Fekalni pregled. Metode laboratorijske dijagnostike helminta
Uz pomoć sanitarno-helmintoloških studija, jaja i ličinke helminta otkrivaju se u okolišu, određuju se vrsta, kvantitativni sastav i njihova održivost.
Ispitivanje tla na jaja helminta. Uzorci tla težine 100-300 g uzimaju se na dubini od 10-60 cm u blizini septičkih jama, kanti za smeće, igrališta i sl. Napune se 0,85% vodenom otopinom natrijevog klorida ili 3% Barbagallo tekućinom i čuvaju u kućanskom hladnjaku do istraživanje.. Razdoblje skladištenja uzorka nije dulje od 1 mjeseca. Tlo se ispituje prema metodi Romanenka (1968, 1982): 25 g tla se stavi u epruvete za centrifugiranje od 250 ml, doda se 3% otopina natrijeve ili kalijeve baze u omjeru 1:1. Dobivena smjesa se dobro promiješa, ostavi stajati 20-30 minuta, a zatim centrifugira 5 minuta na 800 okretaja u minuti. Supernatant se ukloni, a talog ispere 1-5 puta dok se ne dobije bistri supernatant. Zatim se u talog doda 150 ml zasićene otopine natrijevog nitrata (relativne gustoće - 1,38-1,40), dobro promiješa i centrifugira, nakon čega se ista otopina doda u svaku epruvetu do razine 2-3 mm ispod njihovih rubova. . Epruvete se prekriju predmetnim staklom tako da ostane razmak širine najviše 10 mm kroz koji se pipetom dodaje otopina natrijevog nitrata dok ne dođe u dodir s donjom površinom predmetnog stakla. Zatim pažljivo pokrijte epruvetu predmetnim staklom i nakon 20-25 minuta stajanja izvadite čašu i preokrenite je donjom stranom prema gore. Na mjesto uklonjenog stakla postavlja se drugo, a po potrebi i treće. Kap 50% otopine glicerola nanese se na izvađena stakalca, pokrije pokrovnim stakalcem i mikroskopira pod svjetlosnim mikroskopom. Površinski film možete pregledati izravno u epruveti za centrifugu pod MBS binokularnim mikroskopom (N. L. Chekina, 1977).
Bermanovom metodom tlo se ispituje na ličinke helminta..
Ispitivanje vode na jaja helminta. Uzorak vode uzima se iz rezervoara u količini od 0,5 do 10 litara, što ovisi o stupnju onečišćenja, a iz bunara od 20 do 25 litara. Preporučuje se uzimanje 0,5 - 1 litre vode svakih 3-5 minuta. Jaja sadržana u vodi koncentriraju se sedimentacijom ili filtracijom pomoću membranskih, papirnatih ili tkaninskih filtera. Analiza vode provodi se Vasilkovom metodom.
Ispitivanje otpadnih voda na jaja helminta. Uzorci otpadnih voda u malim uređajima za pročišćavanje uzimaju se u sljedećim fazama pročišćavanja: prije ulaska u uređaj za pročišćavanje („sirova“ voda), u taložniku postrojenja, u kontaktnom spremniku, na utoku u bioirud ili na otvorenom. rezervoar. U centraliziranim uređajima za pročišćavanje voda se skuplja prije ulaska u objekte za pročišćavanje, nakon mehaničkog pročišćavanja, nakon sekundarnih taložnika, bioloških bazena, polja za filtriranje i polja za navodnjavanje u poljoprivredi. “Sirova” voda ispituje se u količinama od 2 do 5 litara, a tijekom postupka umjetne biološke obrade i nakon njegovog završetka od 10 do 15 litara. Uzorci se uzimaju svaki sat tijekom dana (dnevni prosjek) ili od 7 do 20 sati (dnevni prosjek). Otpadne vode se ispituju metodom Romanenko. Otpadna voda se ulije u stakleni cilindar zapremine 1-2 litre, doda se jedan od koagulansa (aluminij, željezo ili bakar sulfat) u dozi od 0,3-0,5 g/l i dobro promiješa. Nakon 40-50 minuta pročišćeni supernatant se ukloni sifonom, a sediment prenese u epruvete za centrifugiranje i centrifugira 3 minute na 1000 okretaja u minuti. Zatim se tekući dio ocijedi, a u talog se doda 2-4 ml 1-3% otopine. klorovodične kiseline za otapanje pahuljica koagulansa. Dobivena smjesa se centrifugira, tekući dio se odstrani, a sediment dalje ispituje metodom Romanenko koja se koristi za analizu tla.
I. K. Padchenko i suradnici (1982) razvili su sljedeće metode za proučavanje tla, vode i otpadnih voda na jaja helminta.
Ispitivanje tla na jaja helminta. Odabrani uzorak tla (najmanje 300 g) dodaje se u veliku zemljanu žbuku, postupno se dodaje 3% otopina natrijeve ili kalijeve baze i temeljito usitnjava tučkom dok se ne dobije homogena masa. Dobivena smjesa se ulije u stakleni cilindar od 10 litara, koji je prethodno 3/4 volumena napunjen vodom iz slavine, i ostavi 5 minuta. Guste nečistoće koje plutaju na površini smjese uklanjaju se omčom s mrežicom. Nakon taloženja od 5 minuta, supernatant se iscijedi u drugi veliki cilindar, a dobiveni sediment se prenese u cilindar od 1 litre i ponovno ispere vodom iz slavine (najmanje 2-3 puta). Supernatant tekućina nastala u ovom slučaju u malom cilindru se svaki put sifonom nakon 5-minutnog taloženja prelijeva u veliki cilindar, gdje se miješa s tekućim dijelom smjese dobivenom nakon prvih 5-minutnog taloženja. Jedan od koagulansa (aluminijev sulfat, željezni sulfat itd.) dodaje se tekućini sakupljenoj u veliki cilindar brzinom od 0,3 g na 1 litru tekućine i ostavlja se 1-1,5 sati dok se potpuno ne razbistri. Dobiveni supernatant se ukloni sifonom, a talogu se doda 1-3% otopina klorovodične kiseline za otapanje pahuljica koagulansa. Dobivena smjesa se ostavi da se taloži 18-24 sata, nakon čega se tekući dio ukloni sifonom, a sediment se pregleda na jaja helminta. U tu svrhu, sediment se dobro protrese i 1 kap dobivene suspenzije se Pasteur-ovom pipetom nanese na predmetno stakalce, pokrije pokrovnim stakalcem i mikroskopski pregleda. Najmanje 1 ml sedimenta se ispituje, a zatim matematički preračunava za cijeli volumen. Ako su uzorci tla malo kontaminirani mikroskopski pregled sav sediment podliježe.
Ispitivanje otpadnih voda na jaja helminta. Uzorci otpadnih voda uzetih u različitim fazama pročišćavanja na uređajima za pročišćavanje otpadnih voda ulijevaju se u cilindre od 10 litara i ostavljaju 5 minuta. Guste nečistoće koje isplivaju na površinu tekućine uklanjaju se omčom. Nakon taloženja od 5 minuta, supernatant se prelije sifonom u drugi veliki cilindar, a sediment se ukloni. Dobiveni tekući dio otpadne vode miješa se u velikom cilindru s koagulansom i dalje ispituje istom metodom kao i tlo (u fazi dodavanja koagulanta).
Uzorci vode iz vodoopskrbne mreže i raznih rezervoara miješaju se u velikom cilindru s koagulantom i dalje ispituju istom metodom kao i otpadne vode.
Istraživanje kanalizacijskog mulja na jaja helminta. Uzorci kanalizacijskog mulja uzimaju se sa 5-10 mjesta, po 100 ml, stavljaju se u staklene posude zapremine 1-2 litre. Suhe oborine prikupljaju se istom metodom kao i tlo. Dodajte 100-150 ml sedimenta u epruvetu za centrifugu od 250 ml i centrifugirajte 5 minuta na 1000 okretaja u minuti. Zatim se tekući dio ocijedi, a talogu se doda čista voda do prethodnog volumena, dobro promiješa i centrifugira. Ovo ispiranje sedimenta ponavlja se 2-3 puta, nakon čega mu se dodaje 3-5 g čistog pijeska i dobivena smjesa se ispituje istom metodom kao i tlo.
Prema našim podacima, kanalizacijski se mulj ispituje na jajašca helminta sljedećom metodom: uzorak od 1 litre mulja temeljito se izmrvljuje tučkom u velikom zemljanom mužaru, postupno dodajući 3%-tnu otopinu natrijeve ili kalijeve baze, a zatim ispitati istom metodom.kao i tlo.
Ispitivanje briseva na jaja helminta. Predmeti vanjsko okruženje koje treba pregledati ispiru se vatom namočenom u 1% otopinu natrijeve baze ili 20% otopinu glicerina. Tamponi se ispiru u epruvete za centrifugiranje 2-3% otopinom natrijevog bikarbonata ili 1% otopinom natrijeve baze i centrifugiraju. Nastali sediment se mikroskopski ispituje.
Određivanje održivosti jaja i ličinki helminta. Preživljavanje jaja i ličinki helminta izgled utvrđeno korištenjem vitalnih boja, metodama uzgoja i biološkim testovima na laboratorijskim životinjama.
