 진단에 사용됩니다. 성공적인 치료 후에도 대부분의 경우 트레포네마 검사의 반응성은 유지됩니다.

세트 내용:
1. 폴리스티렌 96웰 접이식 플레이트 - 2개,
2. 접합체는 투명한 노란색 액체이며,
3. 양성대조군 - 투명한 붉은색 액체,
4. 음성대조군 - 투명한 녹색액체,
5. 세척액, 농축액, pH 6.9~7.6,
6. TMB는 투명한 무색액체이며,
7. 기질 용액 - 투명한 무색 액체, pH ~4.2.
8. 시약(0.2M)을 중지하고,
9. 사용 지침 및 품질 인증서.
보관 조건: +2...8°C 온도에서는 동결이 허용되지 않습니다.
유통기한은 키트 라벨에 표시된 생산일로부터 15개월입니다.
TU 9398-182-05941003-2010의 요구 사항을 준수합니다.
Roszdravnadzor에 등록되었습니다.

AP 라이트, T.I. 울라노바
LLC "연구 및 생산 협회"진단 시스템",

니즈니 노브고로드
급성 및 만성 B형 간염의 구체적인 진단 및 결과 예측을 위한 ELISA 면역 테스트 시스템 "DS-ELISA-HBeAg" 및 "DS-ELISA-anti-HBe"
B형 간염은 심각한 증상을 보이는 바이러스성 전염병이다.

염증성 간 손상. 사망자의 약 1%가 다음에서 발생합니다.

질병의 급성기, 4-10%의 경우 만성으로 변합니다.

후속 간경변 및 원발성 간경변의 형성 가능성이있는 과정

간암종.

급성 B형 간염 발병률이 감소하는 추세에도 불구하고 처음으로 만성 바이러스 간염으로 진단된 역학적으로 위험한 환자 그룹과 이 질병의 원인 물질의 보균자 그룹이 계속해서 형성되고 있습니다. . 가임기 인구와 청소년 사이에서 B형 간염 발병률이 높기 때문에 예후가 좋지 않습니다.

따라서 B형 간염의 치료, 예방 및 진단 문제는 현재 특히 중요하며, 현재 효소 결합 면역흡착 분석법은 이 감염의 지표를 검출하는 데 널리 사용됩니다. HBV의 가장 중요한 혈청학적 표지에는 e-항원(HBeAg)과 e-항원에 대한 항체(anti-HBe)가 포함됩니다. HBeAg는 높은 혈액 오염과 관련이 있으며 이는 B형 간염 바이러스(HBV)의 활성 복제를 나타냅니다. HBeAg의 높은 역가는 높은 DNA 중합효소 활성에 해당하며 항상 완전한 데인 입자의 검출과 결합된다는 것이 확립되었습니다. HBeAg를 함유한 혈청이 건강한 사람의 혈액에 들어가면 감염 위험은 혈청전환이 발생한 후보다 훨씬 더 높습니다.

급성 B형 간염에서 HBeAg는 감염 과정의 초기 단계에서 혈액에서 검출되며, 이미 질병의 첫 번째 임상 발현에서 HBsAg의 출현보다 일주일 뒤쳐집니다. 주기적 과정의 급성 B형 간염(AHB)은 HBeAg의 단기 순환이 특징입니다. 곧 황달 기간의 2-3주에 항-HBe가 나타나 질병의 유리한 결과를 예측할 수 있습니다.

Anti-HBe는 2~5년 동안 혈액 내를 순환하며, 그 빈도는 수개월 동안 지속됩니다.

HBeAg-antiHBe 혈청전환이 시작되면 활동이 급격히 감소합니다.

감염 과정. 질병 발생 2개월 후 환자의 혈액에서 HBeAg가 검출되면 병리학적 과정이 만성화되었음을 나타냅니다. 이 경우 항-HBe는 HBcAg에 대한 항체가 나타난 지 수년 후에 형성되거나 전혀 검출되지 않을 수 있습니다.

Anti-HBe의 출현은 다음에서 바람직하지 않은 예후 가치를 가질 수 있습니다.

심각한 형태의 HBV의 급성기. 이는 전핵 영역의 돌연변이에 해당합니다.

HBV "e-" 균주의 형성.

이 작업의 목표는 매우 민감하고 구체적인 개발을 위한 것이었습니다.

HBeAg 및 항-HBe 검출 및 이들의 주요 특성 평가를 위한 효소 면역분석 테스트 시스템.

재료 및 방법.

1. 효소 면역흡착 시험 시스템 “DS-ELISA-HBeAg”. 유효한 테스트 시작

NPO Diagnostic Systems(Nizhny Novgorod)에서 생산한 재조합 HBeAg에 대한 다클론 염소 항체는 고체상에 흡착되어 있으며, 접합체는 NPO Diagnostic Systems(Nizhny Novgorod)에서 생산한 양고추냉이 과산화효소로 표지된 재조합 HBeAg에 대한 다클론 염소 항체입니다. 분석 계획은 1단계 "샌드위치"이며 총 반응 시간은 1.5시간입니다. 혈청 샘플은 희석되지 않은 상태로 분석됩니다.

2. 효소 면역흡착 테스트 시스템 “DS-ELISA-anti-HBe”. 테스트의 기본은

NPO Diagnostic Systems에서 생산한 재조합 HBeAg(AHBV 102),

니즈니노브고로드(Nizhny Novgorod), 고체상에 흡수되고 양 고추냉이 퍼옥시다제와 항-IgG 접합체, 모스크바의 Sorbent Service에서 생산. 반응은 두 단계로 진행됩니다. 시험 혈청을 1/10 희석으로 고정된 항원에 첨가하고 배양하고 결합되지 않은 성분을 제거한 후 고추냉이 퍼옥시다제로 표지된 인간 IgG에 대한 마우스 단일클론 항체를 사용하여 특정 면역복합체를 검출합니다.

3. 개발된 테스트 시스템을 평가하기 위해 2178개의 혈청 샘플이 사용되었습니다.

피. 이 중 480개는 건강한 기증자의 혈청 샘플이었습니다. 1680개의 샘플은

B형 간염 바이러스의 다양한 표지자가 포함된 혈청 샘플입니다.