Pod svjetlosnim mikroskopom, membrane mrtvih ili degeneriranih jaja helminta su pokidane ili deformirane, citoplazma je olabavljena i zamućena. Kada se zrela jaja okruglih crva, bičaša i pinworma zagrijavaju na temperaturu od +37 ° C, ličinke ovih helminta pokazuju aktivnu pokretljivost.
Uzgoj jaja i ličinki helminta. Nezrela jaja glista uzgajaju se na temperaturi od +24...+30°C u Petrijevim zdjelicama (mokra komora) u 3% otopini formaldehida pripremljenoj u 0,85% otopini natrijevog klorida, a jaja glista - u 3% otopini klorovodične kiseline. otopina na temperaturi +30...+35°C, jaja pinworma - u 0,85% otopini natrijevog klorida na temperaturi od -37°C. Petrijeve zdjelice se otvaraju radi prozračivanja 1-2 puta tjedno i u njima se navlaži filter papir čista voda. Razvoj jaja se prati 2 puta tjedno radi znakova diobe protoplasta u zasebne blastomere. U prvim danima jaje se razvije do 16 blastomera koji prelaze u stadij morule (drugi stadij). Ako Yanti ne pokažu znakove razvoja unutar 2-3 mjeseca, treba ih smatrati mrtvima.
poglavlje III. Dijagnostika helmintijaze i metode helmintološkog istraživanja
Potrebno je pregledati sve pacijente koji traže liječničku pomoć za helmintiju, a posebno pacijente koji se obraćaju pedijatru, terapeutu i neurologu s pritužbama na pojave iz gastrointestinalnog trakta, živčanog sustava i anemije. Ako liječnik nije uvijek u mogućnosti koristiti laboratorijske metode istraživanja, tada je svatko dužan ispitati pacijenta o izolaciji helminta. medicinski radnik pružanje njege u ambulanti ili bolnici.
Ako je dostupno, navedeno u relevantnim poglavljima kliničke indikacije dijagnozu treba pojasniti pomoću laboratorijske metode studije za helmintijaze.
Zbog prevlasti crijevnih helmintijaza najveći praktični značaj ima pregled stolice.
Metode ispitivanja stolice na helmintioze
Stolica se dostavlja u laboratorij u čistoj staklenoj posudi (otprilike četvrtina šalice stolice uzeta iz razna mjesta jedna porcija); Tijekom rutinskog pregleda dopušteno je dostaviti stolicu u laboratorij u kutijama za šibice ili udlagama.
Za kontrolu dehelmintizacije isporučuje se (prema preporuci liječnika) (u velikim zatvorenim posudama) cjelokupni dio fecesa prikupljen nakon uzimanja antihelmintika i laksativa. staklene posude, kante).
Mikroskopski pregled stolice je osnovni u dijagnostici crijevnih helmintijaza; uvijek mu treba prethoditi opći makroskopski pregled izmeta kako bi se otkrili segmenti velikih cestoda, pinworma, valjkastih crva itd.
Stolica treba biti svježa ili konzervirana (u 5% otopini formaldehida), budući da sušenje dramatično mijenja strukturu jaja. Osim toga, kada izmet stoji, jajašca nekih helminta (na primjer, ankilostoma) se brzo razvijaju, što otežava dijagnozu.
Prema uputama Ministarstva zdravstva SSSR-a potrebno je istodobno pregledati stolicu metodom po Fullebornu i nativnim razmazom.
Nativni bris
Nativni bris: komadić fecesa (veličine zrna graška) uzet šibicom, staklom ili drvenim štapićem s različitih mjesta u isporučenoj porciji temeljito se smrvi na stakalcu u kapi 50% otopine glicerola ili u slanoj otopini ili u vodi. Pokrijte pokrovnim stakalcem i lagano ga pritisnite (iglom za disekciju). Razmaz mora biti tanak, proziran i ujednačen. Koristi se samo kao dodatak drugim metodama koje osiguravaju obogaćivanje lijeka. Moraju se pregledati najmanje dva lijeka.
Za otkrivanje ličinki helminta (kao i njihovih jajašaca) radi se nativni bris na sljedeći način (po Shulmanu): 2-3 g fecesa dobro se promiješa tako da se stakleni štapić “uvije” u emulziju s peterostrukom otopinom. količina čiste vode ili slana otopina. Tijekom miješanja dolazi do nakupljanja ličinki u blizini staklenog štapića, pa se odmah nakon završetka miješanja kap emulzije staklenim štapićem brzo prenese na predmetno stakalce, pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda. S. D. Lyubchenko (1936) dokazao je da je metoda uvijanja učinkovitija od metode razmaza, posebno u pogledu jajašaca glista. Na temelju rada S. D. Lyubchenka, smatramo da je preporučljivo zamijeniti metodu razmaza metodom uvijanja.
Fullebornova metoda
Fulleborn metoda: 5-10 g izmeta uzetog s različitih mjesta stavi se u staklenku zapremine 50-100 ml i temeljito utrlja staklenim ili drvenim štapićem u zasićenu otopinu. stolna sol(400 g ove soli otopi se u 1 litri vode, zagrije do vrenja i filtrira kroz sloj vate ili gaze; otopina se koristi hladna: specifična težina 1,2). Otopina se dodaje postupno dok se ne dobije jednolična suspenzija, a ukupna količina dodane otopine trebala bi biti približno 20 puta veća od količine fecesa. Za miješanje izmeta Fulleborn je preporučio korištenje čaša za čaj, ali je prikladnije pripremiti suspenziju u posudama za mast kapaciteta 50-100 ml, koristeći dvije posude za svaku analizu (ili u čašama kapaciteta 100 ml).
Odmah nakon pripreme suspenzije, lopaticom, metalnom lopaticom ili komadom čistog papira uklonite velike čestice s površine (biljne tvorevine, neprobavljeni ostaci hrane i sl.), nakon čega se smjesa ostavi stajati 1-1,5 sat. Nakon tog vremena, cijeli film se uklanja s površine smjese dodirivanjem žice ili platinaste petlje (ravne) promjera ne većeg od 1 cm, savijene pod pravim kutom; Film se istrese na predmetno stakalce i pokrije pokrovnim stakalcem. Stavite 3-4 kapi ispod svakog pokrovnog stakalca (18x18 mm). Ukupno treba pripremiti najmanje 4 pripravka (za svaki pripravak jedno pokrovno staklo). Petlja se zagrijava na vatri i nakon svake analize ispere vodom.
Fullebornovom metodom brzo se i lako otkrivaju jajašca svih nematoda (osim neoplođenih jajašaca valjkastih glista) i jajašca patuljaste trakavice.
Bermanova metoda se koristi za ispitivanje fecesa na ličinke helminta (za strongiloidijazu). Ova metoda je sljedeća: 5 g izmeta na metalnoj mrežici (za ovu svrhu je prikladno cjedilo za mlijeko) stavi se na stakleni lijevak pričvršćen na tronožac. Na donji kraj lijevka postavljena je gumena cijev sa stezaljkom.
Mreža s izmetom se podigne i u lijevak se ulije voda zagrijana na otprilike 50° tako da Donji dio mrežica s izmetom uronjena je u vodu. Larve se aktivno kreću u vodu i nakupljaju u donjem dijelu gumene cijevi. Nakon 2-4 sata stezaljka se otvori i tekućina se ispusti u jednu ili dvije centrifugalne epruvete.
Nakon centrifugiranja 1-2 minute gornji dio tekućina se brzo ocijedi, a sediment se u kapima nanosi na predmetno stakalce i pregleda pod pokrovnim stakalcem ili se raspodijeli u tankom sloju na 2-3 velike čaše i zatim pregleda bez pokrovnog stakalca.
Bermanova metoda također se koristi za ispitivanje tla na prisutnost ličinki ankilostoma.
Stollova metoda
Za određivanje intenziteta invazije koristi se Stollova metoda. Decinormalna otopina kaustične sode ulijeva se u posebnu staklenu tikvicu do oznake od 56 cm 3, a zatim se dodaju izmet dok razina tekućine ne dosegne 60 cm 3, odnosno 4 cm 3. Nakon mućkanja sa staklenim kuglicama uzima se 0,075 ml smjese za ispitivanje i ispituje pod jednim ili dva obična pokrovna stakalca. Dobiveni iznos se množi s 200 kako bi se dobio broj jajašaca sadržanih u 1 cm 3 izmeta.
Studija duodenalnog sadržaja
Duodenalni sok i žuč iz mokraćnog mjehura, dobiveni na uobičajeni način sondiranjem (i žuč iz mokraćnog mjehura i nakon refleksa iz žučnog mjehura), temeljito se pomiješaju s jednakim volumenom etilnog etera; smjesa se centrifugira, nakon čega se sediment pregleda pod mikroskopom. Osim sedimenta, mikroskopski se moraju pregledati ljuskice koje plutaju u tekućini, a koje mogu sadržavati jaja helminta. Prilikom ispitivanja jaja helminta želučana kiselina i povraćati, možete koristiti istu tehniku.
Pregled duodenalnog soka i želučanog sadržaja potrebno je provesti kod helmintičkih bolesti jetre, žučnog mjehura (opistorhoza, fasciolioza, dikrocelioza) i duodenum(strongiloidijaza).
Ispitivanje sputuma
Ispljuvak se samelje na staklenoj ploči, čvrsto prekrije drugom staklenom pločom i pregleda golim okom na svijetloj i crnoj pozadini, kao i pod povećalom u propuštenom svjetlu. Pojedinačni komadići sputuma (“hrđave” nakupine, ostaci tkiva itd.) nanose se u tankom sloju na predmetno stakalce, čvrsto pokrivaju pokrovnim stakalcem i pregledavaju pod mikroskopom s malim i velikim povećanjem.
a) Za dijagnosticiranje kožne cisticerkoze, potkožno tkivo ili mišić, aseptički izrezan komad relevantnog tkiva prvo se pregledava golim okom. Područja tkiva se odmiču iglama za seciranje kako bi se otkrilo vidljivo golim okom vezikula - cisticerk (fotografija A); duljina mu je 6-20 mm, širina 5-10 mm. Kad se otkrije vezikula sumnjiva na cisticerk, zgnječi se između dva stakalca i pregleda pod mikroskopom. Cisticerkus (Cistycercus cellulosae) određen je prisutnošću skoleksa s četiri odoka i vjenčićem kukica (slika B).
| Fotografija. A - cisticeri sa skoleksom okrenutim prema van; B - Glava svinjske trakavice. | |
 |
 |
b) Za dijagnosticiranje trihineloze aseptički izrezani komad mišića (biceps ili gastrocnemius) pažljivo se usitnjava u 50% otopini glicerina iglama za disekciju u najfinija vlakna. Zgnječeni mišići se stisnu između dva stakalca i pregledaju pod mikroskopom male snage u zamračenom vidnom polju. Preporuča se testiranje mišića na trihinelozu najranije 8. dana bolesti. Ličinke trihinele nalaze se u mišićima u smotanom položaju: zatvorene su u kapsulama u obliku limuna.
| Fotografija. A - Ličinke trihinele u mišićima; B — Kalcificirane kapsule trihinele. | |
 |
 |
X-zraka
Najčešće se fluoroskopijom dijagnosticira ehinokokoza i rjeđe cisticerkoza. Cisticerci se otkrivaju fluoroskopijom tek nakon kalcifikacije (u slučajevima dugotrajne bolesti). Iza posljednjih godina Fluoroskopija se također koristi za dijagnosticiranje ascariasis u ranom stadiju ličinke i djelomično u intestinalnom stadiju.
Tijekom razdoblja migracije ličinki valjkastih (i ankilostomastoma), nestabilnih, ponekad višestrukih, upalna žarišta; istovremeno se u krvi javlja značajna eozinofilija.
Spolno zrele valjkaste gliste jasno su vidljive na fluoroskopiji crijeva oboljelih jedinki. Ova metoda, unatoč svojoj složenosti i nezgrapnosti, treba se koristiti kao dodatna metoda za dijagnosticiranje ascariasis u slučajevima s negativnom skatološkom analizom. Prema E. S. Geselevichu, od 180 bolesnika s ascariasisom identificiranim fluoroskopijom, 54 nisu imala jaja ascarisa u stolici (vidi).
Da bi se otkrili fragmenti helminta, izmet se ispituje golim okom, zatim se pomiješa s vodom i ispituje u malim obrocima u Petrijevoj zdjelici na tamnoj pozadini. Sve sumnjive čestice stavljaju se na predmetno staklo u kap vode i ispituju pod povećalom. Dnevnu porciju možete staviti u cilindar uz dodatak 5-10 puta veće količine vode. Posuda se nakon miješanja ostavi dok se suspendirane čestice potpuno ne slegnu. Površinski sloj tekućine se ocijedi i ulije čista voda. Isprani sediment ispituje se u malim obrocima golim okom ili pod povećalom. Za otkrivanje jajašca koriste se mikroskopske metode ispitivanja.
Metoda nativnog razmaza. Ne veliki broj izmet s različitih mjesta ispitnog dijela melje se na stakalcu u kapi 50% otopine glicerina, izotonične otopine natrijevog klorida ili vode. Smjesa se pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod mikroskopom.
Fulleborn plutajuća metoda. Jedan dio izmeta pomiješa se s 20 dijelova zasićene otopine natrijevog klorida (specifične težine 1,18), dodanih u malim obrocima. Velike čestice koje isplivaju na površinu odmah se uklone, a smjesa se ostavi 45 minuta. Tijekom tog vremena, jajašca helminta, koja imaju nižu specifičnu težinu od otopine natrijevog klorida, plutaju na površini. Površinski film se ukloni žičanom omčom promjera oko 1 cm i prenese na predmetno stakalce za ispitivanje pod mikroskopom.
Kalantaryan metoda. Učinkovitost plutajuće metode povećava se zamjenom natrijevog klorida zasićenom otopinom natrijevog nitrata. U tom slučaju smjesa se drži 10-15 minuta.
Površinski film nastao nakon taloženja mješavine izmeta s otopinom natrijevog klorida ili natrijevog nitrata također se može ukloniti predmetnim staklom. U tu svrhu se staklenka do vrha napunjena mješavinom izmeta i otopine soli pokrije predmetnim staklom tako da njegova donja površina bude u dodiru s tekućinom. Nakon taloženja, staklo se uklanja i, brzo okrećući prema gore s površinom na kojoj se nalazi film, ispituje se pod mikroskopom.
Struganje sperianalnih nabora (za identifikaciju jajašca pinworma i onkosfera goveđe trakavice) obavlja se ujutro prije toalete. Koristeći drvenu lopaticu namočenu u vodu ili 50% otopinu glicerina, stružite oko anusa. Dobiveni materijal se prenese na predmetno staklo u kapi vode ili 50% otopine glicerola i pregleda pod mikroskopom. Lopatica se može zamijeniti vlažnom vatom, kojom se briše perianalno područje, a potom dobro ispere u vodi. Voda se centrifugira, a sediment se pregleda pod mikroskopom.
Behrmannova metoda (za identifikaciju ličinki). Metalna mrežica na koju se nanese 5-6 g izmeta učvrsti se na stakleni lijevak umetnut u tronožac. Na donji kraj lijevka postavljena je gumena cijev sa stezaljkom. Lijevak se napuni vodom zagrijanom na t° 50°, tako da donji dio mrežice s izmetom dođe u dodir s vodom. Larve se aktivno kreću u vodu i nakupljaju u donjem dijelu gumene cijevi. Nakon 4 sata tekućina se odlije u epruvete za centrifugiranje, centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom.
Analiza ispljuvka, nazalne sluzi i vaginalnog iscjetka za identifikaciju jajašca plućnog trematoda paragonimusa, ličinki valjkastih glista i ankilostoma, jajašca pinworma i fragmenata ehinokoknog mjehura. Dio sluzi (iscjedak) koji se ispituje razmazuje se na staklo i promatra makroskopski na crno-bijeloj pozadini, a zatim pod mikroskopom. U ispitni materijal možete dodati 25% otopinu antiformina, temeljito protresti i ostaviti 1-1,5 sati da se sluz otopi. Smjesa se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom.
Analiza duodenalnog i želučanog soka za otkrivanje jaja jetrenih metilja, ankilostoma i ličinki Strongyloides. Sva tri dijela duodenalnog sadržaja dobivena s centrifugiraju se i sediment pregleda pod mikroskopom. Oni također istražuju.
Istraživanje tkiva. Da bi se identificirale ličinke trihinele, komadići biopsiranog mišića pažljivo se razdvoje u vlakna, stisnu između kompresorskih stakala (debela stakla s vijcima) i pregledaju pod mikroskopom na zatamnjenom svjetlu. Da bi se identificirali cisticeri, mišići se seciraju iglama za seciranje, izolirana vezikula se očisti od okolnog tkiva, stisne između dva stakalca i pregleda pod povećalom.
Test krvi (za otkrivanje ličinki filarije). Pregledajte viseću kap na pokrovnom staklu obrubljenom vazelinom. Možete pomiješati 0,3 ml krvi s 10 puta većom količinom 3% otopine. Smjesa se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom. Za obogaćivanje pripravaka dodajte 3 ml 2% otopine formalina ili 5-struku količinu tekućine koja se sastoji od 95 ml 5% otopine formalina, 5 ml octene kiseline i 2 ml koncentrirane alkoholne otopine hematoksilina u 1 ml venske krvi. Smjesa se centrifugira, talog se ispere destiliranom vodom i pregleda pod mikroskopom. Za razlikovanje različiti tipovi filarije se ispituju razmazima obojenim metodom Giemsa-Romanovsky.
Imunološke dijagnostičke metode. Također se koriste alergijski dijagnostički testovi (vidi) s odgovarajućom vrstom helminta (aglutinacija, fiksacija komplementa).
Helmintološke metode istraživanja. Riža. Jaja helminta. 1-10 - jaja valjkasti crvi(nematode): 1 - 3 - valjkasti crvi (1 - oplođeno jaje, 2 - oplođeno jaje bez bjelanjka, 3 - neoplođeno jaje); 4 - mačji okrugli crvi; 5 - okrugli crvi mesožderi; 5 - pinworms; 7 - bičaš; 8 - tominx; 9 - ankilostoma; 10 - trichostrongylid. 11-15 - jaja trakavice (cestode): 11 - goveđa trakavica; 12 - patuljasta trakavica; 13 - štakorska trakavica; 14 - bundeva trakavica; 15 široka traka. 16 - 24 - jaja metilja (trematoda): 16 - trematoda (šistosoma) japanska; 17 - trematode (shistosomi) urin - spolni; 18 - trematode (shistosomi) Munson; 19 - trematode (parogonymus) plućne; 20 - trematode (opisthorchis) Sibirski (mačji); 21 - trematode (clonorchis) chinensis; 22 - crijevne trematode (metagonimus); 23 - trematode (fasciole) jetre; 24 - trematode (dicrocelium) lancetaste.