급성 바이러스성 B형 간염의 임상 진단을 받은 환자로부터 시간이 지남에 따라 18개의 샘플을 얻었습니다. 이전에는 Nizhny Novgorod의 NPO Diagnostic Systems에서 생산한 테스트 시스템을 사용하여 모든 샘플에서 HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc의 존재 여부를 테스트했습니다. "ELISA-HBsAg/m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-항-HBe", "ELISA-항-HBc".

4. 개발된 테스트 시스템에 대한 비교 평가는 다음을 사용하여 수행되었습니다.

프랑스 BIO-RAD가 생산한 상업용 약물 "Monolisa HBe";

결과 및 토론. NPO "진단 시스템"은 "DS-ELISA-HBeAg" 및 "DS-ELISA-anti-HBe"라는 두 가지 새로운 진단 키트를 개발했습니다. "DS-ELISA-HBeAg" 테스트 시스템은 효소 결합 면역흡착 분석법을 사용하여 인간 혈청(혈장)에서 B형 간염 바이러스의 e-항원을 검출하도록 설계되었으며 감염성 간염의 활성을 결정하는 특정 진단에 사용할 수 있습니다. B형 간염의 중증도와 결과를 예측하는 과정입니다.

"DS-ELISA-anti-HBe" 테스트 시스템은 사람의 혈청(혈장)에서 B형 간염 바이러스의 e-항원에 대한 IgG 항체를 검출하도록 설계되었으며 다음과 같은 테스트가 가능합니다.

B형 간염의 감염 과정을 예측하고 치료를 모니터링하는 데 사용됩니다.

새로운 테스트의 특이성을 연구하기 위해 분포를 평가했습니다.

함유 및 함유되지 않은 혈청 샘플의 광학 밀도(OD)

HBeAg 또는 항-HBe. 건강한 기증자의 혈청 샘플과 B형 간염 바이러스의 다양한 마커를 위해 선별된 혈청 샘플을 사용했습니다.

수혈 스테이션. 연구 결과는 두 인구 집단의 상당한 분리를 보여주었습니다. HBeAg가 포함되지 않은 혈청 샘플의 OD 값은 0.011~0.111 범위였으며, HBeAg가 포함된 혈청 샘플의 주요 피크 범위는 2.186~3.186이었습니다(그림 1a).

그림 1a. "DS-ELISA-HBeAg" 테스트 시스템에서 HBeAg를 포함하는 혈청 샘플과 포함하지 않는 혈청 샘플의 OD 분포
낮은 OD(0.3-0.6)를 갖는 혈청 그룹에 해당하는 피크는 아마도 감염 과정의 초기 단계에서 수집된 혈청 샘플로 구성됩니다.

이미 잠복기 동안 HBsAg와 HBeAg는 환자의 혈액에 자연적으로 등록되어 잠재적인 역학적 위험이 확인됩니다.

항-HBe를 함유하지 않은 혈청 샘플의 광학 밀도 범위

는 0.002에서 0.122 범위에 있었고, 항-HBe를 함유한 혈청 샘플의 주요 피크 OD는 2.431에서 3.231 범위에 있었습니다(그림 1b).

쌀. 1b. "DS-ELISA-anti-HBeAg" 테스트 시스템에서 항-HBe를 함유한 혈청 샘플과 함유하지 않은 혈청 샘플의 OD 분포
항-HBe 양성 샘플의 OD 분포 특징을 연구했습니다.

( N=78) 및 HBsAg를 함유하지 않음( N=56).


쌀. 2a. "DS-ELISA-anti-HBe" 테스트 시스템에서 HBsAg를 함유한 HBe 양성 혈청 샘플.

그림 2b. "DS-ELISA-anti-HBe" 테스트 시스템에서 HBsAg를 포함하지 않는 항-HBe 양성 혈청 샘플의 OD 분포 특징.
HBsAg를 함유하지 않은 항-HBe 양성 혈청 샘플의 87% 광학 밀도는 0.41~0.81 범위였습니다(그림 2b). 더욱이, HBsAg를 함유한 항-HBe 양성 혈청 시료의 14%만이 이 범위의 OD를 나타냈습니다(그림 2a). HBsAg에 대한 음성 반응을 보이는 후기 회복기 단계에서는 HBeAg에 대한 항체 역가가 점진적으로 감소하는 것으로 알려져 있습니다(그림 2b). 따라서 항-HBe 양성 샘플의 주요 농도는 0.8 미만의 OD에 해당할 가능성이 있습니다.

얻은 데이터는 양성 및 양성 분리의 신뢰성을 나타냅니다.

질병의 단계에 관계없이 음성 혈청 샘플. "DS-ELISA-HBeAg" 및 "DS-ELISA-antiHBe" 테스트 시스템의 민감도와 특이도를 "Monolisa HBe" 테스트(BIORAD, 프랑스)와 비교하여 연구했습니다(표 1).

1 번 테이블
민감도와 특이도의 비교 특성

테스트 시스템 DS-ELISA-HBeAg 및 DS-ELISA-antiHB

표 1에 제시된 데이터는 결과가 100% 일치함을 보여줍니다.

HBeAg와 anti-HBe의 결합 적응증, 특히 이들의 정량적 평가는 추가적인 예후적 중요성을 갖는 것으로 알려져 있습니다. 항-HBe 역가의 급격한 증가는 활성 체액성 면역 반응을 특징으로 하며 사실상 만성화의 위협을 제거합니다. 우리는 “급성 바이러스 B형 간염”이라는 임상 진단을 받은 환자의 혈청 샘플에서 HBeAg/anti-HBe 함량의 변화를 분석했습니다(표 2).

표 2
HBV 환자의 HBeAg/anti-HBe 혈청전환 역학

* 입원부터 병원까지
모든 혈청 샘플은 혈청학적 마커의 존재 여부를 테스트했습니다.