Stolice se ispituju na dvije metode:
1. Makroskopski – otkriti helminte, njihove glave, segmente, fragmente strobila. Male porcije fecesa pomiješaju se s vodom u ravnoj posudi ili Petrijevoj zdjelici i gledaju se pri dobrom osvjetljenju na tamnoj pozadini, koristeći povećalo ako je potrebno. Sve sumnjive tvorevine se pincetom prenose u drugu čašicu s vodom ili na predmetno staklo u kapi razrijeđenog glicerola.
Uz metodu braneći se Dio fecesa koji se ispituje pomiješa se s vodom u staklenom cilindru, a nakon taloženja gornji sloj vode se iscijedi. To se ponavlja nekoliko puta. Kad tekućina postane bistra, ocijedi se, a talog se pregleda u Petrijevoj zdjelici.
2. Mikroskopski – za otkrivanje jaja i ličinki helminta. Postoje mnoge metode istraživanja.
Nativni bris – najčešća i tehnički pristupačna metoda istraživanja. Mogu se otkriti jaja i ličinke svih helminta. Međutim, s malim brojem jajašaca nije ih uvijek moguće pronaći. Stoga se koristi metoda obogaćivanja.
1. Fülleborgova metoda – ovo je metoda obogaćivanja koja se temelji na plutanju jajašaca helmintijaze u zasićenoj otopini NaCl (1,2 – gustoća; 400 g NaCl na 1 litru vode; 40% otopina NaCl). Metoda je učinkovitija od nativnog brisa. 2-5 g izmeta stavi se u staklene posude i napuni otopinom NaCl, promiješa i nakon 45 minuta metalnom omčom odstrani nastali film, kap glicerina stavi na predmetno staklo. Pregledajte pod mikroskopom. Nedostatak metode je sporo pojavljivanje jaja raznih helminta, patuljaste trakavice - nakon 15-20 minuta, valjkastih glista - 1,5 sati, bičaša - 2-3 sata.
2. Kalantaryan metoda – također metoda obogaćivanja, ali se koristi zasićena otopina NaNO 3 (gustoće 1,38). Većina jaja pluta; ispitivanje sedimenta nije potrebno. Nedostatak je što držanje jaja u otopini dulje vrijeme dovodi do činjenice da neka jaja počnu bubriti i taložiti se na dno, nestajući s površinskog filma.
3. Metoda Goryacheva – na principu odlaganja jaja, otkrivanje malih jaja trematoda. Zasićena otopina NaCl koristi se kao otopina i pažljivo se nanosi 3-4 ml otopine fecesa na vrh. Nakon 15-20 sati jaja trematoda talože se na dno. Tekućina se iscijedi, a sediment se stavi na predmetno staklo i pod mikroskop.
4. Shulmanova metoda uvijanja – za otkrivanje ličinki helminta u izmetu. Pregledava se samo svježe izlučeni izmet. 2-3 g se stavi u staklenu posudu i doda 5-struka količina vode, brzo promiješa štapićem ne dodirujući stijenke posude - 20-30 minuta, zatim se štapić brzo izvadi i kap tekućina se na kraju prenese na stakalce i mikroskopira.
5. Bermanova metoda – temelji se na sposobnosti ličinki helminta da migriraju prema toplini i služi za njihovu identifikaciju u izmetu.
6. Harada i Mori metoda (metoda uzgoja ličinki) i preporučuje se za testiranje na infekcije ankilostomama. Metoda se temelji na činjenici da se na toplini i na vlažnom filtriranom papiru jajašca ankilostomatozoida razviju u filariformne ličinke koje se lako otkrivaju. Na sredinu trake filtriranog papira nanese se 15 g fecesa, papir s izmetom se stavi u staklenku tako da se donji kraj uroni u vodu, a gornji učvrsti čepom. Staklenka se drži u termostatu na 28 0 C 5-6 dana. Za to vrijeme razvijaju se filariformne ličinke i spuštaju se u vodu. Tekućina se ispituje pod povećalom. Ako ju je teško otkriti, tekućina se centrifugira, prethodno ubivši ličinke zagrijavanjem na 60 0. Laborant mora nositi rukavice.
7. Metode za enterobiasis – identifikacija jajašaca pinworma i goveđe trakavice.
a) struganje s perianalnih nabora – pamučnim štapićem čvrsto namotanim na drveni štapić i navlaženim 50% otopinom glicerina. U laboratoriju se bris ispere s 1-2 kapi 50% vodene otopine glicerina.
b) metoda ljepljivih grinja (Graham metoda)
Ljepljiva traka se nalijepi na perianalne nabore, zatim se ljepljivi sloj nanese na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom.
c) struganje pomoću očnih štapića (metoda Rabinovich). Za perianalno struganje koriste se staklene očne šipke čiji je široki dio prekriven posebnim ljepilom koje omogućuje zadržavanje jajašca pinworma.
Pregled krvi, žuči, sputuma i mišića
Mikroskopija krvi otkriva ličinke filarije.
Pregled sputuma - jajašca paraganima, larve valjkastih crva, nekator, strongiloid, elementi ehinokoknog mjehura.
Pregled mišića - ako se sumnja na trihinelozu, pregledavaju se mišići bolesnika ili leša, kao i meso od kojeg se pretpostavlja da je došlo do zaraze. Za potrebe trihineloskopije mišić se reže na sitne komadiće i stavlja u kompresorij, to su dva široka, debela stakla koja gnječe mišiće i nalaze se larve trihinele u obliku kapsula - metoda kompresije.
Metoda probave – mišići se pune umjetnim želučanim sokom (otopina klorovodične kiseline i pepsin). Mišići se probavljaju, a ličinke se lako identificiraju. Određivanje intenziteta invazije: broj ličinki do 200 u 1 g mišićno tkivo– umjeren intenzitet invazije; do 500 – intenzivno; preko 500 – superintenzivna invazija.
Serološke metode
Uzorkovanje i konzerviranje
Za istraživanje, izmet se uzima s različitih mjesta u obrocima od 50 g i šalje u laboratorij u čistoj staklenoj ili plastičnoj posudi s čvrstim poklopcem. Pregledava se svježi izmet (ne stariji od jednog dana), au nekim slučajevima (pri testiranju na strongiloidijazu) odmah nakon defekacije. Predloženi su brojni fekalni konzervansi koji sadrže jaja helminta: 4-10% otopina formalina, koja se mora zagrijati na temperaturu od 50-60 ° kako bi se spriječio razvoj jaja hookworm; smjesa 0,2% Vodena otopina natrijev nitrat (1900 ml), Lugolova otopina (5 g joda, 10 g kalijev jodid, 250 ml vode), formalin (300 ml) i glicerin (25 ml), u kojima se jaja helminta čuvaju 6-8 mjeseci; mješavina glicerina (5 ml), formalina (5 ml) i vode (100 ml); otopine 1-1,5% deterdženata "Lotos", "Extra", "Barf", "Tide" itd. (u težinskom omjeru izmeta i otopine deterdženta 1: 5); mješavina mertiolata 1: 1000 (200 ml), formalina (25 ml), glicerina (5 ml), destilirane vode (250 ml) uz dodatak 0,6 ml Lugolove otopine (brzinom od 1 g izmeta na 10 ml smjese).
Za dijagnosticiranje helmintijaza koriste se makro- i mikrohelmintoskopske metode ispitivanja izmeta.
Makrohelmintoskopske studije
Metoda taloženja
Dnevni dio izmeta dobro se pomiješa s 5-10 puta većom količinom vode, ulije u visoke staklene cilindre (tegle, kante) i ostavi dok se suspendirane čestice potpuno ne slegnu. Gornji mutni sloj pažljivo se ocijedi i do vrha se doda čista voda (ponoviti nekoliko puta dok voda iznad taloga ne postane bistra). Nakon što ocijedite gornji sloj, premjestite sediment u kivetu ili Petrijevu zdjelicu i pogledajte ga (na tamnoj pozadini) pod povećalom ili golim okom.
Metoda probira
Fekalije pomiješane s vodom stavljaju se na gornje sito uređaja koje se sastoji od sustava sita s rupama sve manjeg promjera, uređaj se spaja na vodovodnu mrežu te se otvaranjem slavine za vodu ispire, a teče tekućina se odvodi u kanalizaciju. Veliki helminti ostaju na gornjem situ, dok se manji zadržavaju na donjem. Sita se preokrenu i nakon ispiranja sadržaja u tamne kivete pregledaju golim okom ili pod povećalom.
Mikrohelmintoskopske studije
Provesti u svrhu otkrivanja jaja (helminto-ovoskopske metode - boja. Slika 1) ili ličinki helminta (helminto-ovoskopske metode).