OGV: HBsAg, 항-HBc, 항-HBc IgM. 관찰기간은 13일부터 38일까지였다. 1 번, 2 번, 6 번 환자에서는 HBeAg 역가 감소를 배경으로 항 HBe가 검출되었습니다. 3번 환자와 4번 환자에서는 각각 21일과 8일에 혈청에서 HBeAg가 사라진 후 항-HBe가 나타났다. 입원 당시 5번 환자의 혈청에서 HBeAg 검출을 분석한 결과 음성으로 나타났다. 동시에 시험 첫날에 이미 anti-HBe로의 전환이 등록되었습니다.

모든 피험자는 HBeAg에 대한 항체 역가가 증가하는 경향을 보였습니다.

임상의 유리한 역동성을 예측할 수 있는 혈청

급성 호흡기 증후군 및 빠른 회복의 징후.

새로운 테스트 시스템에 대한 연구는 높은 진단 신뢰성을 보여주었습니다. DS-ELISA-HBeAg와 DS-ELISA-antiHBe의 비교 결과는 Monolisa HBe 테스트와 100% 일치하는 것으로 나타났습니다.

B형 간염 환자의 혈청 샘플을 역학적으로 연구할 때,

높은 민감도와 특이도를 확인했습니다.

테스트 샘플과 접합체의 짧은 배양 시간(1시간)을 통해 가능한 가장 짧은 시간에 치료 조치를 수행하기 위한 올바른 전략을 결정할 수 있습니다. 생성된 테스트 시스템은 사용하기 쉽고 경제적입니다(HBeAg를 결정하려면 혈청 50μl가 필요하고 항-HBe를 결정하려면 혈청 10μl가 필요함). 검사의 높은 품질 특성으로 인해 B형 간염의 감염 과정을 예측하고 치료를 모니터링하는 데 성공적으로 사용될 수 있습니다.
문학

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UDC 616.98:578.828.6]-092:612.017.1.064]-078

Zagryadskaya Yu.E.1, Neshumaev D.A.2, Kokotyukha Yu.A.2, Meirmanova E.M.2, Olkhovsky I.A.3, Puzyrev V.F.1, Burkov AN.1, Ulanova T.I.1

인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1) 감염 가능성이 있는 시기를 결정하기 위한 새로운 테스트 시스템 ds-ifa-vich-at-srok의 평가

1OOO NPO 진단 시스템, 603093, Nizhny Novgorod; 2크라스노야르스크 지역 AIDS 예방 및 통제 센터, 660049, 크라스노야르스크; 3FGBU "러시아 보건부 혈액학 연구 센터"(크라스노야르스크 지부), 크라스노야르스크

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이 작업의 목적은 HIV-1 감염의 가능한 시기를 확립하기 위한 새로운 테스트 시스템 DS-ELISA-HIV-AT-SROC의 효율성을 결정하는 것이었습니다.

역학적으로 감염 기간이 확립된 HIV 감염자의 혈청(혈장) 샘플(n = 281)과 상업용 혈청전환 패널 샘플을 연구했습니다. 연구 결과에 따르면, 감염 가능성이 가장 높은 개인의 샘플에서 HIV-1 감염 기간을 정확하게 결정할 확률은 95%였으며, 상업용 혈청전환 패널 샘플의 경우 100%였습니다. 얻은 데이터는 인간 면역결핍 바이러스 1형 감염의 가능한 시기를 결정하는 데 있어 DS-ELISA-HIV-AT-SROC 테스트 시스템의 높은 효율성을 입증했으며, 이는 절차의 속도와 단순성과 결합되어 다음을 권장합니다. 실험실 실습에 사용하기 위한 것입니다.

핵심 단어: 초기 HIV 감염; 장기 HIV 감염; 초기 HIV 감염의 분화; HIV 감염 기간; HIV-1.

인용: 역학 및 전염병. 2015; 20(3):23-27. Zagryadskaya Yu.E.1, Neshumaev D. A2, Kokotyukha Yu.A.2, Meyrmanova E.M.2, Olkhovskiy I.A.3, Puzyrev V.F.1, Burkov A.N.1, Ulanova T.I."\ 새로운 "DS-EIA- HIV- 평가 인간 면역결핍 바이러스 -1(HIV-1)에 대한 감염 가능성이 있는 시간을 결정하기 위한 AB-TERM" 분석

JNPO "진단 시스템", 22, Yablonevaya Str. , 니즈니 노브고로드, 러시아 연방, 603093

2크라스노야르스크 지역 에이즈 예방 센터, 45, Karla Marksa Str., 크라스노야르스크, 러시아 연방, 660049

3혈액 과학 센터(크라스노야르스크 지점), 50, Akademgorodok, Krasnoyarsk, Russian Federation, 660036

러시아의 HIV 감염에 대한 역학적 상황은 여전히 ​​극도로 엄격하므로 전염병에 대응하기 위한 새롭고 더 효율적이며 비용 효율적인 솔루션을 찾아야 합니다. 원격성을 결정하기 위해 테스트 시스템을 사용하는 실험실 연구 포함

일상적인 감시 활동을 통해 HIV 감염 여부를 파악하면 새로 진단된 HIV 양성인의 초기 감염 사례 발생 빈도를 결정할 수 있습니다. 인구 수준에서 이 기준을 분석하면 특정 지역에서 수행되는 예방, 통제 활동의 효과를 객관적으로 평가하는 데 도움이 됩니다. 테스트 시스템 DS-EIA-HIV-Ab-TERM을 사용하여 HIV-1 감염 순간부터 경과된 시간을 결정하는 데 있어 객관성이 향상되었습니다. 얻은 결과를 역학 조사에 사용할 수 있는 기회를 제공합니다. 연락 담당자를 더욱 정확하고 완벽하게 식별합니다. HIV 약물 내성 모니터링에 대한 보완 연구로서 항레트로바이러스 요법 처방에 관한 문제를 해결하려면 감염 가능성이 있는 기간을 결정해야 할 수도 있습니다. 이 연구의 목적은 HIV-1 감염 가능성이 있는 시기를 결정하기 위한 새로운 테스트 시스템 DS-EIA-HIV-Ab-TERM의 효율성을 결정하는 것이었습니다. 역학적으로 감염 시간이 확립된 HIV 감염자의 혈액 혈청 샘플(혈장)과 상업용 혈청전환 패널 샘플이 연구되었습니다. 수행된 연구 결과에 따르면, 감염 사실이 가장 확실하게 확인된 개인의 샘플에서 HIV-1 감염의 원격성을 정확하게 검출할 확률은 95%였으며, 상업용 혈청전환 패널 샘플의 경우 100%였습니다. 데이터는 인간 면역결핍 바이러스 1형 감염의 가장 가능성 있는 시기를 결정하는 데 있어 테스트 시스템 DS-"EIA-HIV-Ab-TERM"의 높은 효능을 입증했으며, 이는 절차의 속도와 단순성과 함께 허용됩니다. 실험실 실습에 사용하도록 권장합니다.