Helmintoovoskopske metode
Kvalitativne metode bez obogaćivanja
Nativni bris. Mala količina fecesa se samelje na predmetnom staklu u kapi 50% otopine glicerina ili prokuhane vode. Pažljivo se uklone velike čestice, smjesa se pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod mikroskopom (pregledaju se dva razmaza). Pogodnije je i lakše pripremati dugačke razmaze između dva stakalca. Nativni bris se koristi samo kao dodatak metodama obogaćivanja, jer nije dovoljno učinkovit, posebno kod slabih infestacija.
Deblji premaz celofanom po Katu(K. Kato, 1954) vrlo je učinkovita metoda istraživanje. Komadići hidrofilnog celofana (veličine 4x2 cm) namaču se 24 sata u mješavini glicerina (50 ml), 6% otopine fenola (500 ml) i 3% vodene otopine (6 ml) zelenog malahita (potonji nije obavezan). ). U REDU. 100 mg fecesa razmaže se na predmetno stakalce i, pokriveno komadom vlažnog celofana, pritisne gumenim čepom br. 5. Preparat se ispituje nakon 30-60 minuta, kada se malo osuši i postane bistar, kao rezultat čega je jaja helminta lako otkriti pod mikroskopom s malim povećanjem.
Kvalitativne metode s obogaćivanjem (metode plutanja i taloženja)
Prvi se temelje na upotrebi zasićenih otopina raznih kemikalija. tvari u kojima plutaju jaja zbog razlike u specifičnoj težini.
Kofoid-Barberova metoda(Ch.A. Kofoid, M.A. Barber) modificirao Fulleborn (F. Fulleborn, 1920). U REDU. 5 g izmeta u visokoj i uskoj posudi (volumena 100 ml) razmuti se drvenim štapićem u 100 ml zasićene otopine kuhinjske soli, sp. njegova težina je 1,18 (400 g soli otopi se kuhanjem u 1 litri vode). Velike čestice koje isplivaju na površinu brzo se uklanjaju štapićem ili komadom papira. Nakon taloženja smjese 45-90 minuta. Upotrijebite žičanu omču (promjera 0,8-1 cm) kako biste uklonili sav površinski film i prenijeli ga na predmetno staklo. Kod testiranja na jajašca glista smjesa se ostavi stajati 10-15 minuta. Film možete ukloniti izravno predmetnim staklom, poklopiti staklenku tako da dođe u dodir s tekućinom (na rubove staklenke dodaje se zasićena otopina soli). Nakon taloženja, predmetno stakalce se ukloni, brzo okrene, a film s jajima helminta koji su se na njemu zalijepili pregleda se pod mikroskopom (bez pokrovnog stakla). Ova metoda je dobra u identificiranju jaja svih nematoda i patuljastih trakavica. Jaja teških metilja; Većina cestoda i neoplođenih valjkastih crva slabo pluta, pa se ispituje i sediment. Da biste to učinili, nakon uklanjanja filma, tekućina iz staklenke se brzo iscijedi i nekoliko kapi se uzme iz sedimenta omčom ili pipetom, prenese na predmetno staklo, doda se kap glicerola radi bistrenja i pregleda pod mikroskop.
Metoda E. V. Kalantaryan(1938) je učinkovitija modifikacija Fullebornove metode. U njemu se otopina kuhinjske soli zamjenjuje zasićenom otopinom natrijeva nitrata, sp. težina je 1,39 (jedan volumen natrijevog nitrata se otopi u jednakom volumenu vode kada se kuha), film se uklanja nakon 20-30 minuta.
Koriste se i metode Fausta (E. S. Faust, 1939), Brudastova i dr. (1970) i drugi.
Kemikalije se koriste za polaganje jaja helminta. tvari koje otapaju masti i bjelančevine u izmetu.
Telemannova metoda (W. Telemann, 1908.) modificirana od strane Miyagawe (Y. Miyagawa, 1913.). U REDU. 5 g izmeta melje se u mortu ili staklenci, dodajući 5 ml etilnog etera i 50% otopine soli; smjesa se filtrira kroz žičano ili dlakasto sito u epruvetu i centrifugira. U epruveti se formiraju 3 sloja: na vrhu - eter s otopljenom masnoćom, ispod - klorovodična kiselina s otopljenim proteinskim tvarima, u sedimentu - netopljivi dijelovi izmeta i jaja helminta. Gornji slojevi se ocijede, a talogu se doda voda i centrifugira. Nekoliko kapi sedimenta prenese se na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom. Ova metoda može otkriti jaja svih vrsta helminta, ali ponekad su deformirana.
Ritchiejeva metoda (L. S. Kitchie, 1948). Formaldehid i eter koriste se za otapanje masti i proteina.
Za taloženje jaja helminta mogu se koristiti različiti deterdženti. Metoda filtracije u posebnim uređajima Bell postala je raširena u inozemstvu, koja se koristi za proučavanje ne samo izmeta, već i urina, krvi itd.
Postoji niz metoda koje kombiniraju principe flotacije i sedimentacije jaja. Tu spadaju metode S. A. Lanea, D. Rivasa, Gorkine i S. T. Darlinga. Jednu od ovih metoda flotacije-sedimentacije, kao i metodu sekvencijalnih odvoda, predložio je N.V. Demidov (1963, 1965) za istraživanje fascioliaze i dikrocelioze.
Kvantitativne metode
Stollova metoda(N. R. Stoll, 1926.). Decinormalna otopina natrijevog hidroksida ulije se u graduiranu široku epruvetu ili tikvicu (s dvije oznake: 56 i 60 ml) do prve oznake, fekalije se dodaju dok razina tekućine ne dosegne drugu oznaku, dobro se promiješa staklenim štapićem i , stavljajući 10 staklenih kuglica ili malih kamenčića, začepite i protresite 1 minutu. Brzo, da se suspenzija ne slegne, uzmite 0,075 ml smjese (0,005 g fecesa) graduiranom pipetom, prenesite na predmetno stakalce na koje je postavljena rešetka, pokrijte pokrovnim stakalcem i prebrojite jaja helminta. u preparatu pod mikroskopom; Množenjem dobivenog broja s 200 dobiva se broj jajašaca u 1 g izmeta. Za više točan rezultat prebrojite jaja u dvije ili više priprema i uzmite prosjek. Stollova metoda je neosjetljiva na blage invazije. Stoga se preporuča brojanje jaja u pripremljenim pripravcima razne metode flotacija ili sedimentacija, uz stalnu upotrebu jednakog dijela izmeta i jela istog volumena. Koristi se i gusti Kato razmaz.
Dabrova metoda(R. S. Beaver, 1950.). Priprema se standardni razmaz čija se debljina određuje elektrofotometrom, a zatim se broje sva jaja helminta u njemu.
Helmintolarvoskopske metode
Behrmannova metoda(G. Baermann, 1917.). 5-10 g svježe izlučenog izmeta stavi se na metalnu mrežicu u stakleni lijevak, s gumenom cjevčicom sa stezaljkom na užem kraju. Kako bi se izbjegla kontaminacija sedimenta česticama izmeta, preporučuje se staviti papir (na mrežicu) ili dodati životinjski ugljen ili kukuruzno brašno u izmet. Lijevak je napunjen Topla voda(t° 45-50°) dok ne dođe u dodir s izmetom. Zbog termotropizma, ličinke se aktivno kreću u Topla voda i postupno se nakupljaju u donjem dijelu lijevka, iznad stezaljke. Nakon 3-4 sata stezaljka se otvori, tekućina se iscijedi u 1-2 epruvete, centrifugira 2-3 minute, gornji sloj se ocijedi, a sediment pregleda na stakalcu pod mikroskopom.
Metoda identifikacije miracidija šistosoma. Izmet se ispire u mraku na temperaturi od 8-10°, talog se drži 45 minuta. na jakom svjetlu na t° 28°, zatim uliti u tamnu tikvicu sa slamkom sa strane. Miracidije su koncentrirane u prozirnoj bočnoj cijevi, odakle se mogu birati.
Za identifikaciju ličinki ankilostoma, također se koriste metode Fulleborna i sur.
Metode proučavanja drugih sekreta, kao i tkiva i organa
U REDU. 100 ml ispitivanog urina ostavi se stajati 30 minuta. u cilindar i, nakon uklanjanja gornjeg sloja, ulijte 10-15 ml sedimenta u epruvetu, centrifugirajte na 1500 okretaja u minuti 1-2 minute; ispituje se sediment. Preporučljivo je prikupiti cijelu dnevnu količinu urina.
Urogenitalna shistosomijaza dijagnosticira se identificiranjem miracidije. Dio svježeg urina se centrifugira 5 minuta, sediment se izlije u crno obojenu tikvicu, na čijem vrhu je zalemljena prozirna staklena cjevčica. Dodajte vodu u omjeru 1:5, 1:10 i stavite u termostat na 25-30° 2 sata. Miracidije koje izlaze iz jaja vidljive su kroz prozirnu cjevčicu golim okom u obliku točkica koje se brzo kreću. U kroničnom obliku shistosomijaze, bolesnici ispuštaju krv pred kraj mokrenja, ali se jajašca rijetko nalaze u urinu, pa se preporuča pribjeći biopsiji mjehura.