핵심 단어: 초기 HIV 감염; 장기 HIV 감염; 초기 HIV 감염의 분화; HIV 감염의 원격성; HIV-1.

인용: Epidemiologiya i Infektsionnye Bolezni. 2015; 20(3): 23-27. (러시아어로)

서신: Yulia Evgenievna Zagryadskaya, 이메일: [이메일 보호됨]

인간 면역결핍 바이러스(HIV)로 인한 감염의 확산은 현대 사회에서도 여전히 긴급한 문제로 남아 있습니다. 광범위한 인구를 포괄하는 실험실 진단, 치료 및 예방 조치를 포함한 역학 감시 시스템은 HIV 감염을 퇴치하는 주요 수단입니다.

러시아 연방에서 채택한 HIV 감염 진단을 위한 표준 알고리즘과 사용 가능한 실험실 기술로는 HIV 감염 가능성이 있는 기간을 객관적으로 결정할 수 없습니다. 그러나 초기 HIV 감염의 실제 사례를 식별하는 것은 발생률이나 유병률과 같은 기본적인 역학 매개변수를 보완하는 유용한 척도가 될 수 있습니다. 이 지표를 사용하면 일반적으로 인정되는 지표에 비해 전염병의 진행 속도를 더 정확하고 빠르게 평가할 수 있습니다. 얻은 데이터는 특정 지역에서 수행되는 예방 및 전염병 예방 조치의 효율성을 결정하는 기준으로 간주될 수 있습니다. 감염 과정의 역학을 평가하려면 감염된 환자의 총 수(또는 감염 유병률 및 인구 유병률에 대한 지표)를 아는 것이 아니라 특정 기간 동안 새로 감염된 개인의 수를 알아야 합니다. 기간. J. Eaton과 T. Hallett의 연구에 따르면 사건의 역학은 인구 중 HIV 감염의 확산과 상관 관계가 없는 것으로 알려져 있습니다.

또한, 감염 가능성이 있는 기간에 대한 객관적인 정보는 감염 경로에 대한 역학 조사 및 최대 접촉자 수를 적시에 식별하는 데 확실히 상당한 도움을 줄 수 있습니다. 모든 HIV 감염 사례의 절반이 감염 초기 단계의 개인에게서 발생하는 것으로 나타났으며, 이는 항레트로바이러스 요법의 조기 사용 전략을 뒷받침합니다.

이와 함께 감염 기간에 대한 연구로 보완된 역학 감시 시스템의 분자 유전자 모니터링을 통해 HIV의 아형 및 내성 균주에 대한 계통발생 분석 수준에서 계통역학적 연구 수준으로 이동할 수 있습니다.

지난 몇 년 동안 해외 실험실 서비스를 통해 새로운 감염 사례(발생률)의 발생률을 평가할 수 있었습니다. 초기 HIV 감염을 구별하기 위한 테스트가 개발되었으며 지속적으로 개선되고 있습니다. 이러한 테스트를 평가하기 위해 생물학적 샘플 컬렉션이 확립되었으며 이러한 컬렉션은 지속적으로 확장되고 있습니다.

위와 관련하여 에이즈센터 업무에 있어서 국산검사장비의 개발 및 활용

초기 HIV 감염을 감별할 수 있는 시스템은 긍정적인 경제적, 실질적 효과를 가져올 것입니다. 임상 실습에서 개발된 테스트를 사용하는 것은 HIV 감염의 예방, 진단 및 치료를 위한 주 및 지역 보건 프로그램 구현의 효율성을 평가하기 위한 유용한 정보 소스이자 객관적인 기준이 될 수 있습니다.

연구의 목적은 HIV-1 감염의 가능한 시기를 확립하기 위해 개발된 테스트 시스템 DS-ELISA-HIV-AT-SROC의 효율성을 평가하는 것이었습니다.

재료 및 방법

이 작업은 NPO Diagnostic Systems LLC(Nizhny Novgorod)에서 수행되었습니다. 역학적으로 감염 기간이 확립된 HIV 감염자(n = 281, 그룹 M, 하위 유형 A)의 혈청(혈장) 샘플은 크라스노야르스크 AIDS 예방 및 통제를 위한 크라스노야르스크 지역 센터(크라스노야르스크)에서 제공되었습니다. 감염 가능성이 있는 기간은 전염병 병력을 고려하여 HIV 감염의 실험실 마커의 역학에 따라 짧은 시간 간격(2~4주)으로 반복 검사를 받는 환자의 혈청(혈장) 샘플을 검사하여 결정되었습니다. 임상 검사를 받고 있는 HIV 감염 환자의 경우 3년 이상 지속되었습니다.

동시에 Zeptometrix Corp.에서 제조한 33개의 상업용 혈청전환 패널 샘플을 연구했습니다. 및 SeraCare Life Sciences(미국)(그룹 M, 하위 유형 B). 또한, HIV-1 그룹 O를 포함하여 다양한 하위 유형의 HIV-1에 대한 항체를 포함하는 혈청(혈장) 샘플을 연구할 가능성은 다음 상업용 패널의 샘플을 테스트하여 평가되었습니다. HIV 유형 1(아형 A, B, C) 및 유형 2에 대한 항체를 포함하지 않음(러시아 Avicenna Medical Center)(HIV-2에 대한 항체를 포함하는 샘플 번호 24 제외) 1차 국제 항-HIV 참조 패널(NIBSC 코드: 02/210)(아형 A, B, C, E)(HIV-2에 대한 항체를 포함하는 샘플 번호 5 제외); 항HIV 혼합형 패널(MSP-HIV-001)(HIV-2에 대한 항체를 함유한 검체 No. 19, 20 제외) 및 HIV-1 그룹 O에 대한 항체를 함유한 혈청(혈장) 검체(No. 1342, K00175) , K00259; BioMex).