Ispitivanje sputuma. Sputum može sadržavati jaja paragonimusa, shistosoma, tominksa, ličinke migrirajućih nematoda i fragmente ehinokoknog mjehura. Cijeli isporučeni dio sputuma pažljivo se pregleda golim okom ili pod povećalom, odaberu se i pregledaju svi vidljivi komadići tkiva, nakupine hrđava boja itd.; zatim skenirajte cijeli dio mrljama. Gnojni ispljuvak prelije se jednakom količinom 0,5% otopine kaustične lužine, centrifugira i pregleda sediment.
Kod nekih helmintijaza opažaju se karakteristične promjene u ispljuvku. Kod paragonimijaze, na primjer, u ispljuvku se mogu naći nakupine jajašca u obliku žućkastih grudica, kao i velika količina sluzi, leukocita, crvenih krvnih zrnaca, alveolarnih stanica, Kurschmannovih spirala, elastičnih vlakana, Charcot-Leydenovih kristala. . Također su otkriveni karakteristični kristali u obliku dijamanta sa šiljastim krajevima. Prisutnost velikog broja eozinofila omogućuje razlikovanje paragonimiaze od tuberkuloze.
Ispitivanje sadržaja apscesa i punktata. U gnojnom sekretu apscesa, kao iu tumorima i cistama uklonjenim operacijom, mogu se naći helminti, njihovi fragmenti, ličinke i jajašca (ehinokok, alveokok, sparganum, cisticerk, dirofilarija, valjkasti crv, toksokara, paragonimus i dr.). Tehnika istraživanja je uobičajena; u nekim slučajevima, histološki rezovi se pripremaju iz tumorskog tkiva. Gnojni sadržaj može se liječiti Telemannovom metodom; bistra tekućina se ispituje na isti način kao duodenalni sadržaj, uz dodavanje sumpornog etera. Ehinokokna tekućina se centrifugira, a sediment se ispituje na prisutnost skoleksa i kukica; Preparati se boje karbolfuksinom po Ziehl-Neelsenu.
Krvni test. U krvi se nalaze mikrofilarije i ličinke migrirajućih nematoda. Uzima se kap krvi iz prsta ili ušne resice i pregledava svježe ili od njega pripremati pripravke.
Kap krvi stavi se na predmetno stakalce s kvadratićem vazelina i lagano pritisne pokrovnim stakalcem. Pod mikroskopom su vidljive mikrofilarije koje se kreću između krvnih stanica. Krv se može staviti između dva sloja ljepljive celulozne trake; mikrofilarije ostaju pokretne 6 sati; u potpuno osušenom preparatu mogu se razlikovati pod mikroskopom unutar 30 dana. Vrste mikrofilarija mogu se identificirati samo u obojenim razmazima ili debelim kapljicama. Pripremljeni preparati se suše, hemoliziraju i boje po Romanovsky - Giemsi, Wrightu, Ziehl-Neelsenu, Leishmanu, Papanicolaouu (vidi Wrightova metoda bojenja, Romanovsky-Giemsa metoda, Ziehl-Neelsenova metoda). Nakon otkrivanja mikrofilarija u kapi krvi obojenoj po Romanovsky-Giemsi, preparat se dodatno boji Hansenovim hematoksilinom; za 15-60 minuta. operite 2 minute. u tekućoj vodi. Ponovno obojeni pripravak diferencira se u 0,2% otopini soli; Ovojnica mikrofilarije obojena je blijedoljubičastom bojom, a jezgra tijela tamnoljubičastom bojom.
Za blage infestacije potrebno je ispitati 2-10 uzoraka krvi s antikoagulansom (npr. 5% otopinom natrijeva citrata) jednom od sljedećih metoda.
Knott-ova metoda (J. Knott, 1939.), modificirana od strane Markella i Vogea (E.K. Markell, M. Voge, 1965.). 2 ml krvi pomiješa se u epruveti za centrifugu s 10 dijelova 1% octene kiseline, centrifugira se 2 minute. pri 1500 o/min; površinski sloj se ocijedi, sediment rasporedi na nekoliko stakalca i pregleda pod mikroskopom. Preparati se mogu obojiti Romanovsky-Giemsa ili drugim metodama.
Bell metoda filtriranja (D. R. Bell, 1967). U aparaturi koja se sastoji od lijevka od nehrđajućeg čelika s pravokutnom rupom i membranskih filtara istog oblika, dimenzija 19 x 42 mm, veličine pora od 0,8 do 5 μm, krv je hemolizirana u mješavini od 1 ml deterdženta tipol i 9 ml otopine fiziol (za ubrzavanje filtracije uređaj se spaja na vakuum pumpu). Filter se fiksira u kipućoj destiliranoj vodi i boji Romanovsky-Giemsa ili Ehrlichovim vrućim hematoksilinom. Filter u boji se suši u eksikatoru ili u izopropil alkohol(uzastopno u 3 šalice), očišćeno na staklu s uljem za uranjanje i ispitano pod pokrovnim stakalcem. Obojeni pripravci traju nekoliko tjedana. Bellova metoda je najučinkovitija za kvantitativno računovodstvo mikrofilarije u krvi.
Također se koristi Goldsmid polividonska metoda.
Pregled kože. U koži možete pronaći mikrofilarije onchocerci i ličinke životinjskih helminta, uzrokujući kožni oblik larva migrans (vidi). Dijelovi kože ili materijal dobiven skarifikacijom uzimaju se s bedra, potkoljenice, stražnjice ili deltoidnog mišića. Komadić pokožice u obliku stošca podigne se entomološkom iglom i odsječe britvicom, pregleda na staklu u kapi fiziolne otopine. Na negativan rezultat svježi preparat ponovno se ispituje nakon 10 minuta; Larve su obično lokalizirane na rubovima preparata. Dobiveni materijal može se držati u 2 ml fiziol otopine 1-2 sata. i ispitati sediment. Preporuča se uzeti 5 presjeka kože od pacijenta.
Pripravci se mogu pripremati od krvi i tkivna tekućina, otpušten nakon snažnog stiskanja kriški. Kapi se boje prema Mayeru, Romanovsky-Giemsi ili Delafieldovom hematoksilinu.
Standardna metoda za kvantificiranje infestacija. Biopsirana površina kože diam. 3-5 mm i težine najmanje 1-4 mg, izvažite, izrežite na male komadiće i prebrojite ličinke pod mikroskopom u fiziol. otopina na predmetnom staklu; 1-4 ličinke u vidnom polju označene su znakom +, 5-9 ličinki znakom ++, 10-19 znakom +++, 20 ili više ličinki znakom + + + +. Pogodnije je provoditi kvantitativne izračune na obojenim pripravcima.
Testiranje na trihinelozu, cisticerkozu i šistosomijazu
Detekcija ličinki trihinele
Metoda kompresije. Uzima se komad bicepsa ili gastrocnemius mišića (blizu tetive). kirurški poštujući asepsu, razdvojiti iglama za seciranje u posebna tanka vlakna, istisnuti ih između dva stakalca u kapi glicerina tako da preparat bude tanak i proziran. Pod mikroskopom s tamnim vidnim poljem jasno su vidljive ličinke trihinele. Učinkovito je proučavati nekoliko dijelova mišića u kompresorijima koji se koriste u veterinarskoj medicini. praksi, posebno u specijalnim trihineloskopima.
Bechmanova metoda probave(G. W. Bachman, 1928.). 1 i zdrobljenih mišića prelije se sa 60 ml umjetnog želučanog soka (0,5 g pepsina; 0,7 ml koncentrirane klorovodične kiseline; 100 ml vode) i ostavi 18 sati. u termostatu na t° 37°; gornji sloj tekućine se ocijedi, talogu se doda topla voda (t° 37-45°) i ulije u Behrmannov aparat. Nakon sat vremena tekućina se ispusti u epruvetu, centrifugira i ispita sediment. Ako su ličinke zatvorene u ovapnjele kapsule, najprije se dekalcificiraju u otopini klorovodične, dušične ili sumporne kiseline.
Biotest. Komadići mišića koji se proučavaju daju se bijelim miševima ili štakorima. Nakon 2-3 dana u duodenalnom sadržaju mogu se naći spolno zrele trihinele, a nakon 2-3 tjedna ličinke u mišićima dijafragme i jezika.
Histološki presjeci. Dijelovi mišića fiksiraju se u Bouinovoj, Zenkerovoj ili drugoj tekućini; na uobičajeni način Presjeci se pripremaju na mikrotomu i boje Delafieldovim hematoksilinom.
Otkrivanje cisticerka
Komad ekstirpiranog mišića, vezivno tkivo itd. pregledaju se golim okom, pažljivo se izdvoji cisticerk - bjelkasta prozirna vezikula veličine 1-2 cm, zgnječi se između dva stakalca u kapi glicerina i pregleda pod mikroskopom. Za određivanje održivosti cisticerka izoliranih iz tkiva, oni se drže u 50% otopini žuči za fiziol. otopina u termostatu na t° 37°; za 10-60 minuta. glava vitalnog cisticerkusa okrenuta je prema van. Kalcificirani cisticeri prethodno se dekalcificiraju 4% otopinom dušične kiseline tijekom jednog sata.