개발된 테스트 시스템의 활성 원리는 다음과 같습니다. NPO Diagnostic Systems LLC에서 생산한 HIV-1 그룹 O의 구조 단백질 HIV-1 gp160(env) 및 gp41(env)과 유사한 재조합 항원으로 폴리스티렌 접이식 정제 스트립에 흡착됩니다. ; 접합체는 비오틴으로 표지된 재조합 항원 HIV-1 gp41 및 HIV-1 그룹 O와 양 고추 냉이 퍼옥시다제로 표지된 스트렙타비딘입니다. 테스트 개발 과정에서 다음을 갖는 HIV-1 항원이 선택되었습니다.

진단적 중요성이 가장 큰 것은 gp41의 면역우세 영역을 포함하는 gp160과 HIV-1 그룹 O의 gp41입니다. DS-ELISA-HIV-AT-SROC 테스트 시스템의 분석 체계는 2단계 "샌드위치"입니다. 접합체를 점진적으로 도입하는 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA) 버전입니다. 모든 구성 요소와 샘플의 도입을 시각적으로 평가하는 시스템이 개발되었습니다. 반응시간은 2시간도 채 걸리지 않습니다. 결과는 분광 광도계를 사용하여 기록됩니다.

감염 기간을 정확하게 결정하기 위해 R. Herbert Confidence Interval Calculator 프로그램을 사용하여 95%의 신뢰 확률로 테스트 시스템을 사용하여 신뢰 구간을 평가했습니다.

결과 및 토론

테스트 시스템에서 구현되는 전략은 감염 기간에 따라 샘플 내 항체의 정량적 및 정성적 구성을 변경하는 것을 기반으로 합니다. ELISA를 사용하여 혈청(혈장) 샘플을 연구할 때 HIV 특이적 항체 수준을 반영하여 천연 샘플과 희석 샘플의 광학 밀도(OD)를 결정했습니다. 원시 샘플의 OD와 관련하여 희석 시 샘플의 OD 변화를 기반으로 초기 감염 또는 장기 HIV 감염이 확립되었습니다.

수행된 연구에서는 개발된 테스트 시스템 DS-ELISA-HIV-AT-SROC의 높은 효율성을 보여주었습니다. HIV-1에 대한 항체를 검출하기 위한 3세대 테스트의 감도를 갖춘 DS-ELISA-HIV-AT-SROC는 상업용 혈청전환 패널의 모든 샘플에 대해 HIV-1 감염 기간을 정확하게 결정했습니다(표 1, 2).

역학적으로 감염 기간이 확립된 샘플에 대해 HIV-1 감염 기간을 정확하게 결정할 확률은 95%였습니다(표 2 참조).

모집단에서 무작위로 선택된 개인의 HIV에 대한 면역 반응이 어떤 경우에는 과도하거나 과도할 수 있다는 점에 유의하는 것이 중요합니다.

1 번 테이블

DS-ELISA-HIV-AT-SROC의 혈청전환 패널 테스트 결과

혈청전환 - 1일부터 일수 패널 내 양성 검체 수 / 패널 내 총 검체 수 테스트 결과

HIV-1/2에 대한 항체 검출을 위한 혈액 샘플링 패널 테스트, CE0483 DS-ELISA-HIV-AT-SROC DS-ELISA-HIV-AT-SROC

VV1 RYAV 914 31 5/5 5/5 초기 HIV-1 감염

BB1 RYAV 916 35 2/6 2/6 동일

BB1 RYAV 925 49 2/6 2/6"

BB1 RYAV 929 28 3/7 3/7"

BB1 RYAV 930 10 2/4 2/4"

BB1 RYAV 931 42 4/9 4/9"

BB1 RYAV 933 27 2/3 2/3"

BB1 RYAV 934 11 3/3 3/3"

BB1 RYAV 940 29 6/8 6/8"

BB1 랴브 941 25 3/6 3/6"

BB1 랴브 942 14 0/4 0/4"

BB1 RYAV 944 16 2/6 2/6"

BB1 RYAV 947 20 3/4 3/4"

BB1 랴브 951 19 1/6 1/6"

BB1 RYAV 952 21 3/6 3/6"

BB1 RYAV 955 14 2/5 2/5"

BB1 RYAV 965 21 3/6 3/6"

BB1 RYAV 966 51 3/10 3/10"

BB1 RYAV 968 35 4/10 4/10"

BB1 RYAV 969 77 3/10 3/10"

ZMS NGU 6243 33 2/10 2/10"

ZMS NGU 6247 30 1/10 1/10"

ZMC NSU 9014 31 5/7 5/7"

ZMC NSU 9017 35 3/6 3/6"

ZMC NSU 9018 33 2/11 2/11"

ZMC NSU 9021 57 2/17 2/17"

ZMC NSU 9022 29 1/9 1/9"

ZMC HIV 9030 54 1/16 1/16"

ZMC HIV 9031 157 3/19 3/19"

ZMC HIV 9032 55 7/14 7/14"

ZMC HIV 9077 104 15/29 15/29"

ZMC NSU 9079 95 15/25 15/25"

ZMC HIV 12008 42 4/13 4/13"

총 양성 샘플 수...

반응성. 집단 내 면역 특성의 일반 집단 분포에는 항상 정상으로 간주되는 간격에 맞지 않는 변이가 포함됩니다. 이러한 이유로, HIV 감염의 실험실 마커의 역학을 기반으로 감염 가능성이 있는 시간을 설정하는 것이 어떤 경우에는 부정확할 수 있습니다. 감염 가능성이 가장 높은 기간이 최대 3개월인 샘플의 경우 감염 기간을 결정하는 정확성이 완전히 일관되는 ​​것으로 나타났습니다.

표 2

DS-ELISA-HIV-AT-SROC를 사용하여 HIV-1 감염 가능성이 있는 기간을 결정하는 정확성

번호 번호가 정확함 DS-ELISA 테스트에 의한 결정의 정확성

샘플 감염 가능성이 있는 시간을 결정한 샘플 그룹

HIV-1 그룹의 샘플 그룹에서(95% 신뢰 수준), %*

역학적으로 최대 3개월까지 81 81 100.00 (95.50-100.00)

논리적으로 확립됨 - 3-6개월 47 42 89.36 (77.41-95.37)

시간이 지남에 따라

HIV-1 감염 6-9개월 22 17 77.27 (56.56-89.88)

9개월까지 150 140 93.33 (88.16-96.34)

9개월 이상(CD4+ 수치 미상) 79 76 96.20 (89.42-98.70)

9개월 이상 (낮은 CD4+ 수준 52 51 98.08 (89.88-99.66)

(< 200 кл/мл)

9개월 이상 131 127 96.95 (92.41-98.81)

종합 결과... 281 267 95.02 (91.81-97.01)

혈청전환 - 최대 157일 117 117 100 (96.82-100.00)

최종 패널

메모. * - 실험실 테스트 중에 설정된 감염 기간의 확률적 특성을 고려할 필요가 있습니다.

HIV 감염 기간이 정확하게 설정된 샘플(즉, 혈청전환 패널의 샘플)에 대해 얻은 데이터는 100%입니다. '9개월 이하' 집단의 검체를 조사한 결과, 검사 결과와 사전 감염일자 결과 간의 일치도는 93.33%였으며, '9개월 이상 감염' 집단은 96.95%였다. '9개월 전 감염' 그룹이 잘못된 결과를 얻는 주된 이유 중 하나는 개인의 면역 반응(빠른 반응) 특성 때문입니다. 9개월 이상 감염된 그룹의 경우, 그 이유는 면역 반응의 특성(느린 반응)과 혈청 역전(치료 또는 HIV 감염 후기 단계의 심각한 면역 결핍으로 인한) 둘 다 때문일 수 있습니다.

상업용 패널 테스트 시 "HIV 1형(아형 A, B, C) 및 2형에 대한 항체를 포함하거나 포함하지 않는 인간 혈액 혈청의 참조 패널", NIBSC 코드: 02/210, MSP-HIV-001 및 샘플 번호 1342 , K00175, K00259(BioMex 제공)를 통해 DS-ELISA-HIV-AT-SROC에서 다양한 아형의 HIV-1과 HIV-1 그룹 O에 대한 항체가 포함된 혈장 샘플을 연구할 수 있는 가능성이 확인되었습니다.

결론

얻은 데이터는 개발된 효소면역측정법 테스트 시스템을 통해 HIV 감염의 초기 혈청전환 기간과 감염 후 후기 기간을 높은 확률로 구별할 수 있음을 나타냅니다. 감염 기간에 대한 연구의 가용성은 인구 수준뿐만 아니라 개인 수준에서도 얻은 정보를 사용할 수 있는 가능성을 열어줍니다. DS-ELISA-HIV-AT-SROC 테스트 시스템의 높은 효율성과 절차의 속도 및 단순성이 결합되어

역학 및 임상 실습에 사용하도록 권장합니다.

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Neshumaev Dmitry Aleksandrovich, Ph.D. 꿀. 과학, 임상 실험실 진단 박사, 세균학 및 분자 유전학 연구실, 지역 AIDS 센터; 지역 AIDS 센터의 효소 면역분석 연구실의 임상 실험실 진단 의사인 Kokotyukha Yulia Aleksandrovna; Meirmanova Elena Maratovna, 임상 실험실 진단 의사, 효소 면역 분석 실험실, 지역 AIDS 센터; Olkhovsky Igor Alekseevich, Ph.D. 꿀. Sci., 연방 정부 예산 기관 "러시아 보건부 혈액 연구 센터"의 크라스노야르스크 지점장; Puzyrev Vladimir Fedorovich, Ph.D. 바이오. 과학, 시작 부서 NPO Diagnostic Systems LLC에 의한 재조합 항원 및 접합체 생산; Burkov Anatoly Nikolaevich, 의학 박사. 과학 교수, NPO Diagnostic Systems LLC의 총책임자; 울라노바 타티아나 이바노브나, 생물학 박사 과학, LLC 연구 이사 "NPO "진단 시스템"

특허 RU 2515051 소유자:

본 발명은 생명공학 및 의학 분야에 관한 것이다. 인간 혈청(혈장)에서 HIV-1 그룹 O를 포함한 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)의 감염 가능성이 있는 시기를 결정하기 위한 효소 결합 면역흡착 시험 시스템입니다. 테스트 시스템에는 인간 면역결핍 바이러스 1형 항원(HIV-1 및 HIV-1 그룹 O 환경)을 기반으로 한 면역흡착제, 시료 희석 용액(SRS) 및 검출 시약(접합체, 염색체/기질)이 포함되어 있습니다. 본 발명은 또한 기술된 효소를 사용하여 환자의 혈청을 검사함으로써 인간 혈청(혈장)에서 HIV-1 그룹 O를 포함하는 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)의 감염 가능성이 있는 시기를 결정하는 방법에 관한 것입니다. -연계 면역흡착 테스트 시스템. 본 발명은 HIV 감염의 가능성 있는 시기를 빠르고 쉽게 결정하는 것을 가능하게 합니다. 2n.p. 파일, 테이블 4개, 2pr.

본 발명은 생명공학 및 의학 분야에 관한 것이다. 그리고 이는 인간 혈청(혈장)에서 HIV-1 그룹 O를 포함한 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)에 감염될 가능성이 있는 시기를 결정하는 데 사용될 수 있습니다.

HIV 감염의 확산은 현대 사회에서도 여전히 심각한 문제로 남아 있습니다. 시기적절하고 질 높은 진단은 HIV 감염 확산을 줄이는 실질적인 수단이기 때문에, 감염 가능성이 있는 기간을 판단할 수 있는 효과적인 검사 시스템을 개발하는 것은 현대 사회의 중요한 과제입니다.