Detekcija jajašaca šistosoma
U slučaju kroničnih oblika shistosomijaze, kada stvaranje granuloma sprječava oslobađanje jajašca iz tkiva u lumen crijeva ili u mokraćni put, koristi se biopsija rektalne sluznice, koja se izvodi posebnom žlicom pomoću proktoskopa, odabirom područja s vidljivom lezijom. Biopsirani komadić se zgnječi između dva stakalca i pregleda pod mikroskopom. Ako je rezultat negativan, komadići se bistre u 4% otopini kaustične lužine i iz njih se priprema histol. kriške. Biopsija sluznice jejunum proizvodi se oralno, a dobiveni materijal se ispituje metodom kompresije ili se iz njega izrađuju histol i rezovi. U nekim slučajevima genitourinarne shistosomijaze dijagnoza se može postaviti samo na temelju endovezikalne biopsije. U hepatolienalnom obliku shistosomijaze, biopsija iglom jetra; Iz dobivenog materijala pripremaju se histol i rezovi koji se ispituju pod fluorescentnim mikroskopom. Fluorescentni mikroskop s tamnim poljem također se koristi za ispitivanje jetrenog tkiva na jajašca šistosoma. Ako je ženski spolni trakt zahvaćen šistosomima, iscjedak se skuplja vaginalnim spekulumom ili se oštrom žlicom uzimaju komadići sluznice vrata maternice; dobiveni materijal se pregleda pod mikroskopom na staklu u kapi otopine fiziol.
Testiranje na enterobiazu i taeniazu
Perianalno struganje (preporuča se uzimanje navečer, 1 - 1,5 sat nakon što bolesnik ode u krevet ili ujutro prije toalete). Šibica odrezana koso i namočena u kap tekućine (fiziol, otopina, kuhana voda ili 2% otopina sode bikarbone) nanijeti na predmetno staklo, učiniti to pažljivo? struganje sa sluznice anusa i nabora oko njega (od sredine prema van). Sluz prikupljena na kraju šibice čisti se rubom pokrovnog stakla u kapljicu tekućine na predmetnom staklu i prekrivena istim pokrovnim staklom pregledava. Prilikom masovnih pregleda, kada se strugotine uzimaju u dječjim ili drugim ustanovama, upotrijebljena šibica stavlja se u kap tekućine na stakalcu, a nakon što se kapljica osuši, prekrije se drugim stakalcem i zamotana u laboratorij dostavlja u laboratorij. papira i učvrstite elastičnom trakom. Za proučavanje rektalne sluzi koriste poseban uređaj - Shakhmatovu ili Ziemannovu cijev, kojom uzimaju sluz iz rektuma i pregledavaju razmaze pod mikroskopom.
Metoda pamučnog štapića. Pacijenti dobivaju epruvetu s vatom na staklenom ili drvenom štapiću za ponijeti kući; ujutro pacijent briše perianalne nabore tamponom navlaženim prokuhanom vodom i stavlja ga u epruvetu s mala količina voda. U laboratoriju se brisevi ispiru u istoj epruveti novim dijelom vode, a nakon centrifugiranja ispituje sediment.
Hallova celofanska metoda (M. S. Hall, 1937.). Četvrtasti komad celofana pričvršćen je elastičnom trakom na staklenu šipku. Struganje se napravi suhim celofanom i stavi u epruvetu. U laboratoriju se celofan malo pomakne sa štapića i nakon što mu se škarama odreže vrh, izravna se na predmetnom staklu; navlažiti decinormalnom otopinom natrijevog hidroksida, prekriti pokrovnim stakalcem i pregledati pod mikroskopom.
Metoda Grahamove celulozne trake (S. F. Graham, 1941.). Traka celulozne trake prisloni se ljepljivom stranom na perianalne nabore ispitanika, zatim istom stranom na predmetno staklo i pregledava se bez pokrovnog stakla; Možete dodati kap toluena. V. V. Kaledin (1972) za ove je svrhe predložio korištenje celuloidnih diskova izrezanih iz ispranog rendgenskog filma i navlaženih glicerinom; diskovi se ispituju na predmetnom staklu u kapi silikatnog ljepila. Metoda celulozne trake također se može koristiti za ispitivanje dječjeg donjeg rublja.
Subungualno struganje. Rubovi nokta, ležište nokta i subungualni prostori se navlaže 0,5-1% otopinom kaustične lužine i brišu vlažnim pamučnim štapićima. Brisevi se stave u epruvete za centrifugiranje s istom otopinom, centrifugiraju i ispita sediment.
Metode proučavanja okolišnih objekata na jaja i ličinke helminta (sanitarne i helmintološke studije)
Istraživanja se provode kako bi se utvrdio stupanj kontaminacije okolišnih objekata s jajima i ličinkama helminta. Dobiveni podaci koriste se za ocjenu dostojanstva. stanje institucija i poduzeća i učinkovitost mjera poduzetih za borbu protiv helmintijaze.
Pri proučavanju stupnja kontaminacije različitih okolišnih objekata jajima i ličinkama helminta i procjeni njihove uloge u epidemiologiji helmintoza, važno je utvrditi ne samo broj pronađenih jaja, već i njihovu vitalnost i invazivnost, koja se utvrđuje. : a) po izgledu, pod mikroskopom; b) bojenje raznim bojama, uključujući luminiscentne; u pravilu se živa jaja i ličinke ne farbaju; c) uzgoj u optimalnim uvjetima do invazivnog stadija; d) infekcija laboratorijskih životinja (biološki test).
Studije vodovoda i kanalizacije. Za jednu studiju koristite 10-25 litara vode (rijeke, mora, ribnjaci, bazeni, vodovod) i 1-2-5 litara kanalizacije.
Metoda 3. G. Vasilkova (1941). Voda ili otpadna voda filtrira se kroz membranske ultrafiltere u Goldmannovom aparatu koji se sastoji od staklenog ili metalnog lijevka s filtrima spojenim preko prstenaste mlaznice na Bunsenovu tikvicu. Kako bi se ubrzao proces filtracije, na uređaj je spojena vakuum pumpa. Nakon filtracije, membranski filtri se ispituju pod mikroskopom, bistre s 50% otopinom glicerola; nakupljeni sediment se čisti i zasebno ispituje u obliku razmaza. Također se koriste filtarski uređaji drugih izvedbi.
Metoda G. Sh. Gudzhabidze i G. A. Yudina (1963.) za proučavanje kanalizacijske tekućine. 1 litra tekućine ostavi se 2 sata u Lisenkovom cilindru; dobiveni sediment (5-9 ml) obrađuje se kao u ispitivanju tla (vidi dolje).
Metoda N. A. Romanenko (1967). Na 1 litru otpadne tekućine stavljene u stakleni cilindar zapremine 1200-1500 ml dodajte 0,4-0,6 g aluminijevog sulfata ili željeznog klorida (u svrhu koagulacije, ubrzavanja procesa taloženja suspendiranih čestica) i nakon 40 minuta. smjesa se centrifugira 3 minute. pri 1000 o/min; gornji sloj se ocijedi, a za otapanje pahuljica dodajte 1-2 ml 3% -tne otopine klorovodične kiseline, zatim 150 ml zasićene otopine natrijevog nitrata. Sediment se ispituje kao i tlo.
Istraživanje tla
Kontaminacija tla jajima helminta utvrđuje se kako bi se identificirala žarišta helmintijaze i procijenila učinkovitost rada na njihovom poboljšanju.
Metoda 3. G. Vasilkova i V. A. Gefter (1948). 12,5 g tla pomiješa se u epruvetama (volumena 100 ml) od nehrđajućeg čelika ili mesinga s 20 ml 5% otopine kaustične lužine, dodajući 10 staklenih kuglica ili malih kamenčića. Epruvete se zatvore gumenim čepovima i mućkaju 20 minuta. u aparatu za mućkanje ili ručno. Nakon uklanjanja čepova, epruvete se centrifugiraju 3-5 minuta, površinska tekućina se iscijedi, u sediment se doda 60-80 ml zasićene otopine natrijevog nitrata i nakon temeljitog miješanja ponovno centrifugira 3-5 minuta. Ovaj površinski film s plutajućim jajima uklanja se dodirivanjem površine smjese složenom petljom (5-6 petlji povezanih na zajedničkoj šipki) i prenosi u čašu vode; pomiješati s istom otopinom, centrifugirati; Cijeli postupak se ponavlja najmanje 3 puta. Sadržaj čašice u koju se prenese film razrijedi se vodom i filtrira kroz membranske filtere koji se mikroskopom pregledaju u kapi glicerina.
Metoda 3. G. Vasilkova i V. A. Gefter, kako ju je modificirao A. A. Namitokov (1961.), razlikuje se od glavne metode po tome što se umjesto ispitivanja filmskih preparata koristi polovica sadržaja epruvete (svaki put se dodaje novi dio zasićena otopina natrijeva nitrata), filtrirati i pregledati filtre.
N. A. Romanenko (1968.) preporučuje ispitivanje uzoraka tla i kanalizacijskog mulja na jaja helminta pomoću aparata koji je predložio G. Sh. Gudzhabidze. 50 g tla temeljito se miješa 1 minutu. u 150 ml vode u centrifugalnim epruvetama (kapaciteta 250 ml) s posebnim lopaticama koje pokreće elektromotor. Smjesa se centrifugira 3 minute. pri 1000 okretaja u minuti, ispustite vodu i dodajte 150 ml zasićene otopine natrijeva nitrata, promiješajte i ponovno centrifugirajte 3 minute. Epruvete s uzorcima stave se u stalak, doda se otopina natrijevog nitrata dok se ne formira konveksni menisk, pokriju stakalcima (10 x 6 cm) i ostave 10-15 minuta, zatim se stakla skinu i pregledaju; postupak se ponavlja najmanje 4 puta.