최신 기술에 대한 분석을 통해 다양한 방법을 사용하여 HIV 감염 단계를 결정하기 위해 여러 저자가 제안한 다양한 방법과 테스트가 존재하는 것으로 나타났습니다. 예를 들어, 중합효소연쇄반응(PCR) 방법(Kravchenko A.V., Serebrovskaya L.V., Golokhvostova E.L. et al. Timazid with chivid and invirase in complextherapy)을 사용하여 말초 혈액의 바이러스 양을 결정하는 것에 기초한 분자 유전학 검사가 알려져 있습니다. HIV 감염 환자 - 전염병학 및 전염병 - 1998. - No. 5 - p. 51-52). 혈청 β 수준을 결정하는 것으로 구성된 HIV 감염 단계를 평가하는 방법이 알려져 있습니다 (Clinical Immunology and Allergology, G. Lawlor Jr. 편집 - M.: Praktika, 2000. - P. 585-587). 2 - 마이크로글로불린. HIV 감염 단계를 진단하는 방법이 설명되어 있습니다 (V.V. Pokrovsky et al. "HIV 감염의 임상 진단 및 치료" - M.: GOU VUNMC RF, 2001. - P. 11). 이는 절대 수치를 결정하는 것으로 구성됩니다. CD4 + 림프구 말초 혈액. 또한, ELISA(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)를 이용하여 환자의 혈청을 검사할 때 초기 혈청 시료의 광학밀도(OD)를 결정한다는 사실을 토대로 HIV 감염 단계를 진단하는 방법도 알려져 있다. , HIV 특이적 항체의 수준과 초기 혈청 샘플의 OD를 3.5M 이소티오시아산나트륨 용액 100μl와 함께 10분간 배양한 결과입니다. OP가 40% 이하로 감소하면 A기 - 전신 림프절병증, OP가 40~60% 범위로 감소하면 B기 - 세균성 혈관종증, 구인두 칸디다증 등, 60% 감소하면 진단한다. % 이상 - C 단계 - AIDS(RU 2251701).

따라서 최신 기술 분석에 따르면 기존 소스 중 어느 것도 청구된 발명과 가장 가까운 유사체가 될 수 없다는 것이 나타났습니다. 왜냐하면 이러한 모든 문서는 HIV 감염 단계를 결정하는 방법 및 테스트에 관련되어 있고, 설명된 소스에는 감염 가능성이 있는 시간 간격을 결정하기 위한 기술적 결정이 포함되어 있습니다. 청구된 발명은 HIV 감염의 예상 기간을 결정하는 테스트 시스템에 관한 것입니다. 기술 수준 분석에서는 문제 해결을 위한 유사한 솔루션이 나타나지 않았습니다.

본 발명은 인간 혈청에서 HIV-1 그룹 O를 포함하는 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)의 감염 가능성이 있는 시기를 결정하기 위한 시약 세트 "DS-ELISA-HIV-AT-SROC"를 청구합니다( 혈장). 이 테스트는 면역블롯에서 양성 결과가 확인된 HIV 양성 샘플에 대한 추가 테스트를 위한 것입니다. HIV RNA 및/또는 HIV-1 p24 항원의 존재가 확인된 불확정 또는 음성 면역블롯 검사 결과로 샘플을 연구하는 것이 가능합니다.

본 발명은 또한 HIV-1 그룹 O를 포함하는 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)의 감염 가능성이 있는 시기를 결정하기 위해 이 시약 세트 "DS-ELISA-HIV-AT-SROC"를 사용하는 방법을 청구합니다. 혈청(혈장) 인간 혈액에서.

청구된 발명의 기술적 결과는 HIV-1 그룹 O를 포함한 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)의 감염 가능성이 있는 시기를 결정하고, 청구된 발명의 사용을 허용하는 테스트 수행의 용이성을 결정하는 것입니다. HIV 감염 확산의 역학에 대한 역학 감시, 특정 인구(성별, 연령, 인구의 사회 집단)에서 혈청 변환기의 역학 식별은 물론 HIV 감염 사례 및 초점에 대한 역학 조사 중에도 사용됩니다.

제안된 기술 솔루션의 핵심은 인간 면역결핍 바이러스 1형 항원(HIV-1 env 및 HIV-1 그룹)을 기반으로 한 면역흡착제를 포함하는 테스트 시스템을 사용하여 HIV-1 감염 가능성 기간을 결정한다는 것입니다. O), 희석 용액 샘플(SRS) 및 검출 시약(접합체, 발색체/기질). 테스트 샘플은 기본적으로 테스트되고 샘플 희석 용액에 희석됩니다. 테스트 결과에 따라 샘플은 '초기'와 '후기'로 구분됩니다. "초기" 샘플 - 감염 가능성이 있는 기간은 감염 시점으로부터 최대 9개월이고, "후기" 샘플 - 감염 가능성이 있는 기간은 감염 시점으로부터 9개월 이상입니다. 샘플이 "초기" 또는 "후기"에 속하는지 여부는 희석되지 않은 샘플에 비해 희석된 샘플의 광학 밀도(OD)가 떨어지는 백분율로 평가됩니다.

이들 실시예는 본 발명의 특정 실시양태를 예시하는 역할을 하며 출원인의 권리를 제한하려는 의도는 아니다. 신청자의 권리 범위는 이 섹션에 나열되지 않은 것을 포함하여 발명의 가능한 모든 변형을 포함합니다.

HIV-1과 HIV-1 그룹 O의 면역우세 env 영역을 포함하는 재조합 항원은 면역흡착제로 사용됩니다. Conjugate-1은 재조합 항원 HIV-1 gp41과 HIV-1 그룹 O gp41이 비오틴과 결합된 혼합물입니다. 첫 번째 단계에서는 테스트 샘플, 대조 샘플 및 1:101 희석액과 RRS를 접합체-1과 함께 배양합니다. 테스트 및 대조 양성 샘플에 존재하는 특정 항체는 마이크로플레이트 웰에 흡착된 항원 및 비오틴과 접합된 항원에 결합하여 안정적인 복합체를 형성합니다. 과량의 샘플과 접합체-1은 세척을 통해 제거됩니다. 다음 단계에서는 양고추냉이 퍼옥시다제(접합-2)와 접합된 스트렙타비딘을 웰에 첨가합니다. 접합체-2는 웰에 존재하는 항원-항체-항원 복합체에 결합합니다. 과량의 접합체-2는 세척을 통해 제거한 후 발색체/기질을 웰에 첨가합니다. 결합된 접합체-2가 있는 웰에서는 파란색이 나타나며 정지 용액을 추가하면 노란색으로 변합니다. 결과는 분광 광도계를 사용하여 기록됩니다.

HIV-1 및 HIV-1 그룹 O의 면역우세 환경 영역을 포함하는 재조합 항원은 면역흡착제로 사용되며, 양 고추 냉이 퍼옥시다제와 접합된 재조합 항원 gp41 HIV-1 및 gp41 HIV-1 그룹 O의 혼합물인 하나의 접합체가 사용됩니다. 분석 중에 RRS뿐만 아니라 샘플, 대조군 및 희석액을 플레이트의 항원 코팅 웰에서 접합체와 함께 배양합니다. 과잉 샘플과 접합체를 제거한 후 생성된 안정한 복합체는 발색체/기질을 첨가하여 드러납니다. 이 경우 파란색이 나타나며 정지용액을 첨가하면 노란색으로 변한다. 결과는 분광 광도계를 사용하여 기록됩니다.

연구된 샘플이 "초기" 또는 "후기"에 속하는지 여부는 샘플을 희석할 때 OD 감소율(%)로 평가되며, 이는 다음 공식을 사용하여 계산됩니다.

%   드롭   O P = 100% − O P   샘플 정찰 − O P s r. R R S O P   전체 샘플 × 100% ,

여기서 OPsr. RRS - OP RRS의 평균 값(OP RRS의 여러 값을 기준으로 계산됨).

연구 중인 샘플은 "초기"로 간주됩니다: OD 감소가 >40%인 경우.

연구 중인 샘플은 OD 감소가 40% 이하인 경우 "늦은" 것으로 간주됩니다.

샘플을 희석할 때 OD 감소율(%)을 계산하는 예가 표 1에 나와 있습니다.

결과를 기록하고 처리하려면 Excel을 사용하는 것이 편리합니다. 이 애플리케이션을 사용하면 자동으로 계산을 수행할 수 있습니다. 테스트 결과를 처리하는 프로그램은 키트에 포함된 디스크에 있거나 회사 웹 사이트에서 찾을 수 있습니다.

테스트를 개발하고 평가할 때 혈청전환 패널(BBI, Inc., Zeptometrix, USA)의 샘플과 감염 가능성이 확립된 HIV 양성 혈청(혈장) 샘플을 사용했습니다. 혈청전환 패널에 의해 확립된 HIV-1 그룹 O를 포함한 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)의 감염 기간을 정확하게 결정할 확률은 100%입니다(데이터는 표 2에 표시됨). 조건부로 감염 기간이 설정된 개인(n=129)은 94%입니다(표 3, 4; 데이터는 부분적으로 표시됨).

"DS-ELISA-HIV-AT-TERM" 테스트는 HIV-1 그룹 O를 포함하여 다양한 하위 유형의 HIV-1에 대한 항체를 포함하는 혈청(혈장) 샘플을 연구할 가능성을 평가했습니다. 참조 패널 QCS 42-28-327 - 03Р (GISC) (아형 A, B, C) (HIV-2에 대한 항체를 포함하는 샘플 번호 24 제외), 1st 국제 참조 패널 항 HIV (NIBSC 코드: 02/210) (아형 A, B, C, E) (샘플 No. 5 제외, HIV-2에 대한 항체 함유), HIV-1 그룹 O에 대한 항체를 함유하는 혈청(혈장) 샘플(No. 1342, K00175, K00259; BioMex). 결과는 "DS-ELISA-HIV-AT-SROC" 테스트에서 HIV-1 그룹 O를 포함하여 다양한 아형에 속하는 HIV-1에 대한 항체를 포함하는 혈청(혈장) 샘플을 연구할 가능성을 나타냅니다.

DS-ELISA-HIV-AT-SROC 시약 키트의 특이성은 기증자 혈청 샘플(n=352)을 연구하여 결정되었으며, 이는 ELISA에서 음성 결과를 나타냈습니다. 특이도는 100%였습니다. 또한 255개의 혈청 샘플(ELISA에서 음성)을 테스트했습니다.

■ 임산부와 전염병 환자로부터 채취한 167개의 혈청 샘플;

■ 다양한 비전염성 질환 환자의 혈청 샘플 128개.

특이도는 100%였습니다.

얻은 데이터는 HIV-1 그룹 O를 포함한 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)의 감염 가능성이 있는 시기를 결정하는 데 개발된 테스트 시스템 "DS-ELISA-HIV-AT-SROC"의 높은 효율성을 보여줍니다. 혈청(혈장) 인간의 혈액.

1. 인간 혈청(혈장)에서 HIV-1 그룹 O를 포함하는 인간면역결핍바이러스 1형(HIV-1)의 감염 가능성이 있는 시기를 판단하기 위한 효소면역흡착시험 시스템 인간 면역결핍 1형(env HIV-1 및 HIV-1 그룹 O) 바이러스 항원을 기반으로 하는 면역흡착제, 시료 희석 용액(SDS) 및 접합체인 검출 시약, 발색체/기질.

2. 감염 시점에 따라 다른 항체 함량을 토대로 인간 혈청(혈장)에서 HIV-1 그룹 O를 포함하는 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1)의 감염 가능성을 결정하는 방법, 시험 샘플을 두 부분으로 분리하고 그 중 하나를 희석하는 것을 포함하며; 단락 1에 설명된 효소 결합 면역흡착 시험 시스템을 사용하여 환자 혈청 샘플의 (기본 및 희석) 부분을 모두 검사합니다. 천연 시료와 희석 시료 및 RRS의 광학 밀도(OD) 측정 OP RRS의 평균값 계산; 공식을 사용하여 희석되지 않은 시료에 비해 희석된 시료의 OD 감소 백분율을 계산합니다.
%   드롭   O P = 100% − O P   샘플 정찰 − O P s r. R R S O P   전체 샘플 × 100% ,
이 경우 감염 가능성이 있는 기간은 OD 감소가 >40%이면 "초기"로 간주되고, OD 감소가 40% 이하이면 "늦은" 것으로 간주됩니다.

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