Istraživanje ličinki helminta metodom Behrmanna (1917). 200-400 g zemlje stavi se u komad gaze na metalnu mrežicu (s rupama promjera 1-2 mm) postavljenu na široki dio staklenog lijevka postavljenog na tronožac. Na uski kraj lijevka zategnuta je gumena cijev sa stezaljkom. Lijevak se napuni toplom (t° 50°) vodom tako da donji dio mrežice sa zemljom dođe u dodir s vodom. Zbog termotropizma, ličinke aktivno puze u toplu vodu i, taložeći se, nakupljaju se u donjem dijelu gumene cijevi iznad stezaljke. Nakon 3-4 sata 50 ml sadržaja ispusti se iz lijevka u epruvetu, centrifugira i pregleda sediment.
Istraživanje povrća, voća i bobičastog voća
Proučavaju uglavnom povrće, bobice i voće bez kojih se jedu toplinska obrada. Metoda 3. G. Vasilkova (1948). 5-10 komada povrća ili voća (cca. 0,5 kg) ili 100-200 g zelja (zelena salata, mladi luk) nekoliko sati prelijemo vodom u staklenim teglicama širokog grla s brušenim čepovima i protresemo 10-20 minuta. . u aparatu za mućkanje ili ručno. Voda se ispusti, predmeti koji se proučavaju isperu se čistom vodom, a sva voda od pranja se filtrira u Goldmannovom aparatu; Filteri se ispituju čišćenjem glicerinom. Filtre možete nijansirati s 25% Lugolovom otopinom u glicerinu; u ovom slučaju, jaja helminta su obojena smeđa boja a lako ih je prepoznati među škrobnim zrncima, obojenim u Plava boja. Veliki sediment tretira se kao zemlja.
Proučavanje ispiranja s kućanskih predmeta i ruku. Kistom za ljepilo (ili štapićem od vate omotanim komadićem najlonske tkanine) namočenim u 2% otopinu sode bikarbone više puta se prijeđe preko predmeta ili ruku koje se ispituju, a zatim ispere istom otopinom ulivenom u epruvetu. U laboratoriju se kistovi i štapići ispiru čistom vodom; Sva voda za pranje se centrifugira i ispituje se sediment.
Metoda V. A. Gefter (1960). Učinkovitije je sakupljati prašinu s meke opreme pomoću usisavača spojenog na lijevak, čiji se rubovi sastoje od 2 odvojiva dijela: membranski filtar postavljen je na površinu donjeg dijela, prekriven metalnom ili plastičnom mrežom, a učvršćuje se stavljanjem gornjeg dijela lijevka. Sastavljeni lijevak spojen je gumenom cijevi na crijevo usisavača. Prašina se skuplja s predmeta 3 minute, nakon čega se filter uklanja i zamjenjuje novim. U laboratoriju se filtri pregledavaju pod mikroskopom, pročišćavaju glicerinom. Ako je sloj prašine na filtru velik, ostruže se i pregledava u obliku mrlja ili tretira kao zemlja.
Imunološke dijagnostičke metode
Mogućnost korištenja imunol. metode za dijagnosticiranje helmintijaze je zbog sposobnosti helminta da proizvode aktivne antigene koji utječu na imunokompetentne stanice domaćina i stimuliraju proizvodnju antitijela. Najučinkovitije imunodijagnostičke metode su kod crijevnih helmintijaza, kada izlučevine i ekskreti helminta, koji imaju antigensku aktivnost, ulaze izravno u krv domaćina. Imunološke reakcije koriste se za dijagnostiku askaridoza, trihineloze, filarijaze, shistosomijaze, ehinokokoze i alveokokoze, cisticerkoze, paragonimiaze, kompleksa simptoma larva migrans (toksokarijaza, angiostrongiloza) i dr. Koriste se različiti serolni testovi (reakcije precipitacije, reakcije aglutinacije, fiksacije komplementa). , fluorescentna antitijela ) i intradermalni testovi alergije. Antigeni se pripremaju iz ličinki i zrelih helminta korištenjem solnih ekstrakata homogenata svježe smrznutih ili liofiliziranih tkiva, kao i raznih biološki aktivnih tekućina (tekućina iz ehinokoknih mjehurića, trbušne tekućine valjkastih crva itd.). Budući da helminti imaju vrlo složenu antigenu strukturu i da njihov antigenski mozaik sadrži komponente i pojedinačne determinante koje unakrsno reagiraju s drugim vrstama helminta, bakterija i antigena domaćina, razvijaju se metode za njihovo pročišćavanje od nespecifičnih komponenti. Provodi se frakcioniranje različite metode: gel filtracija u kolonama sa Sephadexom, kromatografija ionske izmjene na DEAE-Sephadexu, obrada kiselinama itd. Frakcijski antigeni obično imaju veću specifičnost od cijelih ekstrakata, ali im je aktivnost približno ista. Sve se više koriste imunodijagnostičke metode. Reakcije se koriste ne samo za najpotpunije i rano otkrivanje pacijenata, ali i proučavati žarišta i proučavati epidemiologiju helmintijaza.
Serološke reakcije. Reakcija mikroprecipitacije na živim ličinkama koristi se za dijagnosticiranje nematoda - preimaginalne faze ascariasis, ankilostomidoze i trihineloze. Reakcija postaje pozitivna 5-10 dana nakon infekcije (askaridoza, ankilostomidoza) i traje 90-100 dana. Antigen su žive ličinke nematoda izolirane iz tkiva eksperimentalno zaraženih laboratorijskih životinja. Izolirane ličinke se temeljito isperu od bjelančevina domaćina sterilnim fiziolom, otopinom i destiliranom vodom i to po 10-15 primjeraka. stavi se pomoću Pasteurove pipete na sterilno predmetno staklo s jažicom. Nanesite 2-3 kapi ispitivanog seruma, pokrijte sterilnim pokrovnim staklom, stavite u vlažnu komoru (Petrijevu zdjelicu obloženu navlaženim filter papirom) i ostavite 24-48 sati. u termostatu na t° 37°. Ako je reakcija pozitivna, pod malim povećanjem mikroskopa vidljive su sivkasto-bijele, blago opalescentne mase precipitata sferičnog ili cik-cak oblika oko oralnog i analnog otvora ličinke. Učinkovitost reakcije doseže 85-95%.
Reakciju prstenaste precipitacije razvio je V.P. Pashuk (1957.) za dijagnozu trihineloze. Reakcija postaje pozitivna 2-3 tjedna bolesti. Njegova učinkovitost doseže 80-90%. Antigen je praškasti ekstrakt ličinki osušenih na 35°, izoliranih iz mišića zaraženih životinja. U epruvetama prom. 0,5 cm, ulijte 0,1 ml svakog razrjeđenja antigena i na njega pažljivo naslagajte (ili spustite na dno) jednaku količinu ispitnog seruma kako se tekućine ne bi pomiješale. Epruvete se drže 30 minuta. u termostatu na t° 37°, a zatim 30-60 minuta. na sobnoj temperaturi. Uz pozitivnu reakciju, na granici između antigena i seruma pojavljuje se bjelkasti nježni prsten koji se mućkanjem lako raspada.
Reakcija taloženja u gelu prema Ouchterlonyju (O. Ouchterlony, 1949) u mikromodifikaciji A. I. Guseva i V. S. Tsvetkova predložili su I. A. Ginovker, E. A. Zabozlaeva, A. V. Doronin (1970) za dijagnozu ranih faza opisthorchiasis. Prema preliminarnim podacima, njegova učinkovitost je 87%. Antigen je ekstrakt homogenata svježe smrznutog spolno zrelog opisthorchisa izoliranog iz jetre mačaka.
Razvijena je reakcija neizravne hemaglutinacije (vidi) s dijagnostikumom - suspenzijom formaliziranih i taniziranih ovčjih eritrocita, senzibiliziranih ehinokoknom tekućinom.
L. N. Stepankovskaya (1972) za dijagnozu ehinokokoze i alveokokoze.
RNGA s dijagnostikumom iz formaliziranih ovčjih eritrocita, senzibiliziranih ekstraktom homogenata svježe smrznutih cisticerka svinjske trakavice, predložio je L. M. Konovalova (1973) za dijagnozu cerebralne cisticerkoze; učinkovit je u 85% slučajeva.
RNGA s ascaris diagnosticumom predlaže se za dijagnosticiranje preimaginalne faze ascariasis.
Reakcija fiksacije komplementa (vidi) provodi se prema uobičajenoj metodi i koristi se za dijagnozu trihineloze i cisticerkoze.
Metoda luminiscentnih antitijela (indirektna metoda). Ovu metodu, s odmašćenim suhim homogenatom cisticerka svinjske trakavice kao antigenom fiksiranim na stakalcu, razvio je JI. M. Konovalova (1973) za dijagnozu ljudske cisticerkoze. Ista reakcija s histolom, rezovima ličinki trihinele kao antigenom razvijena je za dijagnozu trihineloze.
E. S. Leikina, V. A. Gefter.